Способ получения гиалуронидазы

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик ощ 955932(22) Заявлено 26,03. 81 (21) 3268286/28-13 511 М. Кп. с присоединением заявки Й 9 А 61 К 37/48//С 12 Х 9/26 Государственный комитет СССР яо делам изобретений и открытий(72) Авторы изобретения Всесоюзный научно-исследовательский инсти ут мясной проиютленности(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИАЛУРОНИДАЭЫ Изобретение относится к производству лекарственных препаратов,применяемых в медицинской практике, и касается способа получения 5препаратов из животного сырья.Известен способ получения гиалуронидазы иэ семенников крупногорогатого скота путем экстракциисырья 0,1 н. водным раствором уксусной кислоты при перемешивании, отделения экстракта от жьыха и последующего высушивания 1).Однако известный способ не обеспечивает достаточно полного извлечения фермента гиалуронидаэы (1,3).15Целью изобретения является повышение выхода фермента.Поставленная цель достигается ф тем, что в способе получения гиалуронидазы из семенников крупного рогатого скота путем экстракции сырья 0,1 н водным раствором уксусной,кислоты при перемешивании, отделения экстракта от жмыха и последующего высушивания жмых обрабатывают0,1 н. водным раствором уксусной кислоты, и экстракцию каждой последующей партии жмыха осуществляют экстрактом, полученным от предыдущего извлечения с добавлением 0,1 н, вод ного раствора уксусной кислоты, приэтом экстракцию проводят до насыщенияизвлечения ферментом, после чего полученное извлечение объединяют сэкстрактом, полученным после обработки экстрагентом сырья. П р и м е р. 85 кг замороженных семенников крупного рогатого скота измельчают дважды на волчке, добавляют 85 л 0,1 н, водного раствора уксусной кислоты, температуру смеси доводят до 20 оС и экстрагируют при постоянном П 6 ремешивании в течение 3 ч. Жьых отделяют сепарировани" ем .при 8000 об/мин, в течение 30 мин а экстракт фильтруют. Около 100 кг жмыха заливают 300 л 0,1 н, водного раствора уксусной кислоты, экстрагируют при 20 оС и постоянном перемешивании 20 мин. Смесь подвергают сепарированию при 8000 об/мин в течение 30 мин., к 288 л полученного экстракта добавляют 0,1 н, водный раствор уксусной кислоты до 300 л 1 переносят в 100 кг жмыха, полученйого после экстракции другой партии семенников, экстракцию осуществляют аналогичным образом и процесс повторяют с использованием955932 Гиалуронидазная активность и выход фермента припоследовательной экстракции нескольких партийжмыхов семенников Выход фермента,Общее кол-вов кг в В к массе обработанного сырья Зкстракция семенников 0,1 н воднымраствором ОНЗСООНпо известному способу 64,0 1,3 1,30 Извлечение 1-цй партии жмыха семенников0,1,н. водный.раствоРом СНЗСООН 5,0 100,0 0,20 0,2 Извлечение 11-ойпартии жмыха семенников экстрагентомот п. 2 0,49 0,245 200,0 Извлечение 111-ейпартии жмыха семенников экстрагентомот п. 3 300,0 41,0 1,433 0,48 Извлечение 1 Ч-ойпартии жмыха семенников экстрагентомот п. 4 78,0 2,50 0,62 400,0 Извлечение Ч-ой партии жмыха семенников экстрагентом от п. 5 500,0 83,0 3,00 0,60 Гиалуронидазная активность фер-п.п. 2-6 ), была одинаковой н выра- мента, извн извлеченного из семенников и жалась величиной 51: ел.(100 мг поиз жмыхов семенников на всех стадиях 65 рошка ),еще трех новых партий жмыхов семенников (по 100 кг каждая ). Экстракт,полученный после извлечения пятойпартии жмыха, фильтруют на нутчфильтре, соединяют с экстрактом семенников. Объединенные фильтраты сгущаютдо 40 л, затем центрифугируют при3000 об/мин в течение 20 мин, надосадочную жидкость отделяют и вливаюттонкой струей в 4 объема около 160 л)охлажденного до ОС 96-ого этилс Ового спирта. Смесь тщательно перемешивают, оставляют на 2 ч при ОС, образующийся осадок отделяют, промываютпять раз по 10 л ацетоном и двараза по 2 л серным эфиром и сушат 5в вытяжном шкафу до удаления запаха эфира. Выход порошка составляет8,9 кг. После определения гиалуронидазной активности512 ед. в 100 мг ) полученный порошок может быть использован для получения препарата "Ронидаза". Для этого к полученному порошку добавляют 133,5 кг наполнителя ( талька ), смесь перемешивают 2 ч з шаровой мельнице, затем расфасовывают во флаконы по 5 г и получают 26700 флаконов препарата ронидазы.В таблице представлены экспериментальные данные, показывающие гиалуронидазную активность и выход Фермента, полученного при последовательной экстракции нескольких партий жмыхов семенников одним и тем же экстрагентом. При этом происходит постепенное обогащение экстрагента ферментом гиалуронидазой.955932 Составитель В. БрусиловскаяРедактор О. Филиппова Техред С,Мигунова Корректор А. Ференц Заказ 6857/3 Тираж 714 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Филиал ППП "Патент", г. ужгород, ул. Проектная, 4 Из 500 кг жмыха семенников попредлагаемому способу получают7,62 кг фермента гиалуронидазы с активностью 512 ед. в 100 мг, из которого после разбавления наполнителемдо активности 32 ед. в 100 мг получают 121, 92 кг+отового препаратаронидаэы, или 24384 флаконов ронидазы по 5 г во флаконе).В целом, в дополнение к 1,3фермента, извлекаемого из ткани 10семенников по известному способу,при использовании предлагаемогоспособа удается экстрагировать из жмыхов семенников еще 2,74 ферментагиалуронидазы, что позволяет почти в семь раз увеличить выход готового препарата "Ронидазы",Формула изобретения Способ получения гиалуронидазы 2 Оиэ семенников крупного рогатого скота путем экстракции сырья 0,1 н,водным раствором уксусной кислоты при перемешивании, отделения экстракта от жмыха и последующего высушивания, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода фермента, жмых обрабатывают 0,1 н, водным раствором уксусной кислоты и экстракцию каждой последующей партии жмыха осуществляют экстрактом, полученным от предыдущего извлечения с добавлением 0,1 н. водного раствора уксусной кислоты, при этом экстракцню проводят до насыщения извлечения ферментом, затем полученное извлечение объединяют с экстрактом, полученным после обработки экстрагентом сырья. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССРВ 566875, кл, А 61 К 37/48, 1976.