Способ определения активности сукцинатдегидрогеназы в биологических объектах

983542 ОП ИКАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Сфвз СоветскнаСоциалистическихРеспублик Р 11 М К з(22) Заявлено 12, 12. 80 (21 ) 3227638/28-13 с присоединением заявки й 6 01 И 33/50 Государственный комнтет СССР по делам нзобретеннй н открытий(.088. 8) Опубликовано 23,12.82. Бюллетень Йо 47 Дата опубликования описания 2312,82 В.М.Галкин, Е.М.Хватова, А.Н.Мошкова и. Т.С.Семенова(72) Авторы изобретения Горьковский медицинский институт им,С.М.Кирова(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ СУКЦИНАТДЕГИДРОГЕНАЗЫВ БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ1 2 Изобретение относится К медицине, а именно к способам биохимического исследования интенсивности дыханияи образования энергии в клетке мозга.Известен способ определения активности.сукцинатдегидрогеназы в биологических объектах путем измерения оптической плотности при 600 ммк 2,6-дихлорфеноли дефенола восстановле 1 ием при окислении сукцината 13.10 днако известный способ длителен и не обеспечивает высокой точности. Наиболее близким к предложенному является чисто химический способ определения активности сукцинатдегидрогенаэы в биологических объектах 121.Однако данный способ требует для анализа значительного времени, анализ сложен, способ не позволяет про р водить комплексное определение активности сукцинатдегидрогенаэы и НАДН-дегидрогенаэы.Целью изобретения является сокращение времени и упрощение анализа при комплексном определении актив- ф ности сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и НАДН-дегидрогеназы.Эта цель достигается тем, что при осуществлении способа определения ак. тивности сукцннатдегндрогеназы в биологических объектах в пробе определяют активность НАДН-дегидрогеназы, а активность сукцинатдегидрогеназы рассчитывают по формулеу=а+Ь(х"х. )+с(х-хо) +д(х"х. ) (1)2 где у - активность сукцинатдегидрогеназы;х - активность НАДН-дегидрогеназы в первом определении;х - активность НАДН-дегидрогеназы при повторном определении;а,Ь,с,д - эмпирические коэффициенты корреляционной зависимости,Способ осуществляют следующим образом.Берут ткань мозга, в которой требуется определить активность ферментов, в том числе СДГ и НАДН-дегидрогенаэы. Обычным спектрофотометрическим методом производят 2 замера активности НАДН-дегидрогеназы. Полу ченные данные выражают МКМ цитохрои с/мг белка митохондрий за 1 мин. Затем по спецйальным таблицам опре. деляют значения коэффициентов а, Ь с, д в зависимости от величины НАДН-дегидрогеназы. Определенныеуа+Ь (х-х )+с (х-х )2+0 (х-х )32 2 2х-х 1где х2 2П р и м е р 1. Определение активности СДГ в ткани мозга здорового кролика-самца. Для определения активности СДГ ло предложенному способу в ткани мозга кролика проводят 2 замера активности НАДН-дегидрогеназы. Получают следующие результаты: активность НАДН-дегидрогеназы при первом опреде ленни 13,4 МКМ цитохрома с/мг белка митохондрий, при повторном определении - 12,8 МКМ цитохрома с/мг белка митохондрий. Определ:,ат значения коэффициентов а,Ь, с, д для интервала 25 значений активности НАДН-дегидрогеназы 10,5-13,5, так как в него попадают результаты замеров, Получают следующие значения коэффициентов: а=14,5; Ь 0,36; с=0,03; 30 0=0,008, Рассчитывают значения активности СДГ по Формуле (1):уа+Ь(х-х )+с(х-х 1)+д(х-х 1)З = =14,5+0,36(13, 4-12,8)-0,03(13,4- 35128 Л 0 08( 13 4 128) =14 690 (МКМ цитохрома с/мг белка митохондрий), Для проверки проводят непосредственное экспериментальное опреде ление активности СДГ методом Поттера, результат - 14,697 ЯКИ цитохрома е/мг белка митохондрий в 1 мин. Предложенный способ применен при проведении определения активности сукцинатдегидрогеназы в 133 пробах ткани мозга при различных экспериментальных ситуациях: в нормальном состоянии организма 35 опЫтов при гипоксии 18 опытов, при гипотермии 15 опытов, при сочетании гипоксии с гипотермией 65 опытов. При этом установлено, что предложенный способ упрощает анализ проб при комплексном определении активности сукцинатдегидрогеназы и НАДЯ-дегидрогеназы, так как активность определяется по результатам двух замеров, что сокращает время экспериментальных исследований, Предложенный способ обеспечивает высокую точность. анализа, практически не отличающуюся от экспериментальных данных, и расширяет арсенал средств определения активности сукцинатдегидрогеназы. Формула изобретения Способ определения активности сукцинатдегидрогеназы в биологических объектах, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью сокращения времени и упрощения анализа при комплексном определении активности сукцинатдегидрогеназы и НАДЯ-дегидрогеназы, в пробе определяют активность НАДН-дегидрогеназы, а активность сукцинатдегидрогеназы рассчитывают по формулеуфа+Ь(х-х,)+с(х-х 1) +д(х-х )Я 3 в экс;ерименте значения активности НАДН-дегидрогеназы и найденные вели чины а, Ь, с д подставляют в формулу (1) и по ней рассчитывают активность СДГ:у а+Ь(х-х)+с(х-х) +О(х-х) В особых интервалах активности НАДН-дегидрогеназы формула принимает вид Ъ П р и м е р 2. Определение активности СДГ в ткани мозга кролика,под вергшегося воздействию гипоксии. В исследуемой ткани мозга кролика, подвергшегося воздействию гипоксии, производят 2 замера активности НАДН-дегидрогеназы. Получают следующие 50 результаты: 38,2 МКМ цитохрома с/мг белка митохондрий, 38,1 ИКМ цитохрома с/мг белка митохондрий. Определяют значения коэффициентов корреляционной кривой: а=20,8 Ь=4,93, с=0; 55 д=-018. Полученные значения активности НАДН-дегидроназы и коэффициентов корреляционной кривой подставляют в формулу для определения активности СДГ: 60уа+Ь (х- х )+с (х- х ) +д (х-х 1)й 32 =20, 8+4, 9 3 (38, 2" 38, 1) +О ( 38, 2-38, 1) -0,18(38,2-38,1) =21,293 (МКМ цито- хрома с/мг белка митохондрий). 63 Результат непосредственного экспериментального определения 21,287 МКМ цитохрома с/мг белка митохондрий.П р и м е р 3Определение активности СДГ в ткани мозга кролика, подвергшегося воздействию гипотермии. В исследуемой ткани мозга кролика, подвергшегося воздействию гипотермии производят 2 замера активности НАДН- -дегидрогенаэы. Получают результаты: в первом определении 24,1 МКМ цито- хрома с/мг белка митохондрий, во втором определении 24, 1 МКМ цитохрома с/мг белка митохондрий. Определены значения коэффициентов корреляционной кривой: а=20,675; Ьб 36; с=-14,57;0=4526. Полученные результаты подставляют в формулу (1) и по ней рассчитывают активность СДГ:у=а+Ь (х- х)+с (х-х )+д (х-х) =20,675+6,36(24,1-24,1)-14,51(24,1- 241) +4526(241 241)З=20675 (МКМ цитохрома с/мг белка митохондрий). Результат непосредственного измерения методом Поттера 20,201 МКМ цитохрома с/мг белка митохондрий.Заказ 9909/50 Тираж 887 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5Филиал ППП фПатент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 где у - активность сукцинатдегидрогеназы;х в .активность НАДЯ-дегидрогеназы в первом определении;х - активность НАДН-дегидрогенаэы при повторном определении 5а, Ь, с, О - эмпирические коэффициенты корреляционной зависимости,Источники информацни,принятые во внимание при экспертизе