Способ получения альбумина

ОП И САНИЕ Союз Советских Социалистических РеспубликИЗОБРЕТЕН ИЯ АТЕНТУ 161) Дополнительный к патент(21) 193807 1)М, Кл, А 61 К 37/02 2) 05,07,72 сударственный комитеовета Министров СССРпо делам изобретенийн открытий(43) Опубликовано 30,01,78, Бюллетень4 (45) Дата опубликования описания 09. 01 1 УДК 615,45:612.12.1) Авторыизобретени юля, Поль Гатель,рано М Дебрю Иностранная фирма( франция) 1) Заявитель 4) ОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЬБУМИ 1Изобретение относится к получению лекарственных препаратов. Известен способ получения сывороточного альбумина из растворов, содержащих альбумин, путем нагревания очишаемого раствора не менее 20 мин при температуре 45 - 75 С в присутствии каприлат-иона 0,0075 - 0,02 М концентрации и рН 4,8 - 5,7 отделения осадка коагулированных белков центрифугированнем, осветления и концентрирования очищенного альбумина известными приемами 1.Однако известный способ является трудоемким, а получаемый продукт содержит примеси.С целью упрощения технологии производства альбумина и выделения примесей по предлагаемому способу перед термокоагуляцией раствор концентрируют, например, осаждая альбумин, добавлением трихлоруксусной кислоты -до концентрации от 3 до 1010 моль/л в присутствии этилового спирта концентрацией от 40 до 60%, растворяют в воде осадок альбу- мина, примеси удаляют. в присутствии этанола концентрацией от 55 до 75% путем добавления трихлоруксусной кислоты, и после удаления осадка доводят рН до 6,5 - 7,0 для осаждения альбумина, затем растворяют его в воде. Для термокоагуляции в присутствии каприлата натрия, составляющего 15% от содержания протеинов, рН устанавливают в пределах 485 - 495, при 20% рН - 495 - 505,при 30% рН доводят до 5,15.С целью удаления большей части примесейгемоглобина перед концентрированием добавляют углеводород, содержащий галогенпроизводные, например, хлороформ в присутствии этанола.10 Способ получения очищенного альбумина,в частности альбумина человека, из раствора очишаемого альбумина, содержащего чужеродные или денатурированные протеины, заключается в том, что осуществляют термокоагуляцию нежелательных элементов путем нагрева ния раствора в присутствии каприловой кислоты до температуры 52 - 64 С, предпочтительно между 56 - 60 С, Термокоагуляцию проводят, например, 1 ч в присутствии каприлата натрия, составляющего 15 - 30% от содержания протеинов в растворе, при рН между 4,8 - 5,25.Каприловую кислоту вводят в виде каприлата натрия, но можно вводить и в чистом виде.Величина рН тем больше, чем больше содержание каприлата по отношению к протеинам.Термокоагуляция позволяет устранить больй 5 шую часть гемоглобина и осадить денатчри3рованный альбумин, а также чужеродные протеины.Если исходный раствор плазматического происхождения, то предлагаемым способом получают очищенный альбумин, пригодный для непосредственного применения. Если же исход ный раствор содержит чужеродные примеси, например из пла центы, плацентарной крови или, гемолизной крови, то перед термокоагуляцией удаляют большую часть гемоглобина, ферментов, таких как щелочные фосфатазы, путем осаждения протеинов с помощью кислоты, например трихлоруксусной или полифосфорными кислотами, а также удаляют наполнители различных групп.Гемоглобин удаляют в присутствии этанола в концентрации 60 /о с добавлением галогенированного углеводорода, такого как хлороформ.Ферменты (такие как фосфатазы) удаляют после удаления гемоглобина в присутствии этанола в концентрации до 60/о, например 25 О/о, с добавлением трихлоруксусной кислоты.20 Концентрация кислоты может быть в пределах от 3 до 10 10 моль/л, предпочтительно 4,2 10 моль/л. Кислоту добавляют в протеиновый раствор при температуре нике 0 С, предпочтительно (-5) - (-10)С, до полного осаждения протеинов. В некоторых случаях трихлоруксусную кислоту можно заменить полифосфорной.Удаление наполнителей различных групп осуществляют при концентрации этанола выше 55 О/ например 75/ и концентрации протеинов преимущественно меньшей или равной 10 г/л, 30 добавляя трихлоруксусную кислоту в раствор при температуре ниже 0 С, например (-5) - (-10) С. Концентрация трихлоруксусной кислоты 810моль/л. Полученный осадок удаляют. На этой же стадии удаляют также шелочные фосфатазы, если они присутствуют.35Пример. Из 7 т плаценты получают известным способом плавающий на ее поверхностиглобулин путем осаждения его этанолом.Для увеличения гемоглобина верхний слой,40содержащий - 58 г протеинов на 1 кг плаценты, добавляют 25/о-ный этанол и хлороформтак, чтобы весь объем (- 17000 л) содержалО,бо/о хлороформа; рН доводят до 6,0 - 6,1,Верхний слой в этих условиях поддерживаютпри температуре 24 С. В результате образуется 45осадок, который отделяют и выбрасывают, удаляя большую часть гемоглобина. Объем верхнего слоя уменьшается до 16000 л (в этот моментвыход протеинов 8 г/кг). Для удаления ферментов в верхний слой (16000 л) добавляют25/о-ный этанол и трпхлоруксусную кислоту 50концентрации 4,2 10"- моль,л; температуру додобавления понижают до -80 С. Получают осадок около 1000 кг (выход протеинов 4 г/л),который удаляют, применяя герметичныецентрифуги с непрерывным выбросом осадка.Верхний слой уменьшается до 15000 л. Такимобразом удаляют или денатурируют гцелочныефосфатазы и другие ферменты, такие кактрансамилазы.Осадок снова растворяют в воде и объемдоводят до 1800 л водой,Затем производят осветление. Для этого повторно растворенный осадок наполняют кремниевым порошком (аэросил) в концентрации 0,2/о. Образуется осадок - 50 кг, который отделяют центрифугированием. Осветленный плавающий сверху раствор соответствует выходу протеинов около 6,5 г/кг.При удалении групповых наполнителей осветленный раствор разбавляют смесью 75 О/О-ного этанола и трихлоруксусной кислоты концентрацией около 8 10моль/л. Содержание протеинов 10 г/л. Температуру поддерживают около -7 С. В результате групповые наполнители выпадают в осадок - 10 кг, который удаляют. На этом этапе удаляют также остаточные ферменты.Далее верхний слой, содержащий около 8 г протеинов на 1 л, фильтруют, рН доводят до 6,5 - 7, температуру поддерживают между -5 и -10 С. Образуется осадок альбумина140 кг, который центрифугируют, а верхний плавающий слой удаляют. Очищают альбумин путем повторного растворения осадка в воде, получают объем 280 л, выход протеинов 5 г/кг.После диализа в дистиллированной воде доводят содержание протеинов до 20 г/л, добавляют в раствор каприлат натрия концентрацией 2,41 10моль/л и доводят (при помощи уксусного тампона) рН до 5,0 - 5,05. Этот раствор выдерживают при температуре 60 С около часа. Оставшиеся протеины, кроме альбумина, коагулируют и выводятся в осадок с последними следами гемоглобина, также как денатурированная часть альбумина. В растворе остается лишь практически чистый альбумин.Затем верхний слой доводят до 1750 л и фильтруют. Разбавленный раствор альбумина концентрируют, добавляя 40 О/о-ный этанол при рН 4,8 - 4,9 и температуре -8 С. Получают осадок, который собирают и повторно растворяют. Новый раствор диализуют, обрабатывают глиноземным гелем, концентрируют в вакууме, после чего проводят стерилизирующую фильтрацию и получают 95 л концентрированного практически чистого альбумина с содержанием 200 г/л. На этой последней стадии выход протеинов 2,7 г/кг. Полученный альбумин можно применять для терапевтических целей в медицине.Формула изобретения 1, Способ получения альбумина из раствора альбумина, содержащего чужеродные и денатурированные протеины, путем нагревания раствора, подлежащего очистке, при температуре между 52 С и 64 С включительно в присутствии каприлата натрия при рН между 4,8 и 5,25 включительно, сепарации с помощью центрифугирования из осадка коагулированных протеинов, осветления и концентрации очищенного альбумина известными методами, отличающийся тем, что, с целью упрощения технологии производства и выделения примесей, перед термокоагуляцией раствор концентрируют, например, осаждая альбумин добавлением трихлоруксусной кислоты до концентрации от 3 до 10 10 2 моль/л в присутствии этилового591126 Составитель С. МалютинаТехред О. Луговая Корректор А. Гриценко Тираж 703 Подписное Редактор Н. ХублароваЗаказ 247/1 ОНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий 1 3035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4спирта в концентрации от 40 до 60 о/о, растворяют в воде осадок альбумина, затем примеси удаляют в присутствии этанола в концентрации от 55 до 75% путем добавления трихлоруксусной кислоты и после удаления осадка доводят рН до 6,5 - 7,0 для осаждения альбумина, затем растворяют осадок в воде. 2. Способ по п, 1, отличающийся тем, что для термокоагуляции в присутствии каприлата натрия, составляющего 15/о от содержания 1 о протеинов, рН устанавливают в пределах 4,85 -ф4,95, при 20% рН - 4,95 - 5,05, а при 30% рН доводят до 5,15.3, Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью удаления большей части примесей гемоглобина, перед этапом концентрирования добавляют углеводород, содержащий галогенпроизводные, например, хлороформ в присутствии этанола.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:1. Патент США Мо 2765299, кл. 260 - 122, 1956.