Способ получения токсина

1 н 626 И 7 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ ЕН И Я К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУСоюз Советских Социалистических Республик(51) М. Кл.зС 12 Р 7 с присоединением заявки 1 че Государственный комитет Совета Министров СССР ло делам изобретенийи открытий(45) Дата опубликования описания 22,08,78(72) Лвторы изобретения И, к Грунтович, А. П. Власенкая и В, И, Иващенко институт вакцин и сывоникова А, Баснакьян, А, Н, Лобанова, В. С В. А. Мельникова, И. Ю. Ильниц сковский научно-исследовательский ток им. И. И, Меч(54) СП Изооретение относится к области медицины и касается микрооиологии,Известен способ получения токсина путемвыращивания инокулюма культуры С 1 ов 1 пЙшп рет 1 г 1 пдепв с последующим посевом 5ииокулюма для культивирования и выделением целевого продукта 11.Однако такой способ не обеспечивает высокого выхода токсина. Кроме того, способтрудоемок. 10Целью изобретения является упрощениеспособа и повышение выхода токсина.Это достигается тем, что выращиваниеинокулюма осуществляют в течение 2,5 -3,5 ч и для посева отбирают инокулюм, имеющий удельную скорость роста популяции0,7 - О,Ь 1/ч; удельную скорость нарастаниятокспгенных свойств токсина 450 - 55001 тп/млрд ч и удельную скорость нарастания антигенных свойств токсина 7,0 - 9,0 2 д1+/млрд ч,На фиг. 1 изображена зависимость удельных скоростей роста биомассы и от времени 1; н а фиг. 2 - з ав и с имость токсигенныхгр, свойств токсина от времени 1; на фиг. 3 - 25зависимость антигенных ра свойств токсинаот времени 1.Пример. Штамм С 1 озпйцтп рег 1 г 1 пдепзтипа Л 28 ВРбК - 28 культивируют в казеиново-панкреатической питательной среде с ЗО добавлением 100 глюкозы при 37"С во флаконах в течение 1 б - 1 Ь ч. 11 ересевают в бутыль с той же средой с рабочим объемом 9 л, затем культуру в бутыли используют в качестве посевной (илн маточной - инокулюма) для засева реактора с рабочим объемом 250 л. В процессе культивирования в бутылях пробы отбирают каждый час, в пробах определяют концентрацию биомассы х путем подсчета микробных клеток в камере 1 оряева.ч.ктивность культуральной жидкости также изучают в динамике, определяя нарастание токсигенных р, (01 пт/мл) и антигенных ра (1+/мл) свойств токсина.На основе получешых данных рассчитывают удельные скорости роста популяции ц и нарастания токснгенных гр, и антнгенных гра свойств токсина (см, таблицу).Строят графики зависимости (как показано на фиг. 1) удельных скоростей роста биомассы и, нарастания токснгенных гр, и антигенных гр. свойств токсина (оси ординат) от времени (осн абсцисс) выращивания.Определяют период развития популяции, в котором удельная скорость роста р составляет 0,7 - 0,8 1/ч, удельная скорость нарастания токсигенных свойств токсина гр 1 450 - 550 Итп/млрд. ч, а удельная скорость626117 Таблица Обозначение показателя, 5размерность Формулы для расчета 1 х 1 Ж х и 1/ч 2, 3 (1 д х, - 1 д хо) 1020 нарастания антигенных свойств токсина рз 7 - 9 1.+/млрд. ч. Этот период в нашем примере соответствует 2,5 - 3,5 ч от начала культивирования. Он ограничен пунктирными линиями на фиг, 1.В производстве обычно используют б - 8- часовую культуру, в которой, как видно из фиг. 1, значения всех трех удельных скоростей приближаются к нулевым. Использование инокулюма в периоде развития 2,5 - 3,5 ч от начала культивирования для засева реактора позволяет получить в нем сбалансировапный рост, который характеризуется совпадением во времени максимальных значений удельных скоростей роста популяции, нарастанием токсигенных и антигенных свойств токсина и повышением активности (выхода) токсина от 7 до 8,7 - 9,5 1.+/мл, что по сравнению со среднегодовым процессом, дающим 7 1.+/мл, на 28% больше. В таблице приведена формула для расчета удельных скоростей роста биомассы и, нарастания токсигенных гр, и антигенных /эз свойств токсина.1 редлагаемый способ обеспечивает повыитение активности (выхода) токсина от 7 до 8,7- 9,5 1.+/мл, что по сравнению со среднегодовым процессом, дающим 71.+/мл, на 28 О/о больше. Кроме того, отмечается значительное упрощение способа, поскольку сокращается время подготовки маточной культуры (инокулюма) культуры Соз(пйнгп рсг 1 г 1 пнспз от б 8 до 3 ч при обеспечении г, 100" случаев интенсивного роста культуры и высокой активности токсина в реакторе. 2 3 (рп - ро) (1 ях, - 1 дхо)гр, -(1, - то) (х - х,) формула изобретения Способ получения токсина путем выра щивания инокулюма культуры С 1 оз 1 ги 11 цгпрег 1 ппдепз с последующим посевом инокулюма для культивирования и выделением целевого продукта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа и повыше ния выхода токсина, выращивание инокулюма осуществляют в течение 2,5 - 3,5 ч и для посева отбирают ипокулюм, имеющий удельную скорость роста популяции 0,7 - 0,8 1/ч, удельную скорость нарастания ток сигенных свойств токсина 450 - 550 1)1 т/млрд, ч и удельную скорость нарастания антигенных свойств токсина 7,0 - 9,0 1.+/млрд, ч.,7 ь е- Т- - т Редактор М. Дмитриева Корректор О. Тюрина Заказ 1822/11 Изд, Ъо 631 Тираж 554 1-1 Г 10 Государственного комитета Совета Министров СССР по дслаги изобрстсиий и открытий 113035, /11 осква, Ж, Раушская наб., д. 4/5