Способ разделения жидкости, содержащей вещества крови

(19 51) А 61 И у ее Линд ютвогаулъ 088.8) ТЬе Асайаа ндреева А.ППолякова А.С, нативного гло-. ико-химичесгематол.пес.54. воГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ(75) Пауль Йеран Сигвар,Тюрина Г.В., Левина А.Аи Юлимак В,М,получениебина и изучение его физких свойств. -"Проблемырелив.крови", 1970, Р 9(54)(57) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ ЖИДКО СОДЕРЖАЩЕИ ВЕЩЕСТВА КРОВИ, путем охлаждения раствора гемоглобгча, бавления осадителя, фильтрации по ченной смеси, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью упрощения цесса, раствор гемрглобина охлажд до температуры +8- -20 оС, добавля этанол до концентрации 40-70, до дят рН до 2,5-4,5, добавляют неор нические соли натрия или калия, п пу красных кровяных телец, выдели шиеся агломераты отделяют от раст ра глобина известным образом.1071208, Изобретение относится к способамотделения из жидкости, содержащей вещества крови, производных гемоглоби"на - соединений железа от протеина,главным образом.глобина, который мо"жет. быть впоследствии использован или 5в пищевой промышленности в связи сего питательной ценностью, или присохранении его функциональных свойствв качестве структурного агента.Известен лабораторный способ разделения жидкостей, содержащих вещества крови (соединения железа и глобин)путем экстракции, при которой используют такие растворители, как метилэтилкетон, ацетон и диметилформамид Е 11Однако получаемый по укаэанномуспособу продукт непригоден для использования в качестве корма для скота или в качестве пищевого продукта.Наиболее близким к предлагаемомуявляется способ разделения жидкости,содержащей вещества крови путем охлаждения раствора гемоглобина, добавления осгдителя, Фильтрации полученной смеси 123.Однако известный способ достаточ-но сложен.Цель изобретения - упрощение процесса.Поставленная цель достигается тем,З 0что при осуществлении способа разделения жидкости, содержащей вещества:крови, путем охлаждения раствора гемоглобина, добавления осадителя, фильтрации полученной смеси, раствор ге- З 5моглобина охлаждают до температуры+8 - -20 ОС, добавляют этанол до концентрации 40-70, доводят рН до 2,54,5, добавляют неорганические солинатрия или калия, пульпу красных кро 40вяных телец, выделившиеся агломератыотделяют от раствора глобина известным образом.П р и м е р 1. Пульпу красныхкровяных телец из крови с бойни вмес те с цитратом натрия в качествеантикоагулирующего агента, обрабатывают этанолом и водой таким образом,чтобы вызвать разрыв клеточных мембран. Фрагменты. клеточных мембранудаляют центрифугированием. Получают 50раствор гемоглобина, содержащий 15сухого вещества, в основном гемоглобина, 33 об. этанола, остальное воду. Значение рН составляет 5,3,цвет темно-красный. , 553 г этого раствора гемоглобинаохлаждают до температуры -12 фС в химическом стакане, и в раствор капают при непрерывном перемешивании иохлаждении раствор, состоящий из 60. 0,5 мл 1 М соляной кислоты и из 10 мл96-ного этанола при -12 ОС. Последобавления раствора темПература со-,ставляет -12 оС, а значение рН 3,1.Содержание этанола в смеси 78 об 65 Значение рН определяют таким образом, что образцы смеси разбавляют трехкратным объемом воды перед определением.Смесь, имеющую черно-коричневый цвет, центрифугируют при 27000 я в течение 10 мин в центрифуге Сорвалла (ЯогчаИ) при температурео-12 С и получают черную пасту в количестве 1,5 г с содержанием сухих веществ 2,9, и светло-коричневую жидкость поверхностного слоя. Из жидкости поверхностного слоя осаждают светло-серый осадок, добавляя воду до 50 и доведя значение рН до 7,5. Температуру поддерживают прио"7 С. Осадок удаляют центрифугиро. ванием и получают серую пасту в количестве 0,95 г с содержанием сухих веществ 28.Из результатов следует, что серая паста состоит из протеина с содержанием железа примерно 5 от общего содержания железа в гемоглобине.П р и м е р 2. 3 г раствора гемоглобина (с характеристиками как в примере 1) при -7 С добавляют по каплям при непрерывном перемешивании и охлаждении в химический стакан с раствором 0,45 мл 1 М соляной кислоты, 7,5 мл воды и 10 мл 96- ного этанола при -7 оС; После добавления температура стает -66 С, а значение рН составляет 3,3. Содержание этанола в смеси доводят до 50 обСмесь, имеющую черно-коричневый цвет, центрифугируют при 10000 в течение 10 мин и получают черную пасту с количеством сухого вещества 0,03 г и светло-желтую жидкость поверхностного слоя.Жидкость поверхностного слоя разделяют на две равные части. Из одной части. осаждают при рН 7,5 серый осадок, который после выделения центрифугированием и сушки дает 0,12 г сухого вещества.Другую часть смешивают с 5 мл этанола и 0,2 мл хлористого натрия в 10-ном водном растворе при непрерывном перемешивании и охлаждении и подвергают ультрафильтрации при температуре -6 С в ячейке Амикон Диафлоу (.Ав 1 срп РаГйо) с мембраной ХМ 300. Получают фильтрат светло- желтого цвета, при этом мембрана покрыта темной пленкой. Из фильтрата после разбавления водой до содержания воды 50 и при рН 7,5, осаждают осадок, цвет которого от белого до светло-серого, из которого после выделения центрифугированием и сушки получают 0,11 г сухого вещества,П р и м е р3. 3 г раствора гемоглобина (с такими же характеристиками, как и в примере 1) при 4 ОСдобавляют по каплям при непрерывномперемешивании и охлаждении в химический стакан с раствором 0,45 мл ледяной уксусной кислоты, 0,8 мл воды и5 мл 96-ного этанола при -4 С, .После добавления температура составляет-4 С, а значение рН 3,8. Содержаниеэтанола в смеси составляет 62 обЧерно-коричневую смесь центрифугируют при 27000 8 в течение 10 мини получают черную пасту с содержанием сухого вещества 0,11 г и светло-желтую жидкость поверхностногослоя.Из жидкости поверхностного слояпосле разведения водой до содержания воды 50 и при значении рН 7,5осаждают осадок, имеющий цвет отсветло-коричневого до серого, из которого после центрифугирования исушки получают 0,25 г сухого вещес-.тва.П р и м е р 4. 3 г раствора гемоглобина (с такими же характеристиками, как и в примере 1) при -8 Сдобавляют по каплям при непрерывномперемешивании и охлаждении в химический стакан с раствором 0,45 мл1 М соляной кислоты, 0,2 мл 20-ноговодного хлористого натрия и 10 мл96-ного этанола при -15 С. Последобавления температура составляет З 0-10 С, а значение рН 3,3. Содержаниеэтанола в смеси составляет 77 обСмесь черно-коричневого цветацентрифугируют при 10000 Р в течение 10 мин и получают черную пасту 35.с содержанием сухого вещества 0,09 г:и жидкость поверхностного слоя,имеющую цвет от светло-желтого досветло-коричневого.1Из жидкости поверхностного слояпосле разбавления водой до содержания воды 50 при значении рН 7,5,осаждают серый осадок, из которогопосле центрифугирования и сушкиполучают,0,30 г сухого вещества. 45П р и м е р 5. 6 мл 96-ногоэтанола добавляют по каплям при,непрерывном перемешивании и охлаждении в химический стакан с 3 г раствора гемоглобина (с такими же характеристиками, как и в примере 1),Температура составляет -10 С. В этусуспензию гемоглобина капают при непрерывном перемешивании и охлаждении 0,4 мл 1 М соляной кислоты в3 мл 96-ного этанола. После добавления температура стает -10 ОС, а,значение рН 3,4. Содержание этанола в смеси составляет 77 об,.Черно-коричневую смесь центрифу. гируют при 20000 я 10 мин и получают 60черную пасту с содержанием сухих веществ 0,08 г и светло-желтую жидкостьповерхностного слоя.0,19 мл 0,5 М гидрата окиси натрияв 10 мл 96-ного этанола добавляют 65 по каплям при непрерывном перемешива- нии и охлаждении в жидкость поверхностного слоя. Последобавления температура составляет -10 ОС, а значение рН 4,35. Содержание этанола в смеси составляет 85 обПолученный осадок, фракцию протеина крови с адсорбированными соедине" ниями железа удаляют центрифугирова" нием и получают черно-красную пасту с содержанием сухого вещества 0,08 г.Из очень слабо желтоватоокрашенной жидкости поверхностного слоя после добавления воды до содержания воды 50 и увеличения рН до 7,5 при непрерывном охлаждении, осаждают светло-серий осадок, из которого после отделения центрифугированием и сушки получают 0,22 г сухого вещества.П р и м е р 6. 3 г раствора гемоглобина (с такими же характеристиками, как и в примере 1) при -8 фС добавляют по каплям при непрерывном перемешивании и охлаждении в химический стакан с раствором 0,45 мл 1 Ы соляной кислоты и 10 мл 96-ного этанола при -8 С. После добавления температура стает -8 ОС, а значение рН 3,3, Содержание этанола в смеси составляет 78 обЧерно-коричневую смесь центрифугируют при 10000 8 10 мин, в результате чего получают черную пасту с содержанием сухого вещества 0,06 г и светло-коричневую жидкость поверхностного слоя.1 мл суспензии с 0,1 г пульпы красных кровяных телец в равных объемах этанола и воды при -8 С и при рН 5,3 добавляют по каплям при непрерывном перемешивании и охлаждении в жидкость поверхностного слоя. После добавления температура стает -8 ОС,а содержание этанола составляет 75 об смесь центрифугируют при 10000 10 мин, в результате чего получают небольшое количество черной пасты и жидкость поверхностного слоя, имеющую цвет от светло-коричневого до светло-желтого. Из жидкости поверхностного слоя осаждают тем же способом, как и в примере 5, светлосерый осадок, из которого после выделения центрифугированием и сушки получают 0,25 г сухого вещества.П р и м е р 7. 3 г раствора гемоглобина (с теми же характеристиками, как и в .примере 1) при -бфС добавляют по каплям при непрерывном перемешивании и охлаждении в химический стакан с раствором 0,50 мл 1 М соляной кислоты, 8 мл 96-ного, этанола и 2 мл глицерина при -8 ОГ, После добавления температура стает -8 С, а значение рн 3,1. Полное ко1071208 60 ВНИИПИ Заказ 11713/55 Тираж 688 Подписное Филиал ППП фПатентф, г. ужгород, ул.Проектная, 4 личество этанола и глицерина в смесисоставляет 82 об. Черно-коричневую смесь центриФугируют при 27000 8 в течение10 мин и получают черную пасту,содержащую сухого вещества 0,09 г .5и жидкость поверхностного слоя,имеющую цвет от светло-коричневогодо светло-желтого.Из жидкости поверхностного слояосаждают таким же способом, как и 10в примере 5, светло-серый осадок,изкоторого после выделения центрифугированием и сушки получают 0,26 г сухого вещества.АналоГичным образом проводятсяопыты с добавлением этиленгликоля,пропанола, изопропанола, метанола,ацетона и этилацетата в тех же количествах, что и с добавкой глицери-,на. Результаты такие же.П р и м е р 8, В раствор 20 мл96-ного этанола и 1,1 мл 1 М солянойкислоты, при -12 С добавляют по каплям при непрерывном перемешивании иохлаждении 5 г раствора гемоглобина(с теми же характеристиками, что ив примере 1)После добавления значение рН стает 2,9, а температура-12 С. Содержание этанола в смесисоставляет 80 об Смесь черно-коричневого цвета центрифугируют при 3027000 к 10 мин и получают 2,2 гчерной пасты с содержанием сухоговещества 2,7 и светло-коричневуюжидкость поверхностного слоя. Жидкость впоследствии приобретает геле- З 5образную консистенцию.В жидкость поверхностного, слоядобавляют по каплям при непрерывном перемешивании и охлаждении 70 мл,холодного 96-ного этанола, а после 40этого 0,8 мл 40-ного раствора сульфата аммония (водный раствор) и 8 млводы. Температура после добавлениястает -бфС. Осадок центрифугируютпри 8000 8 в течение 10 мин и получают 1,7 г белой пасты с содержанием сухого вещества 36.П р и м е р 9. 3 г раствора ге-моглобина (с теми же характеристиками, что и в примере 1) при +8 ОС добавляют по каплям при непрерывном 50перемешивании в химический стакан сраствором 0,80 мл 1 М соляной кислоты, 2 мл воды и 10 мл 96-ного этанола при +2 С. После добавления температура составляет +8 ОС, а значение 55рН 2,5. Содержание этанола в смеси.составляет 67 обЧерно-коричневую смесь центрифугируют при 27000 8 в течение10 мин при +8 С и получают черную пасту с содержанием сухих веществ0,06 г и желтую жидкость поверхностного слоя,Из жидкости поверхностного слояосаждают таким же образом, как впримере 5, светло-серый .осадок, изкоторого после выделенияцентрифугированием и сушки получают 0,27 гсухого вещества.П р и м е р 10. 3 г раствора(гемоглобина (с теми же характеристиками, что и в примере 1) добавляют по каплям при непрерывном перемешивании и охлаждении в химическийстакан с раствором 0,35 мл 2 М соляной кислоты и 5 мл чистого этанола при -12 оС. После добавлениятемпература стает -12 С, а значение рН 2,9. Содержание этанола всмеси составляет 71 об Черно-коричневый раствор центрифугируют при27000 к 10 мин при -12 ОС и получаютчерную пасту с содержанием сухоговещества 0,07 г и светло-желтуюжидкость поверхностного слоя.15 мл 96-ного этанола при -18 ОСдобавляют по каплям в жидкость поверхностного слоя при непрерывномперемешивании и охлаждении. После добавления температура составляетОС,.Содержание этанола в смеси составляет 86 об,.После 10 ч при -18 С смесь центрифугируют, как указано выше, иполучают черно-красную пасту с содержанием сухого вещества 0,08 г.Очень слабо окрашенную светложелтую жидкость поверхностного слояразделяют на две равные части.Из одной части осаждают таким жеобразом, как и в примере 5, осадок,имеющий цвет от светло-серого добелого, из которого после выделенияцентрифугированием и сушки получают0,11 г сухого вещества.Другую часть подвергают ультрафильтрации в ячейке Амикон Диафлоу(Ащ 1 соп 01 аГ 1 о) с мембраной РМ 10при -8 С, Концентрат смешивают с10 мл воды при 0 С и отфильтровывают.Раствор протеина, лишенный таким образом этанола, нейтрализуют, высушивают и получают 0,06 г сухого вещества.Изобретение позволяет испольэоватьпростой технологический процесс, который является технически и экономически выгодным способом отделениякомпонента железа от глобина, позволяющим использовать глобин для корма или в качестве продукта питания,а компонент железа - в пищевой и вфармацевтической промышленностях.