Штамм астinомусеs ruтgеrsеnsis n88-продуцент ферментов

СОЮЗ СОНЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСИИРЕСПУБЛИН НОМИТЕТ СССР ТЕНИЙ И ОТНРЦТИЙПИ ЕТ О ЛЬСТ акФизиолого - биохтва. кие св лнзует, желатинумолоко энергичтвертые суткиет на 30-ые сутки ов не образует. озу, арабинозу, руктозуНе поахароэу, рамнозу Крахмал не гидр разжижает умеренно но свертывает на ч и слабо пентониэир Меланоидных пигмеи Потребляет: глю ксилозу, маннит и требляет; инозит,и раффинозу. Антагонистическ Обладает антаго ствами по отношен териям родов Вас)1 Рьецдовопаь, М 1 сго(71) Всесоюзный научно-исследователь.ский институт прикладной энзимологиии Институт микробиологии АН СССР(54)(57) ШТАММ АСТ 1 МОМУСЕ 5 ВУТОЕН 5 ЕЙ 515 988 - ПРОДУЦЕНТ ФЕРМЕНТОВ,ЛИЭИРУЮЩИХ КЛЕТОЧНЫЕ СТЕНКИ МИКРООРГАНИЗМОВ, штамм хранится во, Все"союзной коллекции микроорганизмовпод Р 592 и депонирован в музее чистых культур ВНИИ прикладной энзимологии под Р 151.Морфологические признаки,Культуры бурые, воздушный мицелий серый или темно-серый. Средняятолщина гиф 0,6-0,8 мк. Спороносцыискривленные, иногда с неполнымиспиралями. Споры овальные и продолговатые, Поверхность спор гладкая.Культуральные признаки.Кукурузная среда, состоящая изследующих компонентов, г/л: кукурузный экстракт в , 10,0; глюкоза - 5,0; йаС 1 - 5,0; 1,)1 ЩВЬ 4 -3,5,СаСО)- 5,0;крахмал нерастворимый 15,0; агар-агар - 20,0. Воздушныймицелий отсутствует, субстратный ми.целий бледно-медовый.Кукурузная среда, состоящаяиэ следующих компонентов г/л: кукурузный экстракт - 10,0, МаС 13,0, (,МН 4150 - ЗРО, СаСО 2,5крахмал нерастворимый - 10,0; агагар,0. Воздушный мицелий отс 3 б 1)С 12 М 100,С 12 Р 1 ствует, субстратный мицелий бледно- медовый.Овсяная среда с дрожжевым экстр том, Рост воздушного мицелия обиль ный,цвет соломенно-желтый, субстратный мицелий желтоватый.Среда Гаузе, состоящая из следующих компонентов, г/л: крахмал нерастворимый - 20,0, М 9504 7 НО,5; йаС 1 -0,5 КМО) - 1,0,Р КНРО ц - 0,5; Ге 504 - 0001, агар- агар - 20,0. Воздушный мицелий отсутствует, субстратный мицелий бесцветный.Среда Ваксмайа с глицерином, воздушный мицелий белесый, субстратный мицелий бесцветный.Среда СРс глюкозой следующего состава, г/л: СаСО 9 - К)10 ) - О, 7, М 9504 7 НО - 0,35, МаС 1 - 0,35, КРНРО - 0,53, Ре 50 - след гллкл- С,л за - 14,0, агар-агар - 20,0. Воздушный мицелий отсутствует, субстрат- Я ный мицелий бесцветный.Сусло-агар. Воздушный мицелий отсутствует субстратный мицелий бесцветный.Изобретение относится г микробиолбгическбй промышленности и касается нового штамма - продуцента ферментов, лизирующих клеточные стенки микроорганизмов, используемых в пищевой промышленности, медицине, сельском хозяйстве.Известей штамм рода Ас 1 пощусея, а именйо Асс 1 повусеь с 1 пегоеыь За - продуцент литических ферментов 11 .10Недостатком известного штамма является невысокаялитическая актив- ностЬ продуцируемых ферментов.Целью изобретения является получение штамма микроорганизмов - про дуцента Ферментов, лиэирующих клеточ-. .нйе стенки микроорганизмов, обладающего высокой литической активностью.Предлагаемый штамм выделен из подзолистых; почв южной заокской части Московской области, Из выделенных многочисленных актиномицетов в процессе стабилизирующего отбора отобран штамм Ас 1 полусеа гцйдегвеп" ь 1 ь 988 как продуцент комплекса 25 лизирующих ферментов. Лиэирующее действие на дрожжи и другйе микроорганизмы проверяли методом агариэованных блокОв на среде следуюцего состава, г/л: КМО - 1,0; К 2 НРО 4 0,5, МаС 1 - 0,5; Мд 504 7 ЙпО - 0,5, СаСО - 0,5; кормовые дрожжи,0; агар-агар - 20,0. Штамм Асй 1- пощусев гц 1 дегвепь 1 Р 88 депониро-ван но Всесоюзной коллекции микроорганизмов под 9 592 и во ВНИИ З 5 ,прикладной энэимологии под Р 151. Штамм бтличается от уже иэвестных продуцентов лизирующих ферментов своимиморфологическими, фйзиологическими и культуральными признака миШтамм имеет следующую характе"ристику.Морфологические признаки.45Культуры бурые, воздушный мицелий .серый или темно-серый. Средняя толщина гиф О,б,8 мк. Спороносцы искривленные, иногда с неполными спиралями. Сйоры овальные и продолговатые. Поверхность спор гладкая,Культуральные признаки штамма Асй 1 поеусез гн 1 дегаепз 1 а Р 88 на первые сутки роста.Кукурузная среда, состоящая иэ следующих компонентов, г/л: ку курузный экстракт - 10,0 1,по сырому весу), глюкоза - 5,0, йаС 1 - 5,0, (ИН 4)1504 - 3,5; СаСО - 5,0, Краимал йерастворимый - 15,0; агар-агар -20,0. Воздушный мицелий отсутствует, 60 субстратный мицелий"бледно-медовйй.Кукурузная среда, состоящая из "следующих компонентов, г/л: кукурузный экстракт - 10,0, йаС 1 - 3,0, 1,ИНт 504 - 3,0; СаСО - 2,5; крахмал нерастворимый - 10,0; агар-агар -20,0. Воздушный мицелий отсутствует,субстратный мицелий бледно-медовый,Овсяная среда с дрожжевым экстрактом. Рост воздушного мицелияобильный, цвет соломенно-желтый (Л 2,субстратный мицелий желтоватый,Среда Гауэе, состоящая иэ следующих компонентов г/л: крахмал нерастворимый .- 2,0, Мд 504 7 НО0,5; МаС 1 - 0,5; КМО ) - 1 юО; К 2 НР 00,5, Ге 504 - 0,01, агар-агар - 20,0.Воздушный мицелий отсутствует,субстратный мицелий бесцветный.Среда Ваксмана с глицерином. Воздушный мицелий белесый, субстратныймицелий бесцветный.Среда СРс глюкозой следующегосостана, г/л: СаСО 1 - 0,7, КИО0,7, Мд 50 4 7 Н 20 - 0,35, МаС 1О, 35; КНРО 4 - 0,53, Ге 50 - следы;глюкоза - 14,0 агар-, агар - 20,0.Воздушный мицелий отсутствует, субстратный мицелий бесцнетный.Сусло - агар. Воздушный мицелийотсутствует, субстратный мицелийбесцветный.Физиолого-биохимические свойства.Крахмал не гидролизует, желатинуразжижает умеренно, молоко энергично свертывает на четвертые суткии слабо пептонизирует на 30-ые сутки.Меланоидных пигментов не образует.Потребляет: глюкозу арабинозу,ксилозу, маннит, фруктоэу; непотребляет: инозит, сахарозу, рамнозу и раффинозу.Антагонистические свойства.Обладает антагонистйческими свойствами по отношению к дрожжам и бактериям родов Вас 111 оь, ЕясЬег 1 сЬ 1 а,Рвецдоиопав, М 1 сгососсиа,П р и м е р. В качестве посевногоматериала при выращивании продуцента в колбах использовали семисуточную культуру Асй 1 поеусеь ги 1 дегаеп"ь 1 а 988 выращенную на стандартнойкукурузной среде 92 следующего состава, г/л: кукурузный экстракт - 10,0;глюкоза 5, О, Ма С 1 - 5, О (М Н 45 043,5, СаСО 1 - 5,0; крахмал нерастворимый - 15,0; агар-агар - 20,0при 28-30 С. Споры смывали с косяка15 мл дистиллированной стерильнойводы, и в каждую колбу вносило но3 мл споровой суспенэии (10 -10 дспор н 1 мл 1;.Для глубинного культивированияиспользовали среду следующего состава, г/л: КНРО - 2,5 ф Мд 5047 НпО1,0, ИН 4 С 1 - 0,62,пекарские дрожжи - 2,5; соевая мука - 10,0, дрожжевой автолиэат - 1 мл.Компоненты питательной среды растворяли в дистиллированной воде в вышеуказанной последовательности, рН среды перед стерилизацией 7,5,704179 Лизирующая активность =лизисаразведениеЛед/мл,Составитель Т.МелентневаРедактор М.Кузнецова Техред А.Ач Корректор,Л.Вокшан Тираж 523 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Заказ 6394/2 Фее ш еаш еее еефилиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Культивирование вели в 750 миллиметровых качалочных колбах по 50 мл среды в каждой колбе. Среду в колбах стерилизовали при 1,3 атм в течение 40 мин. Продолжительность культивирования 24-30 ч на круговых качалках при 220 об/мин.Литическую активность определяли турбидиметрическим методом. К 1 мл субстрата (суспензии дрожжей Сапд 1 Ьа) добавляли 1 мл трис-буфера 0,2 М при 10 рН 7,0-7,2 и 2 мл культуральной жидкости или Ферментного раствора, разведенного так, чтобы за 1 ч инкубации при,40 С оптическая плотность реакционной смеси измеряли до и пос ле инкубации (начальная экстинкция должна быть в пределах 0,7-0,8) на ФЭКпри длине волны 537 мм в кювете 1 мм с расстояниями между стенками.;20Расчет проводили по Формуле:лизиса субстрата А-В . 100,В где А - начальная экстинкция,В - конечная экстинкция; 25Перечислениелизиса субстратана единицы лизирующей активностина мл культуральной жидкости; где Д - количество Ферментного раст- .вора в реакционной смеси.Штамм Асй 1 поеусеь гц 19 егьепьь Р 88 начинает синтезировать лизирующие ферменты через 24 ч культивирования и достигает максимума литической активности через 30 ч. Культуральная жидкость из Ас. гцсдегьеп 1 з М 88 при разведении в 10 раз лизирует СапЬ 1 Ьа цй 111 ь на 40-45, 5 ассЬ, сегеч 1 в 1 ае на 30-35, ЕвсЬе- г 1 сЬ 1 а со 11 - на 50-60, М 1 сгос.1 уьоЬе 1 сЬ 1 сць на 45-55, Р 5 ецЬ, Гцогеьсепв - на 34-45, 8 ас. зцЬй 1- 11 - на 40-50.Выход ферментного препарата 17 г на 1 л культуральной жидкости.Активность 20000-22000 ед/г (по отношению к дрожжам рода СапЬ 1 Ьа),Лизирующий Ферментный препарат из Асс 1 поеусез гцсяегьепя 1 з Р 88 содержит, мл/г: растворимых белков - 200-220, аминного азота - 7,0-7,5, редуцирующих сахаров - 45- 47.