Способ определения гидрокортизона

Союз Советских Социалистических Республик(51)М, Кл. с присоединением заявки Мо 6 01 Б 33/15Государственный комитет СССР но делам изобретений и открытийДата опубликования описания 300481(72) Авторы изобретения А;А. Хабаров, В,Н. Иванов, Л.П. Хабарова и В.Д. Долгополов Читинский государственный медицинскийинститут(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИДРОКОРТИЗОНА Изобретение относится к аналити. ческой химии, а именно к способам определения гидрокортизона - лекарственного препарата.Известен спектрофотометрический способ количественного определения гидрокортизона, заключающийся в измерении поглощения при длине волн около 525 нм после взаимодействия гидрокортизона с раствором синего тетразолиния 11.Недостатки способа - невысокая чувствительность (3 мкг/мл) и неселективность, так как все стероиды которые имеют восстанавливающие 15 функциональные группы Ц.-кетольного типа (кортизон, преднизолон, прегнин, преднизон и т.д.) мешают определению.Известен способ определения гид рокортизона путем обработки пробы анализируемого вещества смесью концентрированной серной кислоты и спирта с последующим измерением флюоресценции полученного раствора (2 .Недостатки способа - невысокая. чувствительность (0,6 мкг/мп) и неселективность,так как все производные циклопентапергидрофенантрена(преднизон, преднизолон, кортизон,метилпреднизолон,гексаметазон и др )в указанных условиях образуют флюоресценцию,Цель изобретения - повышение чувствительности и специфичности способа.Поставленная цель достигается тем, что в .способе количественного определения гидрокортизона, заключающемся в обработке анализируемой пробы химическим реагентом с последующим измерением флюоресценции полученного раствора, в качестве химического реагента используют перекись водорода в солянокислой среде.Спектр флюоресценции полученного при:этом раствора лежит в области от 440 до 620 нм с,максимумом 541 нм, а спектр возбуждения от 320 до 440 нм с максимумом 391 нм.Зависимость между концентрацией гидрокортиэона и флюоресценцией, полученная после взаимодействия продукта реакции, представлена в табл.1.48,5 73 49,6 0,1 1 0,2 2 0,3 3 0,4 4 0,5 5 0,6 б 0,7 7 0,8 8 0,9 9 1,0 10 Зависимость интенсивности флюоресценции гидрокортизона(10 мкг/мл) от концентрации соляной кислоты представлена в табл,2,Зависимость интенсивности флюоресценции гидрокортизона (10 мкг/мл) в концентрированной соляной кислоте от концентрации перекиси водорода представлена в табл. 3.таблица 3 П р и м е р 1. Определение соЧ держания гидрокортизона в раство ре. 1 мл анализируемого раствора переносят в мерную колбу на 1.0 мл, доводят,цистиллированной водой до метки,К 1 мл данного раствора прибавляют 9 мл концентрированного раствора М соляной кислоты, 1 каплю 0,1-ного раствора. перекиси водорода перемешивают и через 20 мин флюориметрируют,Содержание гидрокортизона рассчитывают по отношению к стандартному 35 раствору с содержанием 25 мкг/мл, Для чего к 10 мл стандартного раствора в концентрированной соляной кислоте прибавляют 1 каплю 0,1-ного раствора перекиси водорода и через 4 О 20 мин флюориметрируют одновременно с исследуемыми образцами,П р и м е р 2. Определение гидрокортизона в мази.К 0,1 г (точная навеска) исследуемого образца (мази) прибавляют 10 мл концентрированной соляной кислоты и энергично встряхивают 10-15 мин. К 1 мл данного раствора прибавляют, 9 мл концентрированной соляной кислоты, 1-2 капли 0,1-ного раствора пе рекиси водорода, перемешивают и через 20,мин, флюориметрируют по отношению к стандартному раствору с содержанием гидрокортизона 50 мкг/мл.Результаты определения гидрокор тизона в 0,5-ной гидрокортизоновой мази представлены в табл. 4Таблица 4Содержание гидрокортизона, мкг/мл 40 0,1224 0,1197 0,1054 0,1028 22,3 21,4 21,1 20,9 Составитель С. ХованскаяРедактор Е. Дичинская Техред Г.Маточка Корректор М. Коста Заказ 2368/33 Тираж 907 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5Подписное Филиал ППП Патент, г,Ужгород, ул.Проектная, 4 1,0428 1,0117 1,0108 0,9724 0,9618 0,9537 0,9358 0,9231 П р и м е р 3, Определение гидрокортизона в преднизолоне.0,1 г (точная навеска) исследуемого образца переносят в мерную колбу на 50 мл, прибавляют 30-40 мл концентрированной соляной кислоты и энергично встряхивают 5-10 мин. Затем концентрированной соляной кислотой доводят до метки. К 10 мл 25 данного раствора прибавляют 1-2 капли О,ГЪ-ного раствора перекиси водорода, перемешивают и через 20 мин флюориметрируют по отношению к стандартному раствору с содержанием ЗО 20 мкг/мл гидрокортизона,Результаты определения гидрокорти. зона в преднизолоне (искусственная смесь, содержащая 1 гидрокортизона) представлены в табл.5.Таблица Использование предлагаемого способа позволяет отличать гидрокортизон от других стероидов, а также определять наличие гидрокортизона в качестве примеси в других стероидах (чувствительность способа 0,01 мкг/мл гидрокортиэона),Способ определения гидрокортиэона путем обработки пробы анализируемого вещества химическим реагентом с последующим измерением флюоре-. сценции полученного раствора, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения селективиости спосо- . ба и его чувствительности, в качестве химического реагента используют перекись водорода в солянокислой среде. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Международная фармакопея. Женева, 1969, с. 275, 767. 2. Папков Ю.А. и Усватова И.Я. Флюориметрический метод определения 11-окси-кортикостероидов в плазме периферической крови, Методы исследования некоторых гормонов и медиаторов. Сборник. М., 1965, с. 137-145 (прототип) .