Способ количественного определения глюкозы

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик(51)М, Кл.2 С 01 М 21/24 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(72) Авторы изобретения В.П, Гаврилов, А,А. Туманов и Е.А, Таранкова Научно-исследовательский институт химиипри Горьковском государственном университетеим. Н.И. Лобачевского(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯГЛЮКОЗЫ онглощения гликоэилзмин фенил В -Д- гли ко э илами нобензойной кислоты в Спектры Ю-и-карбока) и параа повышение деления,Изобрете ние относит ся к ан алитической химии, а именно к способам количественного определения глюкозы,Известен способ количественного определения глюкозы путем обработки анализируемой пробы иодатом калия, серной кислотой с последующей отгонкой образовавшегося формальдегида и обработкой его сульфитом натрия и хромотроповой кислотой, и спектроФотометрированием полученного раствора 1). Недостаток способа - его длительност ь и сложност ь . 15Наиболее близким к описываемому изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определени я глюкозы путем обработки ан:-з:лэнруе мой пробы ледяной уксусной кислотой, парааминобензойной кислотой при 100 оС с последующим охлажде:-.:нем и спектроФотометрированием полученного раствора 23, 25Недостатком способа является ниэ 3 ая чувствительность определения (05-1, 2 мг/мл) .Цель изобретения -чувствительности опре 30 Поставленная Цель достигаетсяобработкой анализируемой пробы ледяной уксусной кислотой, парааминобензойной кислотой в иэопропиловомспирте при 70-75 С с последующимохлаждением и обработкой охлажденного раствора соляной кислотой дорН О, 99-1,01 и спектрофотометрированием полученного раствора,Отличием способа является проведение обработки в присутствии иэопропилового спирта при 70-75 С и последующая обработка охлажденногораствора соляной кислотой до рН 0,991,01,В результате прямой конденсацииуглеводов и парааминобенэойной кислоты в укаэанных условиях образуетсягли козил амин СН,ОН0 ои -Он+ н к- у-сООи -2 но ои,00 0,1 н. растворе НС 1 существенно различаются, В результате ионизацииэлектронно-допорной аминогруппы спектрпоглощения парааминобенэойной кислотысдвигается в коротковолновую областьс максимумом при рН 0,99-1,01 225 нм.Это обеспечивает возможность определения гликоэиламина в присутствиипарааминобензойной кислоты, Определение гликоэиламина осуществляют вуказанных условиях путем измеренияоптической плотности растворов при- 290 нм в кварцевых кюветах- 1 см). Нижний предел Обнаружения,характеризуемый молярным коэффициентом светопоглощения (зкстинкции), составляет для гликозиламина 154, 2 10 з, что обеспечивает целесообразность применения предлагаемогоспособй для определения углеводов иуглеводметаболицирующих микроорганизмов и анализа процессов микробнологического окисления сточных вод.П р н м е р 1. В пробирки со шлифами помещают 1 мл водного раствораглюкозы (0,01-5,0 мг/мл) и последовательно добавляют 0,3 мл ледяной 25уксусной кислоты и 3 мл 1-ногораствора парааминобенэойной кислотыв изопропиловом спирте.Растворы энергично перемешиваюти помещают на 60 мин в термостат ЗОпри 70 С, затем на 30 мин в холодильник (3-4 ОС) . Непосредственно передизмерением разбавляют растворы в25 раз 0,1 н. НС 1 (рН 1,0) и измеряютОПТИЧЕСКУЮ ПЛОТ НОСТ Ь ПРИ Л ис- 290 нм в кюветах (1 = 1 см) наспектрофотометре СФ, Результатыпроведенного определения глюкозыпредставлены в.табл,1,Таблица 1 П р и м е р 2, Способ по примеру 1, отличающийся использованием температуры термостатирования растворов 75 С,Результаты определения представлены в табл.2. П р и м е р 3. Способ по примеру 1, отличающийся использованием температуры термостатирования растворов 80 С.Результаты опребеления представлены в табл,З Повышение температуры термостатирования выше 80 бС нецелесообразно, так как приводит к изменению объема анализируемой смеси вследст выкипания.П рРу 1 ртемпер и м е р 4, Способ по примеотличающийся использованиематуры термостатирования 60 С732734 5,00 мг/мл) и минимальную среднюю ошибку определения (5) .Зависимость ошибки определения от определяемых концентраций представлена в табл,5.Таблица 5 Результаты определения представлены в табл.4. Таблица 4 и = 5;= 0,95,02 т. 0,1 20 0,10 4 4,01+ О,5,10+ О,Преимуществперед известнымсоздает возможуглеводов в инРезультатыточности, чувсности настоящебов представле 5,00 Инт ерв ал температур термост атирования 70 С - 75 С является оптимальным при проведении процесса, так как обеспечивает максимальный диапазон определяемых содержаний (0,01 Таблица б РеагеПарааминобензо ная кис лота(из веств ный спос мг/мл крови Парааминобензойнаякислота 0,01-5,0(насто 290 я с б) мпер атур ебработкой охяной кислотой пилового спирта при те70-75 С с последующей олажденного раствора солдо рН 0,99-1,0.Йсточники информации,принятые во внимание при зкспе1. Коренман И.М, Фотометранализф, Методы определенияческих соединений. М., Хими1970, с. 207.2, Там же, с, 157-158 (прототип) изобретениявенного определеобработки анализиой уксусной киснзойной кислотой последующим охлаждеметрированием поотличаюо, с целью повышети определения, обпри сут ст вии и зопро 5 ртйэеи ческий ор гани .я 1 б 019 Подписно ИИПИ Заказ 1550/8 ППП 1 Патентф аяр У л. Про ил ФормулаСпособ количестния глюкозы путемруемой пробы ледялотой, парааминобпри нагревании снием и спектрофотлученного растворщийся тем,чния чувствительноработку ведут в м настоящего способа является то, что он ость определения ервале 0,01-5,0 мг/мл. равнения показателей вительности и длительо и известного спосоы в табл.б.