Способ получения дидезоксинуклеозидфосфатов

ОП ИСАН И Е 67452ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Социалистических РеспублиКВТОР СКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ 61) Дополнительное к авт свид-ву -(23) Приоритет -Государственныи комит Совета Министров СС по лелем изобретенн 30,07,78. Бюллетень М 2(088.8) и открыт 45) Дата опубликования описания 03.07,7 2) Авторы изобретения В, Сняткова, 3, И. Ф, Луценко Ленина и орден осударственный В, Ломоносова абачник, Е,1 овиков 1) Заявитель осковс асного рудового иверситет и орденаамени(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯЕЗОКСИ НУКЛ ЕОЗ ИДФОСФАТОВ совершенство- езоксинуклеоочных пр оду кактизных вея дидезохсииз которыхрующих агее- фохлориды и Оба метода осложняются т тате реакции образуется соля торую необходимо удалять смеси, используя органически разующийся при этом хлорг затрудняет выделение коне снижая выход последнего. о в резульислота, коакционной вания. Обоснования продукта,м, чт ая к сно ат го лримснен а взаимод х нукдео напримео,при ко тного пир ие прдействии тидов и триизонатной идина з Цель п чение вых значитель процесса з р или,рующ описывает клеозидфо ода является больктов, связанных с щего агента.кта,не превышает синтеза дидезоксиняют так называесинтеза, заключаюрокиси фосфора или ридо в фосфорной рилирующего агента тветствующими зао 4 оно импн или аденинрадикал; Изобретение относится к у ванному способу получения дид зидфоефатов, важных промежут тов при силтезе физиологически ществ.Известны способы получени нук еозадфосфатов, большинств связано с применением кондеяси тов, таких как замеценные сул карбодиимидь. Первая пруппа хетодовсульфохлоридоз, основаласоотзетстзуощих .защищенчуклеозидов в присутствиипро.илбензолсульфохлоридтемпературе, з,среде абсолтечение 2 - 3 ч.Недостатком этого метшое число побочных иродуприменением конденсируюВыход конечного,проду70% 1 .В последнее время длянуклеозидфосфатов примемый триэфирный способщийся в использовании хлозамешенных дихлорангидкислоты в качестве фосфопри взаимодействии с соо щищенными дезоксинуклеозидами. Реакция проходит прп 0 С, в среде абсолютного пири- дина, в течение 1 - 2 ч. Выход динуклеозидфосфатов в случае применения хлорокиси фос фора колеблется от 15 до 52% 12, а в случаефенилдихлорфосфата 55 - 60% 3). редлагаемого изобретения - увелиода дидезоксинуклеозидфосфатов и ое упрощение технологического а счет использования нового фосфоего агента. Согласно изобретению ся способ получения дпдезоксинусфатов обшей формулы 1617452 тритилдезокситимидина растворяют в 2 - 3 лл абсолютного диоксана, добавляют раствор К - СН - ОСаН,; -ос=сн,1сн,ос,н-,0,1 льяоль сн г(ос=снД в абсолютном диокЗ, = го В - Р (ОС =СН)П 0 ОЕ 1 Соединения 11 - 1 у (приведены в таблице)получены в аналогичных условиях. Соотношение нуклезиды нуклеотидпосле ферментативного гидролиза ФДЭ змеиного яда ю о Й в системах Дидсзоксппуклсозидфосфат формулы 1о х со р - СН1С 1 ф томон 0,340,42 1: 0,99 0,38 отрТЯ - томон 0,34 0,440,32 0,43 1: 0,98 0,36 85 дТРЖ = СН.14Сна М - одеон 1: 0,92 80 0,30 г 5 трТН = ОС,Н; ОСН 5 М-тимон 85 034040 1: 0,96 0,44 П р,и м е ч а н и е. Система А: изопропа нол - аммиак - вода 7:1:2; В: бутанол - уксусная кислота - вода 5:2:3; С: этанол - 1 М ацетат аммония 7:3.Литературные данные: Система А: Кг 0,34; В; Я 0,32.-,",3- но К Формула изобретения заключающийся в том, что защищенный соответству 1 ощий дезоксинуклеозид подвергают взаимодействию с фосфорилирующим агентом общей формулы 111 О 15 в среде абсолютного диоксана и в присутствии следов пиридина с последующим снятием защитных групп. Реакцию проводят при комнатной температуре в течение 1 - 2 ч в среде абсолютного 20диоксана. В результате реакции в качестве побочного продукта образуется этилацетат, который не взаимодействует с исходным нуклеозидом и не дает никаких побочных продуктов. Образовгн ".,3 -5 природной межнуклеотидной связи достигается за счет различной реакционной способности двух а-алкоксивиниловых групп фосфорилирующего агента,Выход динуклеозидфосфата 80 - 85%, Строение полученных веществ подтверждено хроматографическими данными, Наличие 3 - -5природной мекнуклеотидной связи в синтезированных динуклеозидфосфатах подтверкдается ферментатлвным гидролизом фосфодиэстеразой змеиного яда,35П ример. 51 мг (0,1 мло.гь) монометоксиСпособ получения дидезоксинуклеозидфосфатов общей формулы сане и 1 - 2 капли абсолютного пиридина и перемешивают при комнатной температуре в течение 20 лин. Затем в реакционную смесь добавляют 24 мг (0,1 миоль) дезокситимидина в 5,ял абсолютного диоксана. Смесь перемешивают 1,5 ч при комнатной температуре. Диоксан упаривают, остаток обрабатывают 2%-ным раствором трифторуксусной кислоты в абсолютном бензоле для удаления монометокситритильной защиты, Остаток трифторуксусной кислоты удаляют многократным у 1 париванием с метанолом на роторном испарителе. Остаток разбавляют водой и хроматографируют. Выход дидезоксинуклеозидфосфата после элюции соответствующих веществ с хроматограммы водой 82%. Для получения соединения П при использовании ди-(а-алкоксивинил)-изопропенилфос. фата. изопропенильная группа удаляется действием 0,01 н. раствора фосфорной кислоты при комнатной температуре в течение 5 чин. Хроматографические данные и данные ферментативного гидролиза полученных динуклеозидфосфатов приведены в таблице.-ос= сн н Р (ос - сн НО ОЕ 1, Н Составитель Г, Коннова Техред О. Тюрина Корректор В, Гутман Редактор Л. Герасимова Заказ 439/712 Изд. Мо 536 Тираж 568 Подписное НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Тип, Харьк. фил. пред. Патент где Х - тимин или аденинрадикал; взаимодействием защищенных соответствующих дезоксинуклеозидов с фосфорилирующим агентом, с последующим снятием защитных групп, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и повышения выхода целевого продукта, в качестве фосфорилирующего агента используют соединение общей формулы где К имеет приведенные выше значения, и процесс ведут в среде абсолютного диоксана в присутствии следов пиридина,5 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе; 1. К. 1.ойггпапп, Н, 6. КЬогапа 1. Агп. С 11 егп.Яос. Использование 2,4,б-триизопропилбен зенсульфонил хлорида для синтеза внутринуклеотидных связей. 88, 829, 1966. 2. М. М. Кабачник, В. К. Потапов. Синтезолигонуклеотидов на полимерном носителе, 15 КОХ, 4, 379, 1973,3. 1.т. КЕ 11 К, %. Р 11 Е 1 ЙЕГЕГ, СЬЕГП. ВЕГ. СИН- тез и свойства О-бензилзамещенных диуридилфосфатов. 108, 2878, 1975.