Способ определения сахара в крови

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз СоветскихСоциалистическихреспублик К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(22) Заявлено 05.05. 80 (21) 2912350/28-13 31) М.КП.З спрмсоединеннемэаявки Нов 6 01 И 33/48 Государственный комнтет СССР ио деяам нзобретеннй н открытнй(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ САХАРА В КРОВИ Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в клинике.Известен способ определения сахара в крОви путем осаждения гликогена этанолом и обработки осадка серной кислотой. Образовавшуюсяглюкозу фосфорилируют АТФ с ферментом гексокиназы с последующей обработкой АДФ. Количество глюкозы определяют по изменению содержания НАД Н 113.Однако известный способ трудоемок и не обеспечивает высокой точности (возможны ошибки + 15-20). Наиболее близким к предлагаемому является способ определения сахара в крови путем получения беэбелкового фильтрата ее, обработки последнего антроновым реактивом и Фотометрии образовавшегося окрашенного раствора. С 23.Однако известный способ не обеспечивает высокой точности, трудоемок и требует большого расхода дефицитных реактивов.Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа.Цель достигается тем, что согласно способу определения сахара в крови путем получения беэбелкового фильтрата ее, обработки последнего антронрвым реактивом и фотометрии образовав"шегося окрашенного раствора, до внесения антронового реактива безбелковый фильтрат крови обрабатывают серной кислотой. П р и м е р, В центрифужную пробирку наливают 0,9 мл 5-ного растворатрихлоруксусной кислоты (ТХУ) и сюда 10 же вносят О, 1 мл исследуемой капиллярной крови, смешивают и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин,Надосадочную жидкость в количестве0,5 мл (соответствует 0,05 мл крови).переносят в обыкновенную пробирку,приливают сюда 1 мп концентрированнойсерной кислоты и 2 мл антронового индикатора (реактив готовят путем смешивания 34 мл дистиллированной воды 20 с 66 мл концентрированной сернойкислоты и растворения в этой смесй50 мг антрона и 1 г. тиомочевины, реактив хранят в холодильнике). Содержимое опытной пробирки смешивают ипомещают на 10 мин в ипящую водянуюбаню, затем охлаждают до комнатнойтемпературы и колориметрируют на ФЭКес красным светофильтром в кюветах срабочей шириной 5 мм. Вместо компенсационной жидкости берут контрольныйраствор, который готовят так же, как(в экстинкциях) Глюкоза в пробе, мг 0,1 0,4 0,10 0,035 0,2 0,3 0,07 0,20 0,2 0,105 0,3 0,30 О,1 0,14 0,40 0,4 0,175 5 0,5 0,50 Формула изобретения опытную пробу, только вместо крови берут 0,5 мп 5-ного раствора.Расчет концентрации сахара в исследуемой крови проводят по данным стандартного раствора глюкозы, который обрабатывают так же, как опытную пробу.Пример построения калибровочной таблицы.Иэ чистой и просушенной до посто- янного веса глюкозы готовят стандарт ный раствор, который содержит в 1 мп 0,35 мг глюкозы.Берут 5 обыкновенных пробирок, в первую вводят 0,1 мл стандартного раствора глюкозы, во вторую - 0,2 мп, в третью - 0,3 мл, в четвертую - 0,4 мл, в пятую - 0,5 мп. Все пробирки доливают до 0,5 мл дистиллированной водой, После этого во все пробирки доливают по 1 мл концентрированной серной кислоты и по 2 мп аитронового реактива. В пробирку для контрольного раствора, т.е. раствора для Расчет. Для вычисления концентрации сахара в испытуемой крови необхо О димо весовые количества глюкозы, которыми пользовались для калибровки, выразить для каждой стандартной точки таблицы в концентрациях глюкозы крови применительно к тем условиямисследования, которые имели место,при данном определении сахара в крови, Делают этом по Формуле СКх-С КбО где Кх - концентрация сахара в крови;С - объем крови, в котором требуется определить концентрацию сахара;С 1 - объем крови, пошедшей в опыт,6с 5 наполнения компенсационных кювет,вносят 0,5 мя дистиллированной водыи обрабатывают ее так же, как стандартные пробы. Содержимое смешиваюти пробирки помешают на 10 мин в кипящую водяную баню, после охлажденияпри комнатной температуре или в холодной воде содержимое пробирок колориметрируют. При колориметрировании на фотоэлектроколориметре пользуются красным светофильтром и кюветами. с рабочей шириной 5 мм. В качестве компенсационной жидкости наливают контрольный раствор, который также приобретает некоторую окраску. Отсчет оптической плотности,т.е.зкстинкции, ведут по красной шкале правого барабана. В заключение строят калибровочную таблицу оптической плотности стандартных растворов в зависимости от количества глюкозы в них и проводят расчет копустрации сахара в исследуемой крови. К - количество глюкозы. в стандарте по данным калибровочной таблицы.Предложенный способ позволяет сократить в 2-3 раза время на проведение одного исследования, в 4-5 раз уменьшить объем исследуемого субстрата и реактивов, значительно повысить точность способа и в 2-3 раза повысить его чувствительность. Способ определения сахара в крови путем получения безбелкового Фильтрата ее, обработки последнего антроновым реактивом и Фотометрии образовав5 983541 Составитель С.МалютинаРедактор И.Николайчук ТехредМ,Надь Корректор С.Иекмар Заказ 9909/50 Тираж 887 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д,4/5 Филиал ППП "Патент", г,ужгород, ул,Проектная, 4 шегося окрашенного раствора, о т л ич а ю ш н й с я тем, что, сцельюповышения точности и ускорения способа, до внесения антронового реактивабезбелковый фильтрат крови обрабатывают серной кислотой. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Биохимические методы исследования в клиникеМ., 1969, с. 232.2. Петрунькина А.М. Практическая биохимия. Л , 1961, с. 208.