Способ получения антибиотиков

П ИСАН классюзанам щтевт н:- т". с н.чесжГ"(61) Допопнитепьный к патенту 51) М Кле С 12 09/О 6 (21) 2322359/28-13 (32) 05, 03, 75 (Я) Вепикобритания 22) Заявлено 04.03.23) Приоритет осударственнын квинт Совета Министров ССС по делам изобретений и открытий) 9057/7 3) Опубликовано 05 11 77 Бюллетень 4 45) Дата опубликования описания 06.10.7 ДК 615,779.31 (088.8) цырация арент Иностр Кэронеппи Франческо(72) Авторы изобретения Кар опи ретта, Мар а Бардоне,ая фирм итС. П остра э Леп (Ита(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКОВс купопоне. В некотоиби этик эв.Предпагаемые рых едах набпюдают знстельного воздущн рангии в бопьшинст опытом .копичестве разэм на купопе к я формой от шаро епьное кописоб их пэпучения в нической питератур11 епь изобретения тейхэмицинэв. честв эгэ мицепия Сп явб ым эве среи наход разуютя главотовал 10 пичаютсной, ра 15-25Спэ разной д ми и диа рными конту етр ом м е по форме,ом 2 ммк.от шарообр5-2,0 ммк ранги офоры прямы15 ммк и диаметрные, имеют формуьнэй и диаметр 1 пин порь ной одвиж о овал ва ий, гладнжевого цвет здушный мицеспорангиев.агар Средниивоздушный орошии, гп Изобретение относится к микрэбиопогической прэмышпенности и касается получения ибиотики новые и споатентнэй и научно-техне описан,получение антибиотиков Эта цепь достигается тем, чтэ штаммАс 1 иорГаиез 1 есЬоеусебсцз АТСС31121 вырашивают в аэробных условиях на питательной среде, содержашей источники углерода и азота и минеральные соли с последуюшим выделением комплекса целевого продукта и разделением его на отдельные компоненты.Дпя попучения смеси антибиотиков испопьзуют штамм Асб иорРаиее 1 е(сЬоюусе 1 сиз АТСС 31121.Штамм АсбиорРапеб 1 е(споиусе 1 сцвиоч.ер имеет номер А/8327 и хранится в коллекции АТСС под номером 31121.Штамм пэпучен из почвенной пробы издеревни "вод ЧРРа 15 е-Лидое, Индия.Штамм хорошо развивается на разпичных агаровых питатепьных средах. Колонии диаметром 5-6 мм показывают на агаре с овся нои мукои равномерные конту образной выпукпостью в сере Морфопогические свойст Гпюкэзатэр Чапека. Рэст кая поверхность светло-ора образуется бепо-розовый в пий - нескопько отдепьных Сахарозо-аспарагиновый рост, поверхность гпадкая,мицепий оранжевого цвета. Картофепьный агар, Рос40 кая и тонкая поверхность. светло- орехового цвета. Воздушный мицепий светпо-розового цвета, растворимый пигмент светпо-ореховый,Яично-апьбуминовый агар. Рост хороший,гпадкая поверхность копонии светпо-оранжевого цвета с розовым напетом, с хорошоразвитым воздушным мицепием,Пептоно-гпюкозный агар, Хорошо развитыекопонии со скпацчатой поверхностью темно Ооранжевого цвета, образует пигмент светпо-янтарного цвета.Ломтики картофеля. Рост умеренный,копонии со складчатой поверхностью светпо-оранжевого цвета.15Солодовый агар с дрожжевым экстрактом,Рост хороший, колонии со слегка складчатойповерхностью светло-оранжевого цвета срозовым оттенком, воздушный мицелийразвит хорошо,светпо-коричневого цвета,растворимый пигмент янтарного цвета.Агар с овсяной мукой. Рост хороший,гпадкая поверхность от бпедно-оранжевого до светло-оранжево-коричневого,с возрастом много спорангиев, светпо-розовогоцвета, растворимый пигмент светпо-орехово сцвета.Усваивает фруктозу, маннит, ксипоэу,арабинозу, сахароэу, маннозу, гпюкозу.Ппохо усваивает сапицин, лактозу, не усваи- ЗОвает инозит, рамнозу, рафинозу, цеплюпозу.Гидролиэует крахмап, казеин, сероводород образует, не гидролизует тирозин, кальциевые соли яблочной кислоты, лакмусовоемолоко не коагулирует, слабо пептонизирует пакмусовое молоко, нитраты восстанавливает, жепатину разжижает, цеппюпозу разпагает.Дпя попучения антибиотиков штамм1 сйиорГа иез 1 есЬощусейсцз иоч.зр.АТСС 31121 предварительно культивируютв питательной среде в аэробных условиях дополучения значительного количества мицелиев, при рН 6-8,Культура, полученная в качапочной колбе, имеет спедующий составг/и:Мясной экстракт 3,0Триптон 5,0Дрожжевой экстракт 5,0Глюкоза 1,0 50Крахмап растворимый 24,0Капьциевая сопь ябпочнойкислоты 4,0Вода дистиппированная до 1000,0 мп.Колбы встряхивают 24 ч при 28-30 С,55поспе чего культуру (1 п) пересевают вферментеры, содержащие каждый по 10 ипитательной среды спедующего состава, вг:Мясной экстракт 40Пептон 40 Экстракт дрожжевой 10Натрий хпористый 25Мука соевая 100Гпюкоза 500Карбонат капьция 50Вода водопроводная до 10 пПитатепьную среду с пересеянной предваритепьной купьтурой аэробно культивируют с перемешиванием при 28-30 С. Через одинаковые интервапы микр оби опогическим путем определяют образование антибиотиков Максимального образования достигают через 72-96 ч.Содержащиеся в ферментационной среде и мицепиапьном жмыхе антибиотики экстрагируют обычным способом органическими растворитепями.рН ферментационного раствора доводят до 3,5 добавпением хпористого водорода (8 Уо), поспе чего дважды экстрагируют бутанопом (30%). Органические экстрактыо концентрируют в вакууме при 45 С до 1/10 первоначального объема, промывают небопьшим копичеством воды при рН 3,5 и снова концентрируют до небопьшого объема. Концентрированный оаствор выдерживают при невысокой температуре 10-15 ч до образования осадка, который отфипьтровывают. Фильтрованный раствор выпивают в большое копичество петропейного эфира, сырой осадок отфипьтровывают.Мицепиапьный жмых промывают водой при рН 3,5, высушивают в вакууме и экстрагируют смесью вода-ацетон (2;8), Ацетоновый экстракт концентрируют в вакууме при 40-45 С. Водный остаток доводят до рН 3,5 и трижды экстрагируют бутанолом, Собранные бутаноповые экстракты промывают небопьшим количеством воды пои рН 3,5 и концентрируют в вакууме до 1/20 первоначального объема. Концентрированный раствор выдерживают при 40 оС 10-12 ч.Получают сырой осадок, который отфипьтровывают, фильтрованный раствор выпивают в бопьшое копичество петропейного эфира, образуется небопьшое копичество осадка. Результаты, полученные согласно проведенной хроматографии, показывают, что продукты, попученные охпаждением концентрированных бутаноповых экстрактов в основном содержат тейхомоцин А, Аи А причем А составляет наибольшую долю, а продукты, полученные осаждением в инертном непопярном растворитепе (петропейном эфире), содержат антибиотик 8327 факторы В й С.Антибиотики 8327 факторы В и С разделяют противоточными способами и выдепяют в виде отдепьных соединений антибиоти579902 фракции, содержащие один отдепьныйантибиотик, концентрируют до очень незначитепьного объема, разбавпяют метанопом и выливают в бопьшое количество ацетона, в котором все три антибиотика выпадают в виде беповатого аморфного порошка.Новые антибиотики применяют, например,дпя печения заразных эабопеваний у животных, дпя дезинфекции предметов и инструментов, в качестве агентов роста у животных и во многих других обпастях борьбы спатогенными бактериями.Острая токсичность у мышей тейхомицина А 500 мг/кг (внутривенно), тейхомицинаА 1000 мг/кг (внутрибрюшно),2В табп. даны результаты действия наорганизм тейхомицинов А 1 и Апри экспериментальных инфекциях,Полученный тейхомицин А представпяетсобой аморфный порошок, который поспедопопнитепьной очистки смопой, супьфинированной попистиропом, обпадает в водномрастворе до рН 4 спедующими физико-химическими свойствами. Точка ппавпения260 С (с разложением). Элементарныйакапиз,%: С 54, 20; Н 5, 70;Н 6, 80;СРЗ,ЗОО 26,70,40Соединение растворяется в водном растворе при рН 7,0, в водном бикарбонатенатрия, разбавленных водных растворахгидроокисей щелочных метаппов, смесяхметамоп-вода, частично растворяется в ме 45танопе и этанопе, не растворяется в разбавленных минеральных киспотах и неполярныхорганических растворителях,Тейхомицин А представпяет собой аморфный порошок со следующими физико-химиче 50скими свойствами.оТочка ппавпения 220 С (с разпожением). Эпементарный анализ%: С 52,9Н 7,6,М 5,26, 0 32,5; эола 3,26,Соединение растворяется в водном раст 55воре при рН 7,0, водном бикарбонате натПодписное ЦНИИПИ Заказ 3595/48 Тираж 541 фипиап ППП "Патент", г. Ужгород, уп, Проектная, 4 5ков. В качестве растворитепя дпя раздепения поигодна смесь из фосфатного буфера (1/15 М,рН 7,0)-н-бутаноп-гексан (1;1:0,05Тейхомицины А,А и Араздепяют путемхроматографии на копонке с применением сефадекса .Н, а в качестве элюента смеси из н-пропаноп-этипацетата ЯНСООН 0,2 н. (10;7;7). Эпюированные фракции анапизируют с10 применением тонкоспойной хроматографии на сипикагепе (система растворитепей;н-пропаноп-этипацетат -концентрированная гидро- окись аммония, 2;1:2, а также микробиопогического развития на 5.апофеоз в качестве15 системы контропя. Тейхомицин Аотпичается показатепем Ы = 0,48, тейхомицин А Я 0,10, а тейхомицин А %ф 0,0,рия, разбавленных водных растворах гидроокисей щепочных метаппов, диметипформамиде, диметипсупьфоксиде, частично растворяется в метанопе и этанопе, не растворяетсяв разбавпенных минерапьных киспотах и непопярных органических растворитепях,Определение молекулярного веса хроматографией с применением ЯерЬадех-75 дает следующие результаты; 20,000 в фосфатном буфере, рН 7,38 и 30,000 в утратном буфере, рН 4,4,формупа изобретения Способ получения антибиотиков, о тличаюши йся тем, что штамм Ас 1 иор 3 аиеа 1 есЬощусе 1 сиз АТСС 31121 вырап;ивают в азробных условиях на питательной среде, содержащей источники углерода и азота и минеральные соли с последующим выделением комплекса целевого продукта и разделением его на отдельные компоненты,