Способ количественного определения жирнокислотного состава липидов микроорганизмов

ОП ИСАНИЕИЗЬБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик968072Опубликовано 23.10.82. Бюллетень 39Дата опубликования описания 28.10.82 па аелам изобретеиий и открытий. А. Султанович, А. П. Нечаев н И. А. Московский ордена Трудового Красного Знаме институт пиш евой промышлен(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИРНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА ЛИПИДОВ МИК РООР ГАН ИЗМО В 1Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу количественного определения жирнокислотного состава липидов микроорганизмов,Известен способ количественного определения жирнокислотного состава липидов микроорганизмов, предусматривающий обработку биомассы при нагревании с последующим анализом реакционной смеси методом газовой хроматографии 11.Обработкуведут методом сопиролиза, согласно которому биомассу обрабатывают раствором гидроокиси тетраметаноламмония и нагревают при температуре 120 в 1 С. Полученную реакционную смесь подвергают газохроматографическому анализу 2.Недостатком известного способа является невозможность количественного определения полиненасыщенных жирных кислот, что ограничивает способ определения жирно- кислотного состава бактерий, которые их не содержат.Цель изобретения - определение количества полиненасыщенных жирных кислот.Указанная цель достигается тем, что согласно способу количественного определения жирнокислотного состава липидов микроорганизмов, предусматривающему обработку биомассы при нагревании с последующим анализом реакционной .смеси методом газовой хроматографии предложено в биомассу добавлять последовательно ацетилхло рид и метанол, кипятить до удаления растворителей, остаток обрабатывать гексаном и анализу подвергать гексановую вытяжку, при этом соотношение биомасса:ацетилхлорид:метанол должно составлять 100:(50 - о 60) (180 220)Способ позволяет определять. жирнокислотный состав биомассы дрожжей и грибов, содержащих полиненасыщенные жирные кислоты./ Пример 1, В колбочках объемом 3,5 мл 5 взвешивают 100 мг воздушно-сухой биомассы хлебопекарных дрожжей, обрабатывают ее 4,8 мг ацетилхлорида, а затем кипятят в 2,5 мл метанола. Температура песочной бани 80 С. После упаривания в колбочку добавляют 0,1 мл гексана. Один микро- литр гексановой вытяжки вводят в хроматограф. Условия анализа: длина колонки 2 м, диаметр 3 мм, сорбент - хроматон МАЖНМРЯ (фракция 0,125 - 0,160 мм) пропитанный 20% диэтиленгликольсукцината, 1 емпература термостата колонок 190 С, температура испарителя 220 С. Расход газа-носителя 40 смз/мин. Детектор пламеннононнзационный (ПИД) . Расход водорода 40 смИмин, воздуха 400 смз/мин. Спектр жирных кислот липидов хлебопекарных дрожжей показывает преобладание кислот С 1 в:о, С 1 еч, С:. Определены также поли- ненасыщенные жирные кислоты с двумя двойными связями С,рги С, в количестве 0,27% и 3,15% соответственно (фиг. 1).Пример 2. Проводят анализ жирнокислотного состава липидов пивных дрожжей.Анализ осуществляют согласно примертВ составе жирных кислот липидов пивных дрожжей значительно преобладает кнс лота С 16:р. Определены также полиненасыщенные жирные кислоты Св:г и С 1 з.,д в количестве 1,37% и 0,08% соответственно (фиг. 2).Пример 3, Определяют жирнокислотный состав лнпидов биомассы грибов рода Мпсог, полученной при проведении микробиологического контроля зерен риса. Рис промывают водой и производят посев в чашках Петри на агаровых средах. Выросшую колонию осторожно собирают и взвешивают по 10 мг в колбочках объемом 3,5 мл. Затем биомас су обрабатывают 5,0 мг ацетилхлорида и кипятят в 20 мг (0,25 мл) метанола. Температура песочной бани 80 С, После упаривания в колбочку добавляют 0,1 мл гексана, Один микролнтр гексановой вытяжки вводят в хроматограф. Условия хроматографирования аналогичны примеру 1. Определены полине- насыщенные жирные кислоты С 18;г и С 18.з в количестве 17,95% и 18,53% соответственно (фиг. 3).Пример 4, Объектом исследования была биомасса микроорганизма рода Сапйда, выращенного на углеводородах. В колбочках объемом 3,5 мл взвешивают по 300 мг влажной биомассы (влажность 66%), обрабатывают ее 60 мг ацетилхлорида и кипятят в 220 мг метанола. Температура песочной бани 80 С. После упаривания в колбочку добавляют 0,1 мл гексана. Один микролитр гексановой вытяжки вводят в хроматограф. Условия хроматографирования анализа аналогичны примеру 1.Определены полиненасыщенные жирные кислоты С 1 аг, С 1 а;г и Сщ, в количестве 0,43%, 21,69% и 8,97% соответственно (фиг. 4).Таким образом, предлагаемый способ количественного определения жирнокислотного состава липидов микроорганизмов позволяет определять количество полиненасыщенных жирных кислот, что делает возможным анализировать биомассу микроорганизмов различных родов.формула изобретенияСпособ количественного определения жирнокислотного состава липидов микроорганизмов, предусматривающий обработку биомассы при нагревании с последующим анализом реакционной смеси методом газовойхроматографии, отличающийся тем, что сцелью определения количества полиненасыщенных жирных кислот, в биомассу добавляют последовательно ацетилхлорид и метанол, кипятят до удаления растворителей, остаток обрабатывают гексаном и анализу подвергают гексановую вытяжку, при этом соотношение биомасса:ацетилхлорид:метанол составляет 100:(50 - 60):(180 в 2),Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Андреев Л. В., Склифас А. Н. О хемотаксономических аспектах липидного обмена бактерий. Сб. Биохимия и биофизикамикроорганизмовк Горький, изд-во ГГУ,1977, с. 3.