Способ выращивания продуцентов литических ферментов

Номер патента: 767196

Авторы: Кислухина, Кузнецова, Маргарян

ZIP архив

Текст

О ц 4 Всзя,и е изоВРИЙния 767196 Союз Советских Социалистических Республик.(23) Приоритет ГосударствеииыИ комитет СССР ио делам изобретеиий и открытиИ(54) СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ ПРОДУЦЕНТОВ ЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВИзобретение относится к ферментной отрасли микробиологичес- . кой проьыаленности и может быть использовано при получении препаратов литических ферментов путем глубинного культивирования микро- организмов, в частности бактерий рода Вас 1 И ив.Известны способы получения литических ферментов путем глубинного культивирования микроорганйз- " мов на различных питательных средах, содержащих источники органическихсоединений углерода и азота в суммарной концентрации до 10 и минеральные соли. Культивирование проводится одностадийно или в две стадии соответственно без корректировки или с корректировкой состава питательной среды в ходе ферментации 1. Наиболее близким по своей технической сущности к заявленному является способ, согласно которому продуцентов литических ферментов выращивают глубинным методом на питательных средах, содержащих ас" симилируеьне источники органических соединений, углерода и азота в суммарной концентрации не ниже 2 иминеральные соли, причем за 2-6 чдо окончания ферментации объемкультуральной жидкости увеличивают 5 в 1,5-2,5 раза эа счет введениякомпонентов питательной среды, несодержащих органических источниковуглерода и азота. В качестве таких компонентов используют водо О проводную воду или водные растворывсех или части - мийеральных компонентов основной питательной среды в концентрациях, не превышающихих концентрации в основной питательной среде 2.Недостатком известного способаявляется то, что увеличение культуральной жидкости эа счет компонентов, не содержащих органичес О ких источников питания, приводитк сокращению продолжительностипродуктивного состояния н автолизуклеток микроорганизмов вследствиеснижения осмотического давления 25 среды. Результатом этого являетсянедостаточно высокая активностьлитических ферментов, продуцируемыхмикроорганизмами.Целью изобретения является; пре,дотвращение автолиэа клеток проду=цента й повышение активности целевого=продукта;Поставленная цель достигаетсятем, что одновременно с разбавлением культуры в питательную средувводят ингибитор автолиза, представляющий собой экстракт ферментолизабиомассы бактерий, в концентрации,0,02-0,10 по отношению к конечномуобъему культуральной жидкости,Ингибиторы автолйза получают избиомассы продуцента или другихбактерий известным способом." Кля выделения регуляторов можетиспользоваться биомасса любой бактерии при условии, что выделенныерегуляторы обладают отрицательнымзнаком действия на интенсивность ав-толиза продуцента литических Ферментов, то есть снижают интенсивйость"автоли за,Предлагаемый способ может бытьиспользован при получении литических Ферментов путем глубинногб культивирования микроорганизмов, напримербактерий В, вцЫ 13 1 в и В. щевеп 1 е -г 1 сцв, на различных питательныхсредах, содержащих в начальный момент культивирования ассимилируемые источники углерода и азота всуммарной концентрации 2-5Введение в культуральную жидкостьрастворов ингибиторов автолиэа приводит к стабилизации бактериальныхклеток, увеличениюих жизнеспособности и продолжительности продуктивного состояния в условияхобедненной питательнойсреды, следствием чего является повышение ак"тивности литических ферментов в культуральной жидкости. 45 Формула изобретения П р и м е р 1. Глубинную культуру В.вцЬ 111 в 402 выращивают в колбах емкостью 750 мл, содержащих 40 мл среды следующего состава, г/л: Ферментативный гидролизат дрожжей БВК 12 лактоэа 10;(МН,)НРО 4 4 т КС Р О, 6; СаС Е О, 1 МЯО 47 НЭ 0,1 при рН 7,0. После стерилизации и засева среды колбы . инкубируют в течение 14 ч на качалке при температуре 37 Затем в 4 контрольные колбы вносят дополнительно по 40 мл стерильной водопро" водной воды, а в 4 опытные колбыпо 40 мл стерильного водного раствора (вода водопроводная),содержащего 80 мг ингйбитора автолиэа, выделенного из биомассы В.вцЬ 111 в 402 (конечная концентрация ингибитора в культуральной жидкости - 0,1) . Контрольные и опытные колбы вновь ставят на качалку прй той же температуре","ийкубируют 4 ч, а затем определяют литическую активность по методу Кислухиной.Средняя литическая активность вконтрблЬных колбах составила 13500 ед/мл, в опытных колбах -5 1 О 15 4% 25 ЗО 35 40 3.. - -1 ..20800 ед/мл, или 154 по отношениюк контролю.П р и м е р 2, Глубинную культуру В.вцЬЦ 11 в 402 в течение первых 14 ч вйращивают так же, как в примере 1. Затем в 4 контрольные колбы вносят по 40 мл стерильного водного раствора солей, содержащего, г/л: МдЯ 047 НО 0,1) СаС 80,1, В 4 опытные колбы вносят по 40 мл такого же солевого раствора, содержащего дополнительно по 60 мг ингибитора автолиза, выделенного иэ культуры Вас 18 Р цв тедаег 1 цв 400 (конечная концентрация ингибитора в культуральной жидкости - 0,075) . Контрольные и опытные колбы инкубируют на качалке 4 ч при температуре 37 С, после чего, определяют литичесЬкую активность.Средняя литическая активность в Контрольных колбах составила12000 ед/мл, в опытных колбах - 18000 ед/мл или 150 по отношению к контцолю.П р и м е р 3, Глубинную культуру В.вцЬМ 01 в й 2 выращивают в колбах объемом 750 мл на 50 мл среды следующего состава, в г/л: гидролиэат бактериальной биомассы 10; мальтоза 10;(НН 4) НРО 4;КСГ О,б; ИдЯО 7 НаО 0,1; СаС 8 0,1 при рН 7,2. После стерилйэации и засева колбы ин кубируютв течение 12 ч на качалке при температуре 37 С. Затем в контрольные колбы вносят по 50 мл стерильной водопроводной воды, а в опытные - по 50 мл стерильного водного раствора, содержащего по 30 мг ингибитора автолиза, выделенного иэ ЯверТососсцв 0 ас 11 в (конечная концентрация ингибитора в культуральной жидкости 0,03) . Контрольные и опытные колбы йнкубируют на. качалке 5 ч, затем определяют литическую активность.Средняя литическая активность в контрольных колбах составила5330 ед/мл, в опытных - 7200 ед/мл или 135 по отношению к контролю. Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет повысить активность литических ферментов в культуральной жидкости на 35-54. Способ выращивания продуцентов литических Ферментов путем культивирования микроорганизмов рода Вас 1 И цв на питательной среде, содержащей источники органических соединений, углерода и азота в суммарной концентрации 2-5 с раэбавлением культуры в процессе культивирования в 1,5-2,5 раза эа 2-6 ч до .окончания Ферментов пу-ем введенияЗаказ 7135/23 Тираж 522 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Я, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП Патент, г. ужгород, ул. Проектная, 4 растворов, не содержащих ассимилирКемые источники углерода и азота,о т л и ч а ю щ н й с я тем, что,с целью предотвращения автолиза клеток продуцента и повышения активностицелевого продукта, одновременно сразбавлением культуры в питательнуюсреду вводят ингибитор автолиза,представляющий собой экстракт ферментолизата биомассы тех же илидругих бактерий, в концентрации 0,02-0, 10 по отношению к конечному объему культуральной жидкости. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССРпо заявке 9 2595302/28-13,кл. С 12 Р 13/10, 19782. Авторское свидетельство СССРпо заявке 9 2648462/28-13,кл. С 12 0 13/10, 1978 (прототип) .

Смотреть

Заявка

2689091, 24.11.1978

ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ БИОТЕХНИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ

МАРГАРЯН БЕРТА АСАТУРОВНА, КИСЛУХИНА ОЛЬГА ВЛАДИМИРОВНА, КУЗНЕЦОВА ТАТЬЯНА АЛЕКСАНДРОВНА

МПК / Метки

МПК: C12D 13/10

Метки: выращивания, литических, продуцентов, ферментов

Опубликовано: 30.09.1980

Код ссылки

<a href="https://patents.su/3-767196-sposob-vyrashhivaniya-producentov-liticheskikh-fermentov.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ выращивания продуцентов литических ферментов</a>

Похожие патенты