Штамм 129-продуцент гуанилрибонуклеазы

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ оо 651027(5 Ц М, КаС 12 К 1/02 С 12 Р 13/10 осуларстаенный комитет ссс( но делам изобретений н открытий(54) ШТАММ АсЫпожусез ацгеочег 11 с 111 агцз 129-ПРОДУЦЕНТ ГУАНИЛРИБОНУКЛЕАЗИ Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения нового штамма актиномицета, продуцирующего гуанилрибоиуклеазу, используемого в пище- Ь вой проььыленности для понижения содержания нуклеиновых кислот прн производстве пищевого белка.Известен штамм актиномицета, продуцирующего внеклеточную гуанилрибо- О нуклеазу (гуанил-РНК-азу) Ас 11 пощусез ацгеочег 1 с 111 а 1 цв 1306 (1). Этот штамм характеризуется уровнем биосинтеза внеклеточной гуанилрибонуклеазы при культивировании глубин в ным способом в пределах 500-600 сп. ед/мл культуральной жидкости, отделенной от мицелия.Исходным штаммом является штамм АсСЫогпусез ацгеочег 11 с 111 а 1 цз -38, Ж продуцирующий фермент при глубинном культивировании (2).Недостатком указанного штамма является его низкая активность, которая составляет 10-13 тыс. ед/мл фильтрата культуральной жидкости,Цель изобретения - получение нового штамма активомицета ацгеочег 11 с 11- 1 а 1 цв, отвечающего требованиям ферментного производства, т.е. обладаю 2щего повышенной способностью к биосинтезу внеклеточной гуанил - РНК - азы.Итамм АсЫповусез аигеочег 1 с 11- 1 агцзполучен в результате селекции с применением мутагенного фактора химической природы н хранится в коллекции ВНИИГенетики и селекции промыаленных микроорганизмов, 9 373.Способ получения активного штамма Асг.1 поаусез ацгеочегТ 1 с 111 атцв 129 заключается в подготовке материала для селекционной работы, в выделении моноконидиальных культур, изучении их естественной изменчивости по признаку образования фермента и отборе лучших штаммов, служащих затем исходными культурами для проведения последующих экспериментов.Дальнейший этап-применение метода воздействия химического мутагена нитрозометилмочевнны на конидии отобранной моноконидиальной культуры из рассева исходного штамма Ас 11 поюусез ацгеочегг,1 с 111 а 1 цз 38, выделении большого количества вариантов н рассеве лучшего мутанта.Таким образом штамм Ас 11 потусез ацгеочегг 1 с 111 а 1 цз 129 выделен после обработки кониднй исходного штам3 651027 ма нитроэометилмочевиной в концентрации 1 в течение 2 ч. Полученный мутант Ас 1 Ыокусез ацгеочегг 1 с 1 ЕЕайцз 129 проверен по ферментативной активности при хранении и пересевах на агариэированной питательной среде следующего состава Ъ): мука пшенич- б ная, гидролиэованная о-амилазой,3, растворимый крахмал, гидролизованный с -амилазой - 4, сульФат аммония - 0,6, калий фосфорнокислый одноэамещенный - 0,05, мел - О,б, 10 калий хлористый - 0,25; агар-агар - 2,0.Культивирование штамма 129 в глубинных условиях проводили на жидкой питательной среде того же состава, только беэ агара.Рост штамма Ас 11 повусез ацгеоУегг.1 с 1 ЕЕагцз,129 на указанно. среде в условиях глубинного культивирования на качалке при 180 об/мин и20 28-30 С очень интенсивный, штаммоимеет вид густой кашеабраэной массы. Максимальное образование Фермента в культуральной жидкости наблюдается после 72 ч культивирования продуцента. Общая РНК-азная активность, определяемая спектрофотометрическим методом по измерению поглощения кислоторастворимых продуктов распада РНК (б мг/мл), составляют 25-30 тыс. ед/мл Фильтрата культуральной жидкости, при этом активность гуанил-РНК- азы после прогрева в кислой среде составляет 22,50 - 27,бО тыс. ед/мл. Показатели активности исходного штамма не превышают 10-13 тыс. ед/мл. 38Полученный штамм имеет следующуюхарактеристику.Морфологические признаки.Твердая среда, содержащая осахарен)ные сК -амилазой пшеничную муку и40крахмал, соли. Мицелий имеет вид,счень тонких, разветвленных гиф, Стенки клеток мицелия прямые. Иирииаклеток мицелия варьирует от 0,71 до0,93 мкм. Спороносцы с примитивными 48спиралями с 0,5 - 1 завитком, длинные или короткие, расположены моноподиально, Споры продолговатые,овальные, с гладкой оболочкой.Культурально-физиологические 50признаки.При выращивании на такой среде колонии мутантового штамма Ас 11 пощусезацгеочегЫсИЕаСцз 129 круглые, краяволнистые, с радиальной складчатостью кремового цвета, в центральнойчасти слегка приподнятые над субстратом со скудным воздушным мицелиемрозового цвета. Диаметр гигантскойколонии на 10 сутки роста 10-12 мм;Нижняя поверхность колонии гладкая,красного цвета, среда не буреет,.пигмент,в среду невыделяется, наагаризированной среде Чапека с 3%сахароэы колонки круглые, оранжевогоцвета, край колонии волнистый, с радиально-поперечной складчатостью,воздушный мицелий слабо развит, светло-морковного цвета, диаметр колонии 8 мм,На крахмал-аммиачной среде колонии круглые малинового цвета, поверхность бархатистая, диаметр колонии 8-8 мм, среда не окрашена. НаМПА образует небольшие колонии кремового цвета диаметром б мм с радиальной складчатостью, воздушный мицелийскудный,.неокрашенный, не буреет. Насусле-агаре образует маленькие колонии диаметром 5 мм, поверхность бугристая, воздушный мицелий слабо развит, в центре розового цвета,по краям - кремового. На картофельно-пептонном агаре образует колонии оранжевого цвета диаметром 12 мм, воздушныймицелий розового цвета, край волнистый, поверхность бархатистая, вокрУгколонии образуется бурое кольцо. Напептонно-кукурузном агаре растет ввиде небольших колоний (7 мм) бежевокремового цвета с радиальной складчатостью, скудный воздушный мицелий,среда не буреет. На ломтике морковирост отсутствует; на ломтике картоФеля рост очень слабый; мясо-пептонную желатину разжижает в верхнем слое.Молоко не свертывает и не пептонизирует. Нитраты не восстанавливает.Отношение к углеводам: крахмалгидролиэует интенсивно, Глюкозу ифруктозу гидролизует с образованиемщелочи, остальные сахара - с образованием кислоты.Предлагаемый штамм Асг 1 пошусезацгеочегг 1 с 1 ЕЕагцз 129 позволяет получить внеклеточную РНК-азу микробного происхождения, используемуюв пищевой промышленности для улучшения вкусовых достоинств пищевого белка. При этом активность штамма. Ас 11 поюусез ацгеочегг 1 с 1 ЕЕа 1 цз 129, продуцирующего внеклеточную гуанил-РНКазу, составляет 25-30 тыс. ед/мл,что в 2-3 раза выше, чем у исходного.Формула изобретенияИтамм Ас 11 погпусез ацгеочегг.1 с 1 ЕЕа 1 цз 129 - продуцент гуанилрибонуклеазы. Хранится в коллекции ВНИИГенетики и селекции промышленных микроорганизмов, Р 373,Морфологические признаки.Мицелий на твердой питательной среде,содержащей осахаренные оС -амилазойпшеничную муку и крахмал, соли, имеетвид тонких, разветвленных гиф. Стенки клеток мицелия прямые, шириной0.,71-0,93 мкм. Спороносцы с примитивными спиралями с 0,5 - 1 завитком,длинные или короткие расположены моноподиально, Споры продолговатые,овальные с гладкой оболочкой.Культурально-физиологическиепризнаки.651027 Составитель М. ЛаринаРедактор Б. Федотов Техред И.Асталош КорректорО. Билак Тираж 527 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Заказ 736/27 филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул, Проектная, 4 На твердой питательной среде, состоящей из осахаренной о -амилазой пшеничной муки и крахмала, а также соли, колонии круглые, кремового цвета, край волнистый, с радиальнойскладчатостью. Мицелий воздушный,развит слабо, розового цветаДиаметр гигантской колонии надесятые сутки роста 10 - 12 мм, Нижняя поверхность колонии гладкая,красного цвета. Среда нз буреет,пигмент в среду не выделяется,Агаризированная среда Чапека с 3сахарозы.Колонии круглые, оранжевого цвета,край колонии волнистый,с радпальпопоперечной складчатостью. Воздушныймицелий слабо развит, светло-морковного цвета, диаметр колонии 8 мм.Крахмало-аммиачная среда.Колонии круглые, малинового цвета,поверхность бархатистая, диаметр колонии6-8 мм, среда не окрашена.Мясо-пептонный агар.Колонии небольшие, кремового цвета,диаметр б мм, с радиальной складчатостью, Воздушный мицелий скудный,не окрашенный, среда не буреет.Сусло-агар.Образует колонии диаметром 5 ьм,поверхность бугристая, воздушныймицелий слабо развит,в центре розового цвета, по краям- кремового.Картофельно-пептонный агарКолонии оранжевого цвета, диаметр 12 мм, воздушный мицелий розовогоцвета, край волнистый, поверхностьбархатистая, ьвокруг колонии образуется бурое кольцо.Пептонно-кукурузный агар.Колонии небольшие, диаметр 7 ю,6 бежево-кремового цвета, с радиальной складчатостью, воздушный мицелий скудный. Среда не буреет.На ломтике моркови рост отсутствует. На ломтике картоФеля ростслабый. Мясо-пептонную желатину разжижает в верхнем слое,Молоко не свертывает и не пептониэирует,Нитраты не восстанавливает,Отношение к углеводам. Крахмалгидболизует интенсивно, Глюкозу иФруктозу гидролизует с образованиемщелочи, остальные сахара - с обра"зованием кислоты,Активность штамма Асг 1 повусев20 апгеоуегт.1 с 111 а 1 цв 129, продуцирующего внеклеточную гуанил-РНК-аэу,по сравнению с известными в 2"3 разавыше и составляет 25-30 тыс. ед/мл. 25 Источники инФормации, принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССРР 412249, С 12 Э 13/10, 1972.30 2. Прикладная биохимия и микробиология т. 12, вып. 5, с. 645649, 1976.