Штамм вниигенетика-6, продуцирующий глюкоамилазу

г.ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Сфвз Советских Социалистических Республик(51)м, К,2 С 12 И 1 З/10 12 К 1/00 Государственный комитет СССР по дедам изобретений и открытий(72) Авторы изобретения Л.И. Ерохина и В.В. Иванова Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов 1(54) ШТАММ А 5 РЕЙ 6111 О 5 Й 1 СЕ Р ВНИИГЕНЕТИКА-б, ПРОДУЦИРУЮЩИЙ ГЛЮКОАМИЛАЗУ Изобретение относится к микробиологической промышленности а именно, к производству ферментов, и касается получения штаммов, продуцирующих глюкоамилазу.Глюкоамилаза используется для гидролиэа крахмального сырья и находит широкое применение в народном хозяйстве, главным образом, в хлебо- пекарной, крахмало-паточной, пищевой, текстильной промышленности. Известны способы производства глюкоамилазы, основанные на микробиологическом синтезе этого фермента, осуществляемом различными штаммами культуры Аерет д 1 еРоз гнрет .Наиболее близким по технической сущности к изобретению является штаммвере д 1 еео т 1 дет Т-ЗЗ, продуци-. рующий глюкоамилаэу с активностью в пределах 50-80 ед/мл на 144 ч роста (по глюкозооксидаэному методу). Штамм Т-ЗЗ хранится в Центральном музее промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика под регистрационнымномером ЦМПМ Р -95 (1)Одним.из недостатков использования известных штаммов Аьрегцееоь Мрег при промьааленном получении глюкоамилаэы является обильное спорообразование, которое загрязняет"культурную жидкость и окружающую средуконидиями.Использование олигоспорогенных(со значительно ослабленным образованием конидий) штаммов позволит совершенствовать технологию выделения иочистки глюкоамилазы иэ культурной.жидкости, улучшит качество готовых 10 препаратов и уменьшит загрязненностьокружающей среды.Цель изобретения заключается всоздании высокоактивного, олигоспорогенного отечественного штамма, обра зующего глюкоамилаэу в количестве,достаточном для ее производства методом микробиологического синтезав промышленном масштабе.Предложенный штамм ВНИИгенетика-б 20 Азрещ 1 ЕЕпз п 1 дег является олигоспорогенным мутантом исходногоштамма и получен в результате применения генетико-селекционных методов, Штамм хранится в Центральном 25 музее промышленных микроорганизмови имеет регистрационный номер ЦМПМР - 104.Новый штамм ВНИИгенетикаотличается от прототипа морфологией ко лоний, интенсивностью гидролизакрахмала и желатины, скоростью роста на ломтиках картофеля и более высокой глюкоамилаэной активностьюпри сокращении времени культивирования.Исходный штамм Тхарактеризуется обильным конидиеобразованием,черным цветом колоний, крахмал гидролизует на 3-и сутки, желатинуна 15-е сутки, на ломтиках картофеля слабый рост на 5-е сутки, максимальный Уровень образования глюкоамилаэы составляет 50-80 ед/мл к144 ч ферментации при выращиваниина среде, содержащей 10% крахмала.В отличие от прототипа заявленный,штамм ВНИИгенетика-б характеризуетсяослабленным конидиеобраэованием,светло-коричневым цветом колонийкрахмал гидролиэует на 2-е сутки, желатину - на 12-е сутки, на ломтикахкартофеля хороший рост на 2-е сутки, 20спороношение на 5-е сутки, максимальный уровень образования глюкоамилаэысоставляет 80-110 ед/мл к 120 ч Ферментаций при выращивании на среде,содержащей 7 крахмала. 25Культурно-морФологические свойства.Синтетическая среда Чапека с сахароэой. На 10-е сутки роста при33 фС диаметр колоний 63-70 Ьм.Поверхность колоний сильно складчатая плоская, край ровный. Воздушный мицелийолигоспоровый,слабо развит;цвет колонии коричневато-серый по краям желтый.Конидии светло-коричневого цвета,локализованы в основном в центреколонии. Среда не окрашена. 35Синтетическая среда Чапека с крахмалом. Диаметр колоний 78-80 мм. Поверхность колоний плоская, ровная, вцентре складчатая, край колонии ровный.Воздушный мицелий олигоспоровый, 4 Ослабо развит, цвет колонии сероватожелтый. Конидии светло-коричневогоцвета, расположены в основном в центре колонии. Среда не окрашена.Сусло-агар. Диаметр колоний 62-68 ммПоверхность колонии сильноскладчатая,в центре выпуклая, край колонии неровный 1 цвет коричневато-серый, по краямколонии желтый. Воздушный мицелий олигоспоровый, развит слабо. Конидиисветло-коричневого цвета, расположены в основном в центре колонии в радиусе 13-15 мм.На ломтиках картофеля на 2-е сут"ки роста субстратный мицелий хорошоразвит, желтого цвета, на 5-е сутки 55роСта конидии в небольшом количествесветло-коричневого цвета. Ломтикине .окрашены.физиологические признаки. Желатину разжижает послойно на 12-е сутки. 60 Молоко пептонизнрует к 12-м суткам.Нитраты не восстанавливает. Крахмал гидролиэует на 2-е суткиОтношение к источникам углерода, Глюкозу, галактоэу, лактоэу, фрук1 (ед. А с/г крахмала) Ортофосфорнаякислота 0,05РН доводится водным растворомаммиака до 5,6. КультУРУ выращиваютв колбах Эрленмейера емкостью 750 мл,ссдержащих 100 мл среды, на качалкЕ (220 об/мин) в течение 18 чпри 28 ОС. Инокулят (в количестве 5)переносят в Ферментационную средуследующего состава,ЪКрахмал кукурузный 7,0Мука кукурузнаяМука соевая 1,5БВК 1,5(ИН 4)д НРО 4 0,1Бактериазнаяамила за 1 (ед.А с/гкрахмала) Вода водопроводная (РН 5,6) Остальнае. Процесс ферментации проводят в колбах Эрленмейера емкостью 750 мл при объеме среды 100 мл на качалке (220 об/мин) при 33 С. Через 120 ч Ферментации уровень активности глюкоамилазы при определении глюкоэооксидаэным методом составляет 80-110 ед/мл. Таким образом, предлагаемый штамм ВНИИгенетикахарактеризуется также способностью синтезировать более высокий уровень фермента эа более короткий срок Ферментации. Формула изобретения Штамм АврегдЖРоь гидег ВНИИгенетика-б, продуцирующий глюкоамилазу, Хранится в Центральном музее промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика, регистрационный номер ЦМПМ Р.Морфологические признаки,Синтетическаясреда Чапека с сахарозой.На 10-е сутки роста диаметр колоний 63-70 мм, поверхность колонии сильно складчатая, плоская, край ровный,тозу, мальтоэу, ксилозу, маннозу,рамнозу, сахарозу, арабинозу, сорбит,глицерин ассимилирует.П р и м е р. Использование штаммаВНИИгенетика-б для получения глюкоамилаэы.,Для получения исходного посевногоматериала культуру выращивают на скошенном агаре (среда сусло-агар) при33 С в течение 14 сут,Со скошенного сусло-агара культурупереносят в жидкую питательную средуследующего состава %:Крахмал кукурузный 10,0Кукурузный экстракт 2,0Дрожжи пивные 1,0Бактериальнаяамилаэа73 4263 Составитель Н. ПаниковРедактор Н. Потапова Техред .Я.Бирчак Корректор Г. Решетник Подписное Заказ 200735 Тираж 522 ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5филиал ППП фПатент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Воздушный мицелий слабо развит, Цвет колоний коричневато-серый по краям желтый. Мицелий олигоспоровый, конидии светло-коричневого цвета, локализованы преимущественн э в центре 1 олонии. Среда не окрашена.Синтетйческая среда Чапека с крахмалом. На 10-е сутки роста диаметр колоний 78-80 мм, поверхность колонии плоская, ровная, в центре складчатая, край ровный. Воздушный мицелий слабо развит, цвет колонии серовато-желтый. Мицелий олигоспоровый, конидйи светло-коричневого цвета, локализованы в основном в центре. Среда не окрашена.Сусло-агар. На 10-е сутки роста диаметр колоний 62-68 мм. Поверхность колонии плоская, сильно складчатая, в центре слегка выпуклая, край колонии неровный, Воздушный мицелий слабо развит. Мицелий олигоспоровый, конидии светло- коричневого цвета локализованы в основном в центре колонии. Среда не окрашена.Среда Сабуро. На 10-е сутки рооста диаметр колонии 58-60 мм.Поверхность колонии плоская,слабоскладчатая,край колонии ровный.Воздушный мицелий пло"хо развит, белого цвета,в центре колонии окрашен в желтовато-коричневыйцвет.Мицелий олигоспоровый,цвет кони"дий светло-коричневый.Ломтики картофеля. На 2-е суткироста субстратный мицелий хорошоразвит, желтого цвета, на 5-е суткироста конидий в небольшом количест е светло-коричневого цвета. Ломтии не окрашены.физиологические признаки.Желатинуразжижает.Молоко пептониэирует,Нитраты не восстанавливает, Крахмал гидропизует,, Отношение к источникам углерода.Глюкозу,галактозу,лактозу,фруктозу,мальтозу,ксилозу,маннозу,рамнозу,сахарозу, арабинозу,сорбит,глицерив,ассимилирует.ЪИсточники инФормации,принятые во внимание при экспертизе1. ШтаммАьрещЕь моем Т,Хранится в Центральном музее проьыаленных,микроорганизмов института25 ВНИИгенетика под регистрационным номером ЦМПМ Р.