Способ диагностики аллергических заболеваний

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик и 955931(И 1 М. Кп.з с присоединением заявки Йо А 61 К 35/78 Государственный комитет СССР оо делам изобретений и открытий(72) Авторы изобретения 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н.И. Пирогова 71) Заявитель(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХЗАБОЛЕВАНИЙ2 Изобретение относится к медкцине, а именно к иммунологии и аллер-, гологик, и может быть использовано для лабораторной диагностики аллергических состояний при отсутствии клинических проявлений.Известен способ диагностики аллер- . гическкх заболеваний путем стимулирования конканавалином А супрессорных лимфоцитов в присутствии Н - ти-. мидина с последующим определением их функционального состояния Ц.Однако известный способ не является достоверным, обладает низкой точностью и не позволяет осуществлять контроль;.;иммунного статуса у больных аллергией.Целью иэобретенкя является повыщенке достоверности к точности и обеспечение воэможности динамического наблюдения эа состоянием иммунной системы.Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа диагностики аллергических заболеваний 25 путем стимулирования конканавалином А супрессорных лимфоцитов в присутствии Н - тимиднна с последующим определением их функционального состояния супрессорные лимфоциты культиви руюФ с конканавалином А в дозе 40- 80 мкг/мл в течение 40-54 ч с дополнительным введением 16-20 пула че ловеческой сыворотки Гт груйпы и прк снижении индекса супресски ниже 10 устанавливают у обследованного ал.лергическое состояниеП р и м е р 1. У обследуемого М. стерильно брали 10 мл крови иэ локтевой вены в пробирку с 2,7 кйм раствором натрий - ЭДТА, разводили раствором Хенкса 1 г 2 и наслаивали на градиент фиколлверографина с плотностью 1;072 с последующим центриФугированием в течение 30 мин при 800 я. Лимфоциты, в интерфаэе, собирали, трижды отвывали раствором Хенкса и ресуспензировали в культуральной среде: среда 199-80, пул сывороток человека ЪЧ группы 20, глютамкн 30 мкг/мл, после чего подсчитывали в камере Горяева. Вьщеляли 10 млн лимфоцитов, переносили их в два пенициллиновых флакона, содержащих по 2 мл культуральной среды (по.5 млн. клеток в карый ). В один Флакон добавляли Кон-А 60 мкг/мп, Клетки культивировали 54 ч при 37 оС. Через 54 ч лимфоциты обрабатывали митомициномС в течение955931 Индекссупрессии,Кол-во дбсле- дований Практически здоровые доноры 7 12,5 39,715,8 Больные поллинозомв стадии ремиссии 80,0 15 -15,9+9,5 12 26 -8,7+5,5 19 73,0 17 -20,0+10,5 13 76,5 30 мин при 37 С в концентрации40 мкг/мл для прекращения митотической активности, затем клетки отьывали и подсчитывали в камере Горяева. Параллельно на градиенте фиколлверографина стерильно. выделяли лимФоциты здорового дднораотьиювали ихи подсчитывали, Затем с этими клетками ставили реакцию бласттрансформаЬии в 4 рядах центрифужных пробирок,по три пробирки в каждом ряду. Каж- Юдая пробирка содержала 1 мл культуральной среды и 500 тыс. лимфоцитовдонора, Первый ряд - контроль,Второй - добавляли 0,1 мл фитогемаг.ютинина Р в разведении 1:100,в третий ряд добавляли 500 тыс, обработанных митомицином С лимфоцитов, культивировавшихся без Кон-А,в четвертый - 500 тыс, обработанныхмнтомицином С лимфоцнтов, культивирОвавшихся с Кон-А. Пробирки инкубировалн 72 ч при 37 фС. Эа 4 ч доокончания инкубации во все пробиркидобавляли 1 мк Ки Н - тимидина. Поокончании культивирования лимфоцитыотмывали на микропористых Фильтрах,которые помещали в сциНтилляционныбкюветы и подсчитывали на счетчике.Формула подсчета индекса супрессии кол-во имп/мин в культуре 30 лимфоцитов активир,. Кон=А .100 кол-во имп/мин в культурелнмфоцитов без Кон-АДля обследованного М, индекс супрессии составил 52,6. Обследованный М. практически здоров.П р и м е р. 2. Исследование, функциональной активности лимфоцитов проведено у больного И. Выделение и обработку лимфоцитов осуществляли,как Группы обследованных Больные бронхиальнойастмой (атопич.формав стадии ремиссии) Больные бронхиальнойастмой.(инф.-аллерг.Форма в стадии ремиссии) в примере 1, Состав культуральнойсреди: 82 среды 199, 18 пула человеческих сывороток 1 Ч группы,30 мкг/мл глютамина. Культивировалис 40 мкг/мл Кон-А и беэ него при37 С в течение 48 ч. Индекс супрессииоу обследуемого И. оказался равным53,0, что позволило снять диагнозбронхиальной астьи. По клиническимданным больному поставлен диагнозхроническая пневмония.П р и м е р 3 Вольная Ф. былаобследована дважды: в момент поступления в больницу и на Фоне лечения.Выделение и обработку лимфоцитовпроводили аналогично примеру 1. Состав культуральной жидкости: 84 среды 199, 16 пула человеческих сывороток 1 Ч группы, 30 мкг/мл глютамина.Лимфоциты культивировали с 60 мкг/мпКон-А и без него при 37 фС в течение44 ч, При обострении бронхиальнойастьы индекс супрессии у больной Ф.85,6. После проведения нестероидной терапии - 4,0. Вольная была выписана в состоянии клинической ремиссии.П р и м е р 4. У больного А. выделение и обработку лимфоцитов провели как в примере 1. Состав культуральной жидкости: 82 среда 199,18 пула сывороток 1 Ч группы,30 мкг/вщ глютамина. Культивированиес 80 мкг/мл Кон-А и беэ него в течеие 46 ч при 37 фС. Индекс супрессиибольного А, оказался равным 6,6,что позволило заподозрить у него состояние аллергии, несмотря на отсутствие выраженных клинических проявлений.Суммарные данные приведены в таблице,Результаты исследования функциональной активности индуцированных;Кон-А лимфоцитов-супрессов у здоровых, и больных аллергией. Кол-во обследованных с индексом супрессии ниже 10955931 Продолжение таблицы Кол-во обследованных с индексом супрессии ниже 10абс.Ъшум шее ш ЕЮшю Кол-во Группы обследованных обсле- дований Индекссупрессии,Больные неспецифичной пневмонией(хроническая Форма) 14,3 7 39, 9:18, 5 Больные боонхиальнойастмой в стадииобострения:до леченияпосле лечения 100,0 17 17 -91,66,7 17 -37,9+11,8 82,4 25 Составитель Л. СоловьевРедактор О, филиппова Техред С.Мигунова Корректор А Ференц Заказ 6857/3 Тираж 714 ПодписноеВНИИПИ. Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, 3-35, Раушская наб., д. 4/54 а Филиал ППП "Патентф, г. ужгород, ул. Проектная, 4 Описываемый способ является достоверным неспецифическим способом диагностики аллергических. заболеваний. Использование способа обеспечивает по сравнению с известным способом воэможность наблюдения больного в динамике, получение более достоверных результатов, резкое снижение количества необходюаас реактивов. 30формула изобретения Способ диагностики аллергических заболеваний путем стимулирования кон канавалином А супрессорных лимфо цитов в присутствии Н - тимидина с последующим определением их Функционального состояния, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения достоверности, точности и обеспечения воэможности динамическогонаблюдения за состоянием иммуннойсистема, супрессорные лимфоциты. культивируют с конканавалином а в дозе. 40-80 мкг/мп в течение 40-54 чс дополнительным введением .16-20пула человеческой сыворотки 1 Ч группы и при снижении индекса супрессииниже 10 устанавливают у обследо:ванного аллергическое состояние.Источники информации,принятые во внимание при,экспертизе1, Магй 1 пег 1.Р., Яапйоэ д.,ЯйесЬэеЬи 1 Се 0.Л., АЬа 1 оц И.д.Иоп эрес 1 г 1 с эцрргеээог се 11 ЮопеС 1 оп 1 п агор 1 с ЯиЬ 3 еейэ 1. А 11 егяус 1 ьп фавппо 1, 1979, 64, 6, 485 490.