Способ радионуклидной диагностики активности терминального эритропоэза

Оп ИС АНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик) Авторы изобретен и с,: Н тров кова менский государственный медицинский институтгосуларственный медицинский институт им. Н. Н с,Й Воронежский. Бурленко"-"- . 71) Заявите Т 1 КТИ 4) СПОСОБ РАДИОНУКЛИДНОЙ ДИАГНОСТИКИ ТЕРМИНАЛЬНОГО ЭРИТРОПОЭЗА ение асо тив- опых 1 лом ьную моз- кере- втоного рмо- стаер браз Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии.Известен способ определения активности терминального эритропоэза, основанный на подсчете содержания макроцитов в периферической крови 1 .Однако известный способ имеет низкую точность, так как основной критерий - количество эритроцитов-макроцитов - зависит не только от состояния терминального, но и от.активности неэффективного эритропоэза, который характерен для Вд-дефицитных анемий.Наиболее близким к предложенному является способ радионуклидной диагностики активности терминального эритропоэза путем определения количества меченых эритроидных клеток после инкубации их с радионуклидом и авторадиографии 2) . Однако известный способ имеет ограни ченное применение в клинике при обследо ванин людей, так как 59 Ге с высокой удель ной активностью (непременное условие дл авторадиографических исследований) оказь вает радиационное действие на организм при этом способ трудоемок и недостаточн точен, так как гамма-частицы 59 Ге имеютсравнительно невысокую разрешающук способность, что не позволяет точно опрслслить концентрацию метки в эритроилныхклетках и, следовательно, оценить состояние терминального эритропоэза. Целью изобретения является повыш точности.Эта цель достигается тем, что согл способу радиоуклидной лиагностики ак ности терминального эритропоэза путем ределения количества меченых эритроил клеток после инкубации их с радионукл и авторадиографии, проводят стернал пункцию, инкубируют клетки костного га с 3-Н-тимидином из расчета 900 бек лей на 1000 клеток и определяют на а радиограммах в 100 клетках эритроид ряда процент полихроматофильных но бластов, содержащих 6 - 20 гранул вос новленного серебра, и при 1 - 4% конст руют сниженную, при 5 - 10% нормаль и при 11 - 30% повышенную активность минального эритропоэза.Способ осуществляют следующим о982657 5 3Проводят пункцию грудины, клетки костного мозга инкубируют ин витро с 3-Н-тимидином при 37 С в течение 3 ч, Изотоп вводят в инкубационную среду из расчета 900 беккерелей на 1000 клеток, готовят мазки костного мозга для авторадиографии и при микроскопии мазков подсчитывают 100 клеток эритроидного ряда и определяют, сколько среди них полихроматофильных нормобластов, ядра которых содержат 6 - 20 гранул восстановленного серебра. Эта величина, выраженная в процентах, является показателем активности терминального эритропоэза и при 1 - 4/ констатируют сниженную, при 5 - 10/о нормальную, при 11 - 30/о повышенную активность терминального эритропоэза. Это позволяет использовать способ для дифференциальной диагностики макроцитарных анемий.Пример 1, Больная Р. А. Ф., 30 лет, поступила с диагнозом: анемия. Анализ крови, гемоглобин 7,8 г/о, эритроциты 2200000, ц. п. = 1,1; ретикулоциты 1,0/о (22 тыс. мкл), Эритроцитометрическая кривая со сдвигом вправо, процент макроцитов составлял 36. Содержание эритроидных клеток в миелограмме 42/о. Мегалобласты - 9. Копровоскопические исследования отрицательные. Для выяснения причины макроцитоза эритроцитов провели исследование активности терминального эритропоэза по предложенному способу. С этой целью сделали пункцию грудины,0,5 мл пунктата смешали с 1,0 мл цитратной аутоплазмы. При подсчете в камере Горяева установили, что 1 мкл клеточной суспензии содержит 41 тыс. миелокариоцитов. Путем повторного добавления аутоплазмы содержание клеток в 1 мкл довели до 20000. 3-Н-тимидин с удельной ак 1 ивностью 2,5 кюри/ммоль использовали для при готовления рабочей концентрации изотопа, соответствующей 5 микрокюри на 1 мл 0,5/,-ного раствора глюкозы, В силиконированную пробирку поместили 1 мкл клеточной суспензии костного мозга, содержащей 20000 миелокариоцитов, и 0,1 мкл рабочего разведения 3-Н-тимидина. При этом конечная концентрация изотопа в инкубационной среде составила 900 беккерелей. на 1000 клеток. Инкубацию проводили в термостате при 37 С в течение 3 ч. По истечении этого срока надосадочную жидкость удалили, а из осевших на дно пробирки клеток приготовили мазки, которые обработали для авторадиографии. При микроскопии (ок. х 1 О, об. х 90) в мазке определили 100 клеток эритроидного ряда и определили среди них количество полихроматофильных нормобластов, ядра которых содержали от 6 до 20 гранул восстановленного серебра.У обследуемой больной среди 100 клеток эритроидного ряда обнаружили только 2 полихроматофильных нормобласта, ядра которых содержали соответственно 6 и 8 гранул восстановленного серебра. Следовательно, активность терминального эритроо 20 25 30 3 40 45 50 55 4поэза составила 20, что свидетельствует о его торможении, наиболее частой причиной которого является дефицит витамина Вц. На фоне интенсивной В, -терапии больной провели дегельминтизацию: отошло 43 экземпляра дифиллоботриид. Через неделю больная была выписана в удовлетворительном состоянии.Пример 2 Больная Ю. 3. Т., 28 лет, поступила с диагнозом; анемия. Анализ крови: гемоглобин 8,0 г/о, эритроциты 2000000, ц. п. = 1,2; ретикулоциты 1/о (20 тыс./мкл). Количество лейкоцитов 7200, формула Б-О, Э - 25, П - 3, С - 36, Л - 25, М - 11. Эритроцитометрическая кривая Прайс-Джонса со сдвигом вправо. В миелограмме содержание эритроидных клеток 41 д/о. Гельминтоовоскопические исследования отрицательны. Применение предложенного способа позволило определить активность терминального эритропоэза (ТЭ), которая составила 2 о/оНаличие микроцитоза при низкой активности ТЭ свидетельствует об активации неэффективного аэритропоэза, одной из причин которого является дефицит В 1-витамина, развивающийся на севере Тюменской области, где живет обследуемая больная, вследствие дифиллоботриоза.Назначение многократных копровоскопических исследований позволило обнаружить яйца дифиллоюотриид. На фоне В 1-терапии провели дегельминтизацию. Отошли дифиллоботрииды в большом количестве. Больная выписана в удовлетворительном состоянии.Пример 3. Больной П. В, В., 30 лет. поступил с диагнозом: анемия. Анализ крови; гемоглобин 8,1 г/ эритроциты 2200000, ц. п. 1,1; ретикулоциты 2/, (48 тыс. мкл). Количество лейкоцитов 7800, формула Б - О, Э - 1, П - 4, С - 70, Л - 23, М - 2. Эритроцитометрическая кривая Прайс-Джонса со сдвигом вправо.В миелограмме эритроидные клетки составили 45/. По данным, полученным предложенным способом, активность ТЭ составила 29/, что свидетельствует о его стимуляции, и дало основание предполагать у больного скрытое кровотечение. При целенаправленном обследовании обнаружили полип прямой кишки. После операции больной выписан в удовлетворительномсостоянии. Показатели периферической крови и костного мозга достигали нормального значения.Предложенный способ применен в эксперименте на,60-ти крысах и в клинике на 10-ти больных. При этом установлено, что предложенный способ обеспечивает более высокую точность (ошибка в 12 раз меньше, чем в известном), сокращает время исследования в 4 раза за счет сокращения количества операций при анализе, устраняет радиационное действие изотопа на организм и позволяет проводить дифференциальную диагостику макроцитарных анемий, сопровождающихся стимуляцией терминальногоили неэффективного эритропоэза. Формула изобретенияСпособ радионуклидной диагностики активности терминального эритропоэза путем определения количества меченых эритроидных клеток после инкубации их с радионуклидом и авторадиографии, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, проводят стернальную пункцию, инкубируют клетки костного мозга с 3-Н-тимидином из расчета 900 беккерелей на 1000 клеток и определяют на авторадиограммах в 100 клетках эритроидного ряда процент полихроматофильных нормобластов, содержащих 9826576 в . 20 гранул восстановленного серебра, ипри 1 - 4% констатируют сниженную, при5 - 10 в/, нормальную, и при 11 - 30 о/, повышенную активность терминального эритропоэза.Б Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. ЯоЬ 1 гпап Г. Ншпога генакоп о 1егуЮгороезэ ч 11. ЯЬог 1 епед зпгчча о 1егуФгосу 1 еэ ргодпсед Ьу егунгорое 1 пог зечеге апепа. Ргос. 5 ос. Ехр. Во 1. МЛ:1 О 1961, ч 107, р. 884.2. Ареп Е., Сгаппоге Р., Се 1 аг Ыпе 1 сз апд гоп п 11 га 6 оп и Ьопе паггоюаз оЬзегчед Ьу гез гадоаМотгар 1 у. Апп,ХХ. Асад. 5 с. 1959, ч. 77, р. 753.Редактор Т. КугрышеваЗаказ 9766/6 Составитель Ю. Алмазов Техред И. Верес Корректор М. Шароши Тираж 714 Подписное ВНИ И ПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб д. 4/5 Филиал ППП Патентэ, г. Ужгород, ул. Проектная, 4