Способ получения кормогризина

ОЛБ ЯЗОВ Союз Советских Социалистки ескид РеспубликА-И-И Е ЕТЕНЯЯ ЬСТВУ АВТОРСКОМ 1) Дополнительное к авт. свид 2 1)М 2) Заявлено 191176(21) 2423818/3012 0 с присоединением заяв(23) Приоритет Государствеииый коСССРоо делам изобрети открыти й итет й 0779, Бюллетень М 27(5 15.779.9 (088,8) публиковано ата опублик я описания 2 Ь 07.7 2) Авторы иэобретени,А.Гаврилова, Л.А.Лямина, Ю.Д.Колыганов и Г.С.Доронина оюзный научно-исследовательский институтробиологических средств защиты растений и бактериальных препаратов 1 Заявитель 4 С ПОЛУЧЕНИЯ КОРМОГРИЗИ антибиотитое О Изобретение относится к микробиоло- гической промышленности, в частности к способу получения препарата кормогризина действующим началом которого является антибиотик стрептотрициновой группы - гризин.В состав различных стрептотрициновых антибиотиков входят компоненты Р, Е, О, С, В, содержащие соответственно,1, 2, 3, 4, 5 остатков-лиэИна. Антибиотик гризин состоит, в основном, иэ компонентов Г и Р.Известен способ получения препарата кормогризина (1. Способ заключается в том, что культуру продуцента Ы.фмяоЗ выращивают на качалке в колбах с питательной средой, содержащей кукурузную муку, крахмал,сернокислый аммоний, хлористый натрий, фосфорнокислый калий и мел. Выращенный посевной материал переносят в ферментеры со стерильной питательнойсредой того же состава. Ферментация длится 48-55 ч,после чего культуральную жидкость, содержащую антибиотПс гризин, подкисляют до рН 5,0-5,5 и подвергают упариванию. Упаренная культуральная жидкость поступает на распылительную сушилку и далее высушенный препарат стандартизуют до содержания 5, 10, 40 г чистогока в 1 кг препарата.Однако этот способ не обеспечивает получения препарата с постоянным составом антибиотика гриэина. Кроме компонентов Р, Е и 0 в антибиотике может содержаться в виде примесей различное количество компонентов В и С, обладающих значительно большей токсичностью, что снижает качество препарата. Количество указанных примесей в промышленных препаратах антибиотика может достигать 45-50 от общего содержания антибиотика в препарате. Кроме того, упаривание культуральной жидкости при укаэанных значениях рН приводит к значительным потерям антибиотика.Цель изобретения - разработка способа, обеспечивающего возможность получения кормогризина с повышенным выходом У ,Е и П - компонетов, т.е. содержащего минимальное количество примесей С и В.Эта цель достигается тем, ч в способе, включающем выращивани продуцента кормогризина Яс 1. фъеиЬ в глубинных условиях на питательной среде, содержащей кукурузную муку, крахмал и минеральные соли с после0,030,20,5 Влияние знантовой кислоты на образование основных комлонентов гризина (Р, Е и О)82,565,674,6565563,1Среди65,5 96.9 97,4 , 80,4,72,2 87,2 80,3 89,7 го спосо полуй препаизо 6 рених и тех ата на 6предлагаемо сти позволи окачественн Кроме тог жность на о учать препаИспользовани ба в промяшленн чить более высо рат кормогриэин тение дает возм же мощностях по 20-25 больше. ормула иэобрете Способ получен включающий выращи ЮфЧьевз в глуб питательной среде ную муку, крахмал я кормогриэинаание продуцента егонных условиях насодержащей кукурузи минеральные солищамподкислением, упариванием и"высушиванием культуральной жидкости, в питательную среду для культивирования продуцента Яс 1. ф(5505 вносят знантовую кислоту для разобщения процесса окислительного Фосфорилиро(вания в концентрации 0,05-0,2, при этом культуральную жидкость передвыпариванием подкисляют до рН 3,0- ,5. П р и м е р. Для выращивания продуцейта гриэина используют срепу следующего состава, Ъ 1Кукурузная мука 2,0Крахмал 1,5Сернокислый ммоний 0,5"0,6ФосфорнокислыйкалийПовареная сольМелВода водопроводная Ло 100,пДля приготовления среды (1 л) для "вйращиванкя посевного материала 500 кп водопроводной воды нагревают до 50 фС, засыпают 20 г кукурузной мухи к подогревают до 90 С, Разваривают Муку в течение 5 мин; в среду вносят 5-6 г (НН) ЯО 300 мг КНРОи 5 г СаСО, 15 г крахмала, взмученного в холодной воде, который вносят в последнюю очередь. Полученную таким образом среду охлаждают и доливают водой до 1000 млурН 6,8-7,3 доводят концентрированной кислотой (НС 1).Приготовленную среду разливают в колбы емкостью 750 мл по 100 мл и , стерилизуют автоклазированнем при 1,2 ати в течение 40 ьвн.Стерильность среды опеределяют путем выдерживания"ее в течение 24 ч жрн 37 ОС и анали 5070 4за высевов на плотные питательныесреды общепринятым методом.Кусочек картофельного агара с культурой Ас 1, ф 1 Ы 05 шт 70 (иэ пробирки) стерильно вносят в колбы со средой. Засеянные колбы ставят на качал ку (240 об/мин) и выращивают при тем"пературе 271 С в течение 36 ч.Выращенный и колбах посевной материалпередают на засев питательной среды(приведенного состава) в посевной ап- )О парат, где культура выращивается притемпературе 27 1 1 С в течение 1820 ч.Готовый посевной материал из посевных аппаратов направляют в Ферментеры с Ферментоционной средой тогоже состава, что и среда в колбах.Кроме того, в ферментеры вносят стерильно эн-нтовую кислоту в концентрациях 0,05-0,1. Процесс ферментацичидет при температуре 27 1 1 С в течение 48-55 ч. Полученную культуральную жидкость подкисляют до рН 3,03,5, упарнвают температура 45-50 фСв течение 1 ч и затем высушивают нараспылительной сушилке ( Т =1401вх+5 С, 7 =65+5 С) .для анализа компонетного составагризана проводят выделение гриэанаиз культуральной жидкости общепринятым методом на смоле КБН. Компонентный состав гризина определяют спомощью аналитической хромотографиина КМ-сгфадексе ( =25 в градиентеЯаС 1 0,6-1,2 М с последующим спектроФотометрированием элементов при д =216 мм, Результаты осуществления способа представлены в таблице (содержание суммы компонентов Г, Е и Р в 40 Ъ ко всему количеству антибиотиков)67507 Составитель Л. МураяРедактор Т. Зубкова Техред И.Келемвд Корректор И.Пожо Заказ 4229/21 Тираж 525 ПодписноеЦИИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий:113035, Москва, Ж-Э 5, Раущская наб., д. 4/5 Филиал ППП фПатент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 с последующим подкислением, упариванием и высушиьанием культуральной жид-. кости, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повидения содержания в кормогризине Р, Е и О -"компонентов, при выращивании продуцента в питательную среду вносят энантовущ кислоту 5 ;для разобщения процесса окислительного фосфорилирования в концентрации 0 В0,05-0,2, при этом культуралънуьжидкость перед упариванием подкисляют до рН 3,0-3,5. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1. Решетов П.Д. Получение и свойства стрептотрициновых антибиотиков, М., 1964, (автореферат диссертации).