Способ дифференциации антигенов на т-зависимые и т независимые

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 200581 (21) 3290132/28-13 811 М, Кл,з А 61 В 10/ОО с присоединением заявки Йо Государственный коинтет СССР. но аелаи изобретений н открытий(0888) Опубликовано 1503.83. Бюллетень М 10 Дата опубликования описания 150383 И.НМоргунов, Е.Г, Гаркавая и В.Г. Бордонос(72) Авторыизобретения ФКиевский. ордена Трудового Красного Знаменимедицинский институт(54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ АНТИГЕНОВ НА Т-ЗАВИСИМЫЕ И Т-НЕЗАВИСИМЫЕ Изобретение относится к медицине, а именно иммунологическим методам исследования,Известен способ дифференциации антигенов на Т-зависимые и Т-независимые путем применения культуры клеток 1 п чего, Для этого используют чистую популяцию Т- или В-лимфоцитов и измеряют интенсивность синтеза ДНК; в них по включению Нз тимидина (1).Однако известный способ не обеспечивает достоверности получаемых результатов в связи со сложностью выделения чистых Т- и В-клеточных популяций лимфоцитов и их последующей идентификации.Наиболее близким является способ дифференциации антигенов на Т-зависимые и Т-независимые путем введения антигена 1 п ч 1 Сго с последующим учетом результатов 2).Однако известный способ является трудоемким, включающим в себя такие операции, как облучение, хирургическое вмешательство,. трансплантацию лимфоидных клеток. Кроме того, применяемое в нем хирургическое вмеша-. тельство, а также облучение способствует инфицированию организма. Инфицнрование и связанная с ним реакция воспаления организма искажаюткартину течения иммунологического ответа на введение изучаемого антигена, что затрудняет определениепринадлежности его к Т-,зависимымили Т-независимым антигонам, а вряде случаев исключает такую воэможностьЦель изобретения - упрощение иускорение способа,Цель достигается тем, что придифференциации антигенов на Т-зависимые и Т-независимые путем введения антигена 1 п ч 1 чо с последующимучетом результатов антиген вводятодновременно с лимфоидным нейлоном,полученным по методу Вы 22 опдЬ в ин-тактный,.организм, из расчета 10100 мкг кейлона (г веса), определяют площадь периартериальных.лимфоидных фолликулов селезенки на 4-14сутки после введения и по изменениюплощади фолликулов по сравнению снормой дифференцируют. Т-зависимыеи.Т-независимые антигены.П р и м е р 1. 20 мышей линииВа 3 Ь/с иммунизируют Т-независимымантигеном (эритроцитами барана) -контрольная группа. 12 мышам этойже линии одновременно с иммунизацией вводят лимфоидный кейлон в дозе 10 мкг/г (1 опытная группа), 20 мышам одновременно с иммунизацией вво:дят лимфоидный кейлон в дозе 50 мкг/г (11 опытная группа), а 12 мышам одновременно с иммунизацией вводят 100 мкг/г лимфоидного нейлона (111 опытная группа) . На 4-14 сутки в гистологических срезах се-, лезенки измеряют площадь периартериальных лимфоидных фолликулов с помощью Вайбелевской решетки.Контрольная группа: хорошо выражены крупные лифоидные фолликулы, вне фолликула располагаются лимфоидные скопления в виде отдельных островок. Опытйая группа: периартериальные лимфоидные фолликулы мелкие, зоны периартериальных лимфойдных фолликулов истощены.Полученные результаты представлены в табл. Т (площадь периарте; риадьных лимфоидных фолликулов в срезах селезенки при иммунизации Т-зависимым антигеном (аэритроцитами барана) .Иэ данных таблицы следует, что площадь периартериальных лимфоидных фолликулов на протяжении всего эксперимента в опытных группах была значительно меньше по сравнению с контрольной группой и имела достоверные различия.П р и м е р 2. 19 мышей линии Ва 1 Ь/с иммунизируют Т-независимым антигеном (липополисахаридом Е, со 1 Ц . 14 мышам одновременно с иммунизацией вводят лимфоидный кейлон в дозе 10 мкг/г (1 опытная группа).19 мышам одновременно с иммунизацией вводят 50 мкг/г лимфоидного кейлона (11 опытная группа), 14 мышам одновременно с иммунизацией вводят лимфоидный кейлон в дозе 100 мкг/г (111 опытная группа) . На 4-14 сутки измеряют площадь периартериальных лимфоидных фолликулов.Контрольная группа: лимфоидные периартериальные фолликулы четко выражены. Опытная группа: лимфоидные периартерлальные фолликулы представляют собой компактные зоны,Полученные результаты представлены в табл. 2 (площадь периартериальных лимфоидных фолликулов в срезах селезенки при иммунизации Т-незавнсимым антигеном (липополисахаридом Е. со 21) .Представленные данные указывают на то, что во все сроки наблюдения площадь периартериальных лимфоидиых фолликулов в опытных и конт рольной группах не имела достоверных различий.П р и м е р 3. 14 мышей линии ВаВ/с иммунизируют эритроцитами лошади (контрольная группа), 14 мышам одновременно с иммунизацией вво.дят лимфоидный кейлон в дозе10 мкг/г (1 опытная группа) . 14 мышам одновременно с иммунизацией вводят,лимфоидный кейлон в дозе 50 мкг/г (11 опытная группа), 14 мы" шам одновременно с иммунизацией вводят лимфоидный кейлон в дозе 100 мкг/г, Затем проводят исследования, как .и.в вышеописаннйх приме 10рах.Результаты исследований представлены в табл, 3 (площадь периартериальных лимфоидных фолликулов всрезах селезенки при иммунизации 15 эритроцитами лошади) .Данные табл. 3 указывают на то,что площадь периартериальных лимфоидных фолликулов при иммунизацииэритроцитами лошади в опыте и конт роле не имеет достоверных различий.На Т-эависимые антигены в основном реагируют Т-лимфоциты, а наТ-независимые антигены - В-лимфоциты. Полученные результаты исследований показывают, что при иммунизации животных эритроцитами баранаи использовании лимфоидного кейлонапериартериальные лимфоидные фолликулы селезенки (Т-зоны) истощаются,что позволяет сделать вывод о принадлежности эритроцитов барана кТ-зависимым антигенам. В случаеиммунизации липополисахаридом Е. соИ и эритроцитами лошади с использованием лимфоидного кейлона периЗ 5 артериальные лимфоидные фолликулы(Т-эоны) опытной группы по сравнению с контрольной не истощаются,на основании чего можно сделать вывод о принадлежности этих антигенов 40 к Т-независимым.Оптимальным сроком для приготовления гистологических срезов с точки зрения достоверности получаемых результатов являются 6-е сутки эксперимента, а оптимальной дозой лимфоидного кейлона является 50 мкг/г веса животного. Экспериментальные данные опытной группы (табл. 1) полученные в этих условиях имеют достоверные различия по сравнению с контрольной группой (р ( 0,001), что указывает на высокую степень достоверности получаемых результатов,Предложенный способ по сравнениюс известным способом дифференциации антигенов, обеспечивает значительно более высокую достоверность получаемых результатов за счет исключения таких отрицательных факторов, как инфицирование и связанную с ним реакцию воспаления, искажающую картину иммунологического ответа органиэма. Кроме того, предлагаемый спо,соб исключает такие трудоемкие про 65 цессы известного способа, как облу1003813 Дифференциация антигенов на Т-эа висимые и Т-независимые позволяет идентифицировать огромное количество антигенов как природного, так и синтетического происхождения, что необходимо для понимания механизмов течения иммунного ответа на тот или ,иной антиген, а также для разработки схем его регуляции при вакцинации, как животных, так и человека.Т а б л и ц а 1 Время забоя животных, сут,Число живот- ных Дозакейлона, , 4 мкг/гМ+в, р Опыт Мп, рч М+в, р Контрольный 21,02+1:25 16,72+0,76 15,8+0,55 20 10 12,06+0,8 16,01,38 12,5+1,02 12 0, 05. 12,3+1,320 9,7+1,2 С.О, 02 100 9,9+1,112,1+1,2 11,911,2 12 сО, 01 Таблица 2 Время забоя животных, сутки Доза кейл на, мкг/ ЧисложивотМ 1 р М+ М + Контрольный 1 12,111,56 12,611,44 16,5+0,9 4,9+О 3+1,18,0+2 15,71,0 0,5О,О0 ченне, хирургическое вмешательство, трансплантацию лимфоидных клеток.Предлагаемый способ дает также .существенный экономический эффект за счет уменьшения количества животных необходимых для эксперимента, уменьшения количества занятого персонала для выполнения эксперимента, а также за счет сокращения времени необходимого для исследований. 23,9+2,9 14,72,4 А 0,05 11,4+0,9ьон 3 а 13 Таблица 3 Дозакейлона,мкг/г Время забоя животных, сутки Число живот- ных 14 Опыт Мр Мтр МТР Мтр 23,41,3 20,83,1 23,10,64 Контрольный 14 23,91,23 25,112,2 21,3+3,9 20,911,23 24,91 у 88 1 14 10 0,5 22,50,8750 0,5 0,5 21, 5+1, 34 22,82, 3 20, 7+1,7 100 0,25 0,5 0,5 0,5 формула изобретения Составитель С. МалютинаРедактор В. Ковтун Техред Е.Харитончнк Корректор Л. Вокшан Заказ 1636/2 Тираж 711 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Способ дифференциации антигенов на Т-зависимые и Т-независимые путем введения антигена 1 и ч.чо с последующим учетом результатов, о т" л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, антиген вводят одновременно с лимфоидным нейлонам из расчета10-00 мкг кейлона (г веса), определяют площадь периартериальных лимфоидных фолликулов селезенки на 4-14 сутки после введения и по из-менению площади фолликулов по сравнению с нормой дифференцируют Т-зависимые н Т-независимые антигены.1 Источники информации,30 принятые во внимание при экспертизе1, Чередеев А.Н. Количественнаяи функциональная оценка Т- и В-систем иммунитета у человека, - В кн: