Способ получения препарата для токсикологических исследований объектов внешней среды

в) КЦ5 Ц О 1 РЕТЕН вич. Вино Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам ИСАНИЕ И(23 Я 36662/13ИОЫИ4333 ИЗВ Бап. а ИИОфЩЪакщра ДмарийВпвйаир Ойвйавт(64 СБРОСОВ ЙОЯУЧЯВСИК 686 ГИЧВЗИХОВИМИааяиинейЦЩ Исиаъзвиние: ивадоваиийобьааоввнеаиейретениипрепарат соде ЕЯВ ПРЕПАРАТА БАЙЯ ВХЯЕДОВАЙИЙксиааогичесев иссп среды Сущность изржит в качестве компоне чувствитепьиого к товсинам, купьтуру инфузории Юрой Йе 1 пв сухую, в качестве обьекта питания инфузории - споры бактерии 83 ОВО 5 50 ЬИОь Купьтивирование инфузорий проводят до стадии цисть а питатепцюто субстрата 8. ЧИЖ - до стадии спорм ВЬЮ)йиивзот и социняют до момента использованиа Препарат депепьное время сохраняется при комнапай температуре В процессе хранения чувствительность препарата к токсинам не изюеняетса 4 табаИзобретение относится к токсикологии и биотехнологии и может быть использовано при токсикологических исследованиях объектов внешней среды человека и животных,В современной токсикологии широко практикуются исследования объектов внешней среды с помощью диагностических препаратов, содержащих в качестве активно действующего начала инфузории, чувствительные к токсинам.Известен препарат, используемый в животноводстве и содержащий в качестве чувствительного к токсинам компонентакультуру инфузорий ТегаЫеепа ругИога 1 з и ростовую питательную среду,Однако получение и поддержание препарата в рабочем состоянии требуют постоянного культивирования инфузорий, а этовлечет за собой изменение их чувствитель 5 10 20 ности к токсинам, а также дополнительные затраты труда и материалов.Известен препарат для токсикологических исследований объектов внешней среды на основе культуры Рагапес 1 цгп 25 .савда 1 цв, приготовляемой в периодическом и непрерывном процессах.Однако препарат и способ его получения обладают теми же недостатками, что и вышеописанный препарат, 0Целью изобретения является повышение эффективности оксикологических исследований. объектов внешней среды человека и животных. за счет уменьшения затрат труда и материалов при получении диагностического препарата, увеличения срока его сохранения без изменения чувствительности к токсинам и необходимости постоянного культивирования,Это достигается тем, что диагностический препарат для токсикологических исследований объектов внешней среды содержит в качестве компонента, чувствительного к токсинам, культуру инфузории Сородэ зте 1 пП сухую, в качестве объекта 45 питания инфузории - споры бактерии ВасПоз зцЬ 011 з, а в известном способе получения препарата для токсикологических исследований, включающем культивирование инфузорий, их доводят до стадии цисты, 50 а питательный субстрат В.зцЬП 1 з - до стадии споры, высушивают и сохраняют до момента использования.Способ осуществляют следующим образом.55В стерильную углеводно-солевую дрожжевую среду комнатной температуры вносят культуру С.зеи 1 в количестве 500 - 1000 экз./мл и культуру В.зцЬП 1 з в количестве 1,0-10,010 микообных тел/мл и культивируют при температуре 20,0 - 22,5 ОС и постоянной аэрации среды до конечной концентрации клеток С,з 1 е 1 пП не менее чем 10000 экз./мл,Готовую культуру разливают по 0,5-2,0 мл в стеклянные флаконы и инкубируют при температуре 20,0-22,5 С до полного инцистирования инфузорий. Затем среду из флаконов удаляют, культуру инфузорий высушивают при той же температуре, флаконы герметично закрывают.Таким образом, готовый препарат содержит 5-20 тыс.экземпляров Сме 1 пП и В,зуЬОПз в остаточных количествах, достаточных для размножения бактерий после внесения питательной среды, Препарат готов к употреблению и сохраняет свои свойства в течение года хранения при температуре 15,0-25,0 С в сухом. защищенном от света месте.С целью экспериментальной проверки заявляемый объект изобретения исследовали при различных значениях технологических параметров внешней среды, Результаты исследований приведены в табл. 1-4,Из данных табл, 1 следует, что инокуляционная доза культур С,зеи 1/В,зцЬтП 1 з ниже 1,0 10 /5,0 10 экз./мл давала конЭ -, бцентрацию клеток инфузорий ниже требуемой для диагнастикума. Дозы ММ 3 - 5 давали концентрацию инфузорий, достаточную для приготовления диагностикума, - 10 - 11 10 зкз./мл, однако при использовании дозы М 5 образовалось избыточное количество питательного субстрата, что отрицательно сказывалось на времени инцистирования С.зтеп П.Таким образом, данные табл. 1 свидетельству;от о том, что оптимальные инокуляционные дозы С.зе 1 п 11/В.зуЬО 11 з лежат в пределах 1,0-1,5 10 /5,0 - 10,0 10 экз./мл.Из данных табл. 2 следует, что температура культивирования ниже 20 ЯС и выше 25,0 С давала концентрацию С,зте 1 пП ниже необходимой для диагностикума, а оптимальные температурные пределы лежали между 20,0 С и 25,0 С.Результаты исследований зависимости времени инцистирования С.злепП от температуры окружающей среды, приведенные в табл. 3, показали, что оптимальные пределы находятся между 20,0 С и 22,5 ОС; При более низких и более высоких температурах инцистирование шло свыше 30 ч,При отработке условий хранения готового препарата (табл, 4) выяснилось; что при температуре 20,0-22,5 С выживаемость2002263 СмепИ после 3 месяцев хранения достигала 95, концентрация после инцистиравания при этом была в пределах 8,5 - 9,510 экз./мл.При температуре вне этих пределов выживаемость и концентрация в питательном растворе после инцистирования инфузорий была ниже. в процессе хранения в высушенном виде на стадии цисты не изменяет чувствительности к токсинам, тогда как свидами-аналогами это происходит;5 предлагаемый способ получения препарата несложен в исполнении и требует вотличие от аналогов однократных затраттруда и материалов(56) Спесивцева Н.А, Микоэы и микотокси козы животных. М Сельхозгиз, 1960, с. 402,409.АгеевВ.,Долторнияэов И. Определениетоксичности корма, Птицеводство, 1988, М8, с. 42.15 Кокова В.Е. Непрерывное культивирование простейаих. Протозоология. вып,12.Л;: Наука, 1989, с. 132, 114. 116- 120,Приведенные результаты лабораторных исследований препарата и способа его получения показывают следующие его преимущества перед аналогами:препарат длительное время сохраняется при комнатной температуре, при этом не требуется затрат труда и материалов на его поддержание; Таблица 1 Бени ционнои ту 10Зависимость накопления биомассы инфузории С.зтепН от инокуляционной дозы инфузории и В.зиЬВз2002263 Таблица 2 жопение биомассы инфузории С,злепИ при различных температпри инокуляционной дозе С.втепИ / В.зцЬО 3, равной 1,0 10 з/6,0 10 зкз,/млс Таблицацистирования инфузории С,злепИ при различных значениях температуры окруж е едь ю ровяния С.81 Р Таблиц живаемость цист С,мепп в высушеномокружающей среды лияние темпер стоянии ( начальная концентрация 10000 экз./мл) 90 902002263 10 Продолжение табл,4 Формула изобретения Составитель Д. ВиноходовТехред М.Моргентал Корректор Н, Король Редактор Л. Павлова Тираж Подписное НПО "Поиск" Роспатента113035. Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Заказ 3172 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород. ул, Гагарина, 101 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ОБЪЕКТОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ, включающий культивирование инфузорий в питательной среде, отличающийся тем, что культивируют инфузории Со 1 роба зтепИ в исходной концентрации 1000 1506 экз/мл при 20 - 22.5 С в углеводно-со- . левой дрожжевой среде. дополнительно содержащей ВасПоз зцЬО 1 з в концентрации 5,0- 10,0 ф 10 микробных тел/мл, дооконечной концентрации не менее 10000 экз/мл, затем разливают во флаконы в объеме 0,5 - 2,0 мл, инкубируют до полного инцистирования инфузорий. удаляют сре ду, высушивают, герметично укупориваютпрепарат и хранят его в темном сухом месте.