Штамм т-1, n464-продуцент глюкоамилазы, используемый для осахаривания крахмалистого сырья

Союз Советских Социалистических Республик(23) Приоритет Государственный комитет СССР но делам изобретений и открытий(54) ШТАММ АБРЕК 6105 АИАМОВ Т - 1, 9 464-ПРОДУЦЕНТ ГЛЮКОАМИЛАЗЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫИ ДЛЯ ОСАХАРИВАНИЯ КРАХМАЛИСТОГО СЫРЬЯ Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к получению нового штамма с высокой активностью глюкоамилазы, и может быть использовано в спиртовой и крахмалопаточной промышленности.В .настоящее время для осахаривания применяют культуру плесневых грибов Аврегц 111 цв Ьасасае, обладающую срав О нительно невысокой глюкоамилазной активностью от 5 до 20 ед/мл к.ж., что не позволяет интенсифицировать процесс спиртового производства 11 .Наиболее близким к изобретению является штамм Аврегд 111 ов аиащог 1 121. Известный штамм обладает невысокой активностью глюкоамилазы и длительным сроком культивирования.фелью изобретения является получеО ние нового штамма со стойкими биохимическими свойствами, обладающего высокой способностью к образованию глюкоамилаэы и позволяющего интенсифицировать процесс гидролиза крахмала.Полученный штамм Аврег 9111 ив аиащо г 1 Т,9 464-продуцент глюкоамилазы: имеет следующие морфологические, физиологические характеристики, ЗО На сусло-агаре образует мицелий размером 2,0-4,0 х 5,0-20,0 ммк, Мицелий ветвистый, Форма клеток вытянутая, иногда вздутая. Конидии круглые, без шипов.Жидкие питательные средыСолодовое сусло, Через 5-7 дней при 40 оС образуется толстая складчатая пленка темно-коричневого цвета. Без взбалтывания среда прозрачная, Запах тиПичный грибной.Видоизмененная среда Чапека с крахмалом и вытяжкой из солодовых ростков, Пленка образуется на 6-8 сутки при 40 оС. Пленка складчатая, толстая, коричневого цвета. Без взбалтывания среда прозрачная. Твердые средыНа сусло-агаре посев штрихом -рост хороший, поверхность белая,плотная. На 2 сутки роста поверхностьстановится коричневатой, а на 5 сутки - темно-коричневой, Вся поверхность культуры очень складчатая, крайштриха волнистый,На солодовом агареПосев уколом - рост на поверхности обильный. По уколу - очень слабый.Гигантская колония на среде Чапека с различными источниками углерода на 5 сутки роста имеет следующее строение: 1на глюкозе - колония круглая, складчатая, центр светло-коричневый, приподнятый, Обильное конидиеобразование в центре, Размер колонии 20- 21 мм. В центре колонии с обратной стороны образуется пигмент коричнево- красного оттенка;на мальтозе - характеристика колонии аналогична предыдущей. Размер колонии 23-25 мм;на сахарозе - колония круглая, складчатая, образование конидий слабее, чем на глюкозе и мальтозе. Центр колонии выпуклый, желтонато-коричневого цвета, Пигмент образует слабо. Размер колонии 17-19 мм; на крахмале - гигантская колонияпушистая, не образует складок, плоская. Образование конидий в центре.Центральная часть колонии темно-олив.кового цвета, с обратной стороны колонии образуется пигмент с коричневато-бордовым оттенком. Размер колонии24 - 25 мм. Вокруг колонии наблюдаетсязона гидролиза крахмала.Отношение к источникам углеродаКультура гидролизует крахмал, декстрины, паннозу, изомальтозу,- мальтозу с .образованием глюкозы. Потребляет без выделения газа сахарозу,глюкозу, маннит, сорбит. Слабо растет на лактозе и ксилозе.Отношение к источникам азотаХорошо ассимилирует аммонийныесоли неорганических кислот, Потребляет пептон, казеин, гидролиэат казеина, аминокислоты, Пептонизирует молоко.Температурный оптимум роста 4042 оС, рН 5,5-7,5, азроб. Не обладаеттоксическими свойствами.Штамм Азрег 111 цэ аиаяог Т - 1,9 464-продуцент глюкоамилазы полученв результате 4-ступенчатой селекции.В результате 3-кратной обработки конидий Аьрег 9111 ць аналог на первойступени УФ-лучами и этиленимином(ЭИ);на второй - УФ-лучами и ЭИ;на третьей - высокой температурой100 С получен активный мутант - продуцент глюкоамилазы.На четвертом этапе применен методподдерживающей селекции с целью ныбора и сохранения наиболее активногопродуКента - Азрег 911 ць аиавогТ - 1, Ю 464.Основное отличие нового штаммасостоит в том, что его продуцирующаяспособность в 1,5 раза выше, чем уисходного штамма. Штамм обладает повышенной в 1,5-2,0 раза активностьюглюкоамилазы и является термостабильным,Пример использования предлагаемогоштамма Для глубинного культивированияштамма применяют питательную средуследующего состава;Растворимый крахмал 6,0НаНО 0,91КС 0,05М 950 0,05КН Р 04 0,1Ре 504 0,001Солодовые ростки 1,0Выращивание проводят при 40 оС вколбах на качалке с 180-210 об/мин.Максимальное накопление фермента наблюцается на третьи сутки и состанляет 45-50 ед/мл, т.е. выше на 40-50по сравнению с исходной культурой.15 Для осахаривания используют выращенную культуру из расчета 6 ед ГлАна 1 г крахмала сырья,Активность глюкоамилазы определялипо методу определения ГлС(ГОСТ 20264 Щ 64, 4-74, с. 7) с использованием ферроцианида калия, основанному наопределении глюкозы, образующейся пригидролизе растворимого крахмала ферментом глюкоамилазой, Активность фермента выражали в микромолях глюкозы,освобожденной за 1 мин при 50 С.Штамм сохраняет высокую активностьглюкоамилазы более днух лет, т. е.является стабильным по отношению кЗ 0 синтезу фермента.Таким образом, штамм Аьрег 911 цьаиавог Т, Р 464 представляет собойкультуру со стойкими биохимическимии морфологическими свойствами, проявляющимися н повышенной способностик образованию глюкоамилазы. Активностьглюкоамилазы нового штамма при выращивании его на видоизмененной средеЧапека с солодовыми ростками на 4050 выше активности исходного штамма40 и составляет 50-52 ед/мл,Формула изобретенияШтамм Аьрег 91,11 цэ аиавог Т - 1,Р 464-продуцент глюкоамилазы, используемый для осахаривания крахмалистогосырья, хранится в коллекции музеячистых культур Всесоюзного научноисследовательского института продуктов брожения,Морфологические признакиНа сусло-агаре образует мкцелийразмером клеток ,0-4,0 х 5,0-20,0 ммк.Мицелий ветвистый. Форма клеток вытянутая, иногда вздутая. Конидии круглые, без шипов.Физиологические признакиЖидкие питательные средыСолодовое сусло. Через 5-7 днейпри 40 С образуется толстая складча 60 тая пленка темно-коричневого цвета,Без вэбалтывания среда прозрачная,ЗаПах типичный грибной,Видоизмененная среда Чапека скрахмалом и вытяжкой иэ солодовых"65 ростков. Пленка образуется на 6 - 8 сут753897 Составитель Л. ПашининаРедактор И. Ахмедова Техред Н,Бабурка Корректор Е. Папп Тираж 522 Заказ 4846/22 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, 3 в , Раушская наб., д. 4/5 Ффилиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная 4 ки при 40 С. Пленка складчатая, толстая, коричневого цвета. Беэ взбалтывания среда прозрачная.Твердые средыНа сусло-агаре посев штрихом - рост хороший, поверхность белая, плот ная. На 2 сутки роста поверхность становится коричневатой, а на 5 сутки - темно-коричневой. Вся поверхность культуры очень складчатая, край штриха волнистый. 1 ОНа солодовом агареПосев уколом - рост на поверхности обильный. По уколу - очень слабый. Гигантская колония на среде Чапека с различными источниками углерода на 5 сутки роста имеет следующее строение: на глюкозе - колония круглая,складчатая, центр светло-коричневый,приподнятый. Сильное конидиеобраэование в центре, Размер колонии 20-21 мм.В центре колонии с обратной стороныобразуется пигмент коричнево-красногооттенка, на мальтоэе - характеристикаколонии аналогична предыдущей. Размер 25колонии 23-25 мм; на сахарозе - колония круглая, складчатая, образование конидий слабее, чем на глюкозе имальтоэе. Центр колонии выпуклый,желтовато-коричневого цвета. Пигмент 30 образует слабо, Размер колонии 17 -19 мм; на крахмале - гигантская колония пушистая, не образует складок,плоская. Образование конидий в центре.Центральная часть колонии темно-оливкового цвета, с обратной стороны колонии образуется пигмент с коричневато-бордовым оттенком. Размер колонии24-25 мм. Вокруг колонии наблюдаетсязона гидролиза крахмалаОтношение к источникам углеродаКультура гидролизует крахмал, декстрины, паннозу, иэомальтозу, мальтоэу с образованием глюкозы. Потребляетбез выделения газа сахарозу, глюкозу,маннит, сорбит. Слабо растет на лактоэе и ксилоэе.Отношение к источникам азота: хорошо ассимилирует аммонийные солинеорганических кислот. Потребляетпептон, казеин, гидролиэат казеина,аминокислоты. Пептониэирует молоко.Температурный оптимум роста 40 -42 бС, рН 5,5-7,5 аэроб. Не обладаеттоксическими свойствами.Источники инФормации,принятые во внимание при экспертизе1. Патент СССР 9 355217,кл, С 12 К 1/02, 1972.2. Авторское свидетельство СССРР 488858, кл. С 12 К 3/00, 1974