Питательная среда для выращивания туляремийного микроба

: РЕСПУБЛИК 12 й 120 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОЧКРЫТИИ ЗОБРЕТЕНИЯТЕЛЬСТВУ АВТОРСКОМУ(71) Научно-исследовательский. противочумный институт Кавказа и Закавказья(53) 576.8,093.1(088.8)(56) 1. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методамисследования. Под ред. Биргера И.О.И "Иедицина", 1973, с. 80.2. йа 91 е 5,С., Апдегвоп Р.Е., агу й.О. СЬеппса 11 у д 1 йпед щед 1 цвГогйЬе дгоытЬ.оГ Разйецге 11 а йц 1 агепзе 1 в. . Васйегюо 1 о 9 у, 19601чо 1. 79, й 2, р. 566-571. 33735 29.12 23.04 В.Г,И и ч а,Сол Э ы она колинтов,(54) (57) ПИТАТЕЛЬ ЩИВАНИЯ ТУЛЯРЕИИЙН держащая .1-аргинин 1"гистидин НС 1, д 1 цин, Н-лизин НС 1,лин, д 1-треонин, 1 КНРО йаС 1, И 950,форнои кислоты, тиАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАОГО ИИКРОБА, соНС 1, 1-цистен НС 1изолейцин, 1-лейд 1-метионин, 1-про тирозин, 1-валин, ; 7 НО, соль фосамин, глюкозу и ОПИСАНИ.ЯО;,1013470 дистиллированную воду, о т лю щ а я с я тем, что, с целью уфицирования среды, она дополнително содержит пантотенат кальциякачестве соли фосфорной кислотсодержит йа 2 НР 04 при следующемчественном соотношении компонег/л дистиллированной Воды:1-Аргинин НС 1 0,15-0,251-Цистеин НС 1 1,3-171-Гистидин НС 1. 1,8-2,2д 1-Иэолейцин 0,12-0,171-Лейцин 0,35-0,451-Лизин НС 1 0,35-0,45д 1-Иетионин 0,45"0,551"Пролин 0,9-1,1О -Треонин .1,9-2, 11-Тирозин 0,15-0,251-Валин - 0,75-0,85КНРО 4 . 2,6-3,1йай 1 - 45"5 в 5И 9504 7 НКО - 0 ф 03" 0 е 05Хиаминр 015-о,ог 5Пантотенаткальция 0,04-0,06Глюкоза ;14,0-16,ПЦелью изобретения является унифицирование средыЦель достигается тем, что пита- З 0 тельная. среда для выращивания туляремийного микроба, содержащая 1-аргинин НС 1, 1-цистеин НС 1.1-гистидин НС 1, д 1-изолейцин, 1-лейцин, 1-лизин НС 1, д 1-метионин, 1-пролин, д 1-треонин, 1-тирозин, 1-валин, КНРО ь МаС 1, МфО 714 О, соль фосфорной кислоты, тиамйнь глюкозу и дистиллированную воду, дополнительно содержит пантотенат кальция, в качестве соли фосфорной кислоты она содержит МаНРО при следующем количественном соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:1-Аргинин НС 1 0,15-0,251-Цистеин НС 1 1,3-1,71-Гистидин НС 1,8"2,2д 1-Изолейцин О 12-0 171-Лейцин 0,35-0,451-Лизин НС Оь 35-0,45д 1-Метионин 0,45-0,551-Пролин 0,9-1,1д 1-Треонин 1,9-2,11-Тирозин 0,15-0,251-Валин 0,75-0,85КН,РО+ 2,6-3,1МаС 1 4,5-5,5МОЬО ь 7 Н О 0,03-0, 05М а 2 НгО 45 Изобретение относится к микробио:,логии и касается синтетических пи"тательных сред для выращивания тупя"ремийного микроба.Известна питательная среда для 5выращивания туляремийного микробакровяной глюкозо-цистиновый пи 1 ательный агар "Д" 1 3Однако на этой питательндй средене всегда возможно проводить мноь 0гие бактериологические, генетическиеи биохимические исследования туляре"мийного микроба,Наиболее близкой к изобретению является питательная среда для выращива 5ния туляремийного микроба, содержащая1-аргинин НС 1, 1-цистеин НС, 1-гистидин НС 1, д 1-изолейцинь 1-лейцин,лизин ЧС 1, д 1-метионин, 1-пролин,д 1"треонин, 1-тирозин, 1-валин, 20КН 2 РО+, МаС 1, МдБОь 7 Н, О, соль Фосфорной кислоты, тиамин, глюкозу и дистиллированную воду2 1,Однако на известной питательнойсреде невозможно получить рост широ" 25кого круга туляремийных микробов. Тиамин Оь 05-Оь 025Пантотенаткальция 0,04-0,06Глюкоза 14,0- 16,0Готовят питательную среду следу-,ющим образом,П р и м е р 1, Берут 1,5 г двузамещенного Фосфорнокислого натрия(Ма НРО, ) и в него заливают 375 млдистиллированной воды. Эту смесьподогревают на водяной бане до 90 Си перемешивают до полного растворения. Затем 2,6 г однозамещенногофосфорнокислого калия (КНРО ) заливают 625 мл дистиллированной воды,эту смесь подогревают на водянойбане до 70 Г и перемешивают до полного растворения. Затем растворыфосфорнокислых солей обьединяют,добавляя к натриевой соли солькалия, при этом образуется калиево-натриевый фосфатный буфер,рН -6,6, который является основойдля получения жидкой питательнойсинтетической среды. Для получения плотной синтетической питательной среды в калиево-натриевый фосфатный буфер добавляют 10-15 г/лагар-агара,Агар-агар вносят в полученныйкалиево-натриевый фосфатный буфери расплавляют его на кипящей водяной бане (100 оС) в течение 20 мин.Затем отвешивают аминокислоты, г:1-Аргинин НС 1 О, 151-Цистеин НС 6 1,31-Гистидин 1,8д 1-Изолейцин 0,241-Лейцин 0,351-Лизин НС 0,35д 1-Метионин 0,9:1-Пролин 0 9д 1"Треонин 3,81"Валин Оь 75Каждую из навесок аминокислотрастворяют поочередно в 10 мл приготовленного ранее калиево-натриевого Фосфатного буфера, нагреваютдо 90 оС с помешиванием до полногорастворения, сливают в одну емкостьобьемом более 1 л и перемешивают,Затем к 0,15 г 1-тирозина добавляют 2 мл 1 н. едкого натра (МаОН), после ътого к навеске 1-тиродина с 1 н. едким натром добавляют 40 мл приготовленного ранее Фосфатного буфера, нагревают до 90 С при помешивании и сразу же после его раст3 10134ворения сливают в емкость со смесьюаминокислот,Потом растворяют 4,5 г хлористо, го натрия (МаС 1) в 20 мл фосфатного буфера при нагревании до 70 С ипомешивании; затем 0,03 г сернокислого магния (М 050 ), 0,015 г тиамина,0,04 г пантотената кальция - каждуюиз навесок растворяют в 2 мл дистиллированной воды при нагревании до щ70 С и помешивании, Растворенныеокомпоненты добавляют поочередно с помешиванием к смеси растворов аминокислот.После этого объем среды доводятдо 1 л приготовленным ранее Фосфатным буфером и стерилиэуют в автоклаве в течение 30 мин при 0,5 атм. Затем готовят 353-ней раствор глюкозы.Для этого берут 14,0 г глюкозы, растворяют в 40 мл дистиллированнойводы и стерилизуют в автоклаве при .режиме 1 атм в течение 5 мин.П р и м е р 2. Берут 1,8 г двузамещенного Фосфорнокислого натрия(йа 2 НР 04), заливают 375 мл дистиллированной воды и эту смесь подогреваютна водяной бане до 90 оС и перемеши.вают до полного растворения. Затем3,1 г однозамещенного фосфорнокислого калия (КНРО) заливают 625 млдистиллированнои воды, эту смесь подогревают на водяной бане до 70 Си перемешивают до полного растворения. Затем растворы Фосфорнокислыхсолей объединяют, образуя калиево-нат-фриевый Фосфатнь% буфер, рН -6,6, Дляполучения плотной синтетической средыприменяют агар-агары. Агар-агары вносят в полученный калиево-натриевыйФосфатный буфер рН,6 и расплавляют на кипящей водяной бане (100 С )в течение 20 мин. Затем отвешиваютаминокислоты, г:1-Аргинин НС 1 0,251-Цистеин НС 1 1 71-Гистидин 2,2д 1-Изолейцин 0,341-Лейцин 07451-Лизин НС 1 0,45д 1-Иетионин 1,1501-Пролин 1,1д 1-Треонин 4,21"Валин 0,85Каждую из навесок аминокислот растворяют в 40.мл приготовленного ра"нее калиево-натриевого фосфатного буФера при нагревании до 90 С с помешиванием до полного растворения и 70 4сливают в одну емкость объемом более 1 л.Затем к 0,25 г 1-тирозина добавляют 2 мл 1 н, едкого натра, послеэтого к навеске 1-тироэина с 1 н.едким натрием добавляют 40 мл приго"товленного ранее Фосфатного буфера,нагревают до 90 оС при помешиваниии сразу же после его растворениясливают в емкость со смесью аминокислот. Потом растворяет 5,5 г хлористого натрия в 20 мл Фосфатного бу"фера при нагревании до 70 С и помешивании, затем отвешивают 0,05 г сер"нокислого магния (И 9 ЬО ) 0,025 гтиамина, 0,06 г пантотената калиякаждый растворяют в 2 мл дистиллированной воды при нагревании до 70 Си помешивании, Растворенные компоненты добавляют поочередно с помешиванием к смеси растворов аминокислот.После этого объем среды доводятдо 1 л приготовленным ранее фосфатным буфером и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 0,5 атм(110,8 С), Затем готовят 40 Ж-ныйраствор глюкозы. Для этого 16,0 гглюкозы растворяют в 40 мл дистил-,лированной воды и стерилиэуют в автоклаве в течение 5 мин при 1 атм.Стерилизованную питательную сре"ду и раствор глюкозы хранят раздель- но в холодильнике при 3-6 С до исполь"озования., Срок хранения.до 60 сут.Предлагаемую питательную среду используют следующим образом,Перед посевом берут жидкую средуи в нее вносят 40 мл приготовленного35 или 403-ного раствора глюкозы, взависимости от концентрации компонентов по граничным пределам. Затем разлива чт во флаконы или колбы по 1050 мл. В отличие от известной жидкойпитательной среды выращивание на предлагаемой жидкой среде проводят безпринудительной аэрации,Бсли посевы проводить на плотнуюпитательную среду, то ее предваритель"но расплавляют на водяной бане, затемв нее вносят 40 мл 35"40-ного раствора глюкозы и перемешивают. После этого среду разливают в пробирки по 5 мли скашивают или в чашки Петри по 25"30 мл. Посев производят на застывшие агаровые поверхности, Плотнаясреда прозрачная, что позволяет четконаблюдать йорфологию колонии.Предложенная питательная среда,позволяет обеспечить стабильный и до.В 1013470 4 статочный рост туляремийного микроба новидности этого возбудителя - голарк- (2"310 м к/мл среды ) по оптическо- тическую, неарктическую и среднеазиму стандарту мутности ТИСХ кишечному) атскую расы. Выход бакгерий на жидкой среде полу- Рост всех рас туляремийного микро- чают на 3 порядка выше посевной дозы, э ба на предлагаемой среде позволяет а также получают и сплошной рост на изучать его свойства на более высоком плотной среде. уровне, а именно таких как особенноПредлагаемая питательная среда сти неготипа, путей метаболизма, акобеспечивает достаточный рост иссле- тивности ряда Ферментов, знание этих дованных штампов туяяремийного микро свойств имеет практическое значение ба, представляющих все известные раз- для борьбы с этой инФекцией.Составитель С,Малютина Редактор О,Половка Техред О.Неце Корректор М.Демчик Заказ 2942/34 Тираж 521 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, 3-35, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4