Способ получения индикатора для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК ПАТЕНТУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик(23 осударстаенныи комитетСовета Министров СССРпо делам изобретенийи открытий 31) 46146543) Опубликов ША 3) УДК 615.779) Авторыизобретени Ловелл Энд и(США)ностранная фирмаи Лилли энд Компа 71) Заявител ША) НИ) СПОС ЧУВСТ 2 иологии осится к микро получения инди вствительности кам путем нане суспензии на п последующим в Изобретение отн Известен способ я Определения чу змов к антибиоти микр о оргасения верхантибиотика в виде ть абсорбента скием абсорбента 1 Ц Однако такой спвысокой стабильнос С целью повыше ыдел нос соб не обесп и индикатора ия стабильно и ин 10у кристалтама пеняют с носителем ключаетдислер- типа лучения индикатора з ровании абсорбента с ического антибиотика Способ ися в контакт сие крист яющем пакт нтом указаня с вещест лотногоСКОМ СОСТОЯтва. Для носителе, ной диспе ва при со осадка ан нии на ед вливаюти, 25 роверки з этого ества отдельные дис дикатора по предлагаемому способ лический антибиотик типа /Ъ -лак ред нанесением на абсорбент соед ма в летучем нерастворабсорбции этим абсорбесии, испарении носителранении равномерного иибиотика в кристалличеницу поверхности вещесувствительности изгота 5 (21) 2122501/. 11.77. Бюллетень41 ОЛУЧЕНИЯ ИНДИКАТОРА ДЛЯ ОПРЕЛЬНОСТИ МИКРООРГА НИЗМОВК А НТИБИОТИКАМ Предпочтительным абсорбентом является абсорбирующая бумага весом 26-34 мг/см.способная абсорбировать приблизительно 2-3 кратное количество (относительно весабумаги дистиллированной воды). Толщинабумаги не должна сильно изменяться и должна быть приблизительно 1,5 мм. Бумагадолжна быть чистой и белой и не содержатьвеществ, подавляющих или усиливающих активность находящегося на ней антибиотикатипа /О -лактама, а также не влиять нарН и не оказывать буферного действия,Этим требованиям удовлетворяет в основном чистая альфацеллюлозная бумага. Бумагу можно применять или в виде листовили в рулонах.Кристаллический антибиотик типа/5-лактама, нан осимы й на бумагу, на к о тор ой вырезают проверочные диски, должен иметьтакой размер частиц, чтобы все частицыпроходили через сито 100 меш (диаметротверстия 0,149 мм),Антибиотик типа р- лактама диспергируютв летучем нерастворяющемся носителе, Носитель применяют для нанесения отмеренно 57990 Зго кодичесгва антибиотика типа 3 - пактама на единицу пэверхности бумаги. Состав нэситедя не имеет значения, необходимо, чтобы он быд летучим, инертным и чтобы антибиотик гипар- дактама не растворядся в нем. Нэситедь доджен иметь темпераатуру кипения 100 С иди ниже при давдении 700 мм рт, сг чтобы он легко испарился с бумаги после нанесения на нее. Нерастворяющийся носитедь доджен быть с темпераогурой точки кипения 100 С кди ниже прк давденик 760 мм рт. ст.Дисперсию антибиотика в летучем нерастворяюшемся носктеде можно приготовить образованием суспензкк крисгаддичес кого ан-,ибкэгкка типаа,-дактама в носите ле. Концентрация антибиотика типа /3 - дактама в дисперсии зависит эт абсорбцконной способности бумаги, требуемой степек насьщекя бумаги носк тедом и требуемой 20 концентрации ангибкэтика типа 3 - дактама на единицу поверхности бумаги, Например, есдк абсэрбпиэнная способность применяемой бумаги к нерастворяющемуся нэситедю равна 2 (эгнэскгедьнэ веса бумаги) и сде дует насытить бумагу на 75% ее абсэрбционной способности, то ддя бумаги весом230 мг/см требуется 45 мг такого носитедя на каждый квадратный "антимегр бумаги, находящейся в контакте с нэситедем, 30Суспендкруюшке агенты, которые не вызывают изменения рН бумаги и не вдияюг на активность антибиотика типа г 3-дактамаможно добавдять к дисперсии ддя обеспечения гомогенности суспензки ангибиэтика в нэситеде. В качестве таких агентов испэдьзуюг метклцеддюдэзу и пэдивкниддкррэдкдон, пэсдеднкй предпочтитеьнэ применяют в концентрации 1% ог нэситедя.Применение этих агентов способствует также адгезли частиц антибиотика типа - дактама к бумаге посде испарения с нееносктедя.Прк применении суспендкруюдего агента необходима тесная связь этого агента 45с носигедем, т, е. агент доджен растворяться в носителе кпи образовывать гель. Иначе дэбавдение такогэ агента ничего недает.Хорошее отложение кристаддов антибиотика типа 3 - дактама на бумаге можно подучить методом непрерывного подива дисперсии антибиотика типар-дактама через порог причем ширина потока доджна быть равна ширине пропитываемого диста бумаги, а скорость потока дэджна соответствовать скорости движения порога над бумагой иди скорости движения бумаги под порогом, Целесообразно применять неподвижный порог и пере мешать под ним бумагу с постоянной ско- ф росгью, Порог можнэ применять в сочетании с ящичным распредедитедем иди этдельно. Есди с бумагой контактирует равномерный спой дисперсии антибиотика типа д- дактама, нерасгворяющийся носитель быстро абсорбируется бумагой, оставпяя на ней огдэженкя крисгалдов, Важным явдяегся тэ, чтобы общее кодичество ввэдимого на бумагу носигедя быдэ менее 100% абсорбциэнной способности бумаги ддя обеспечения достаточной равномерности этдэжения на ней кристаддэв антибиотика типа /д - дактама,Контакт бумаги, содержащей подложку антибиотика типа ф - дактама с дисперскямк этих антибиотиков, может эсушествдягься также набрызгом дисперсии на бумагу. Зго мэжнэ эсушествкть перемещением бумаги. с равномерной регуируемэй скоростью мимэ разбрызгиьаюшего сэпда, предпэчтигедьны сэпда дэпасгнэгэ типа, в которое диерсия нагнетается пэд давденкем. Обьемподаваемого в сопдэ потока должен сэогвстсгвовать скорости движения бумаги мимо сопда, Необхэдимэ, чтэбы бумага нахэдкдась пэд соппом и чтоаы размеры сэпда могли обеспечить щиричу струи соэтвегствуюшуо ширине движущейся под сопдэм бумаги.При зтэм бумага может быть закрепдена непэдвижно, а разбрызгивающее сопдэ движется с усгановденной посгояннэй скоростью над бумагой. Но этот вариант высэкэзффекгивен в тех сдучаях, кэгда ддя пэдучения дисков ддя прэверкк чувствигедьнэсти к антибиотикам типа - дактама применяют отдедьные листы бумаги.Пэсде контакта бумаги с дисперсией крксгадлическэгэ антибиотика типа р -дактама и абсорбции бумагой нерасгворяюшегося нэситедя, бумагу высушивают ддя удаления с нее носитеи, Это осушествдяют известными способами. Например, есди бумаг поступает в виде непрерывного рудона, го вдажную бумагу. можно медленно перемешать через туннельную сущидку, в которой носктедь испаряется к отсасывается в систему рекуперации растворителя или удаляется с отходами, Огдедьные дисты влажной бумаги можно подвешивать на бесконечнэм конвейере, проходящем через туннедьную сушипку, ипи же эти дисты можно помешать в камерную сушилку, к которой подводят тепло и в которой имеется устройство ддя удадения паров носителя и транспортирования этих паров в соответствующую систему их удадения.Ддя ускорения процесса испарения можноиспользовать вакуум, Температура сушки должна соответствовать температуре киц579903 Составитель С. МалютинаРедактор П, Волкова Техред А, Демьянова Корректоо М. Демчик Заказ 3595/48 Тираж 541 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раущская наб., д. 4/5филиал ППП "Патент", г. Ужгород, уп. Проектная, 4 ния носителя при том давлении, при котором ведется сушка, и должна бить не более,чем на несколько градусов выше температуры кипения, но не выше 100 С. Крометого, высушиваемая бумага должна находить бся при температуре сушки не дольше, чемтребуется дпя полного удаления носителя,чтобы не происходило разложения антибиотиков.Отдельные пр овер очные диски могут 10быть изготовлены из высушенной бумаги,на которую бып осажден антибиотик типар-лактама. Дпя этого вырезают отдельные диски специальным штампом. Размери форма дисков должна удовлетворять пра- цвилам, относящимся к применению этихдисков. При применении проверочных дисковзоны подавления будут различными дпя различных антибиэтиков,П р и м е р. Диски для прверки чувствитепьности к цефапотину приготавливаютследующим образом.Кристалл цефапотина натрия измельчаютв мопотковой мельнице до размера частицпроходящих полностью через сито 100 мещ 25(по классификации США).Приготовленные таким образом кристаллы цефапотина натрия суспендируют в изопропаноле с концентрацией 2 мг/мл (0,2%),Обрабатывают листы альфацелпюлозной бума ги этой дисперсией в количестве приблизительно 60 мкп/см (0,06 мп/смгПолученную влажную бумагу сушат напроволочной сетке из нержавеющей сталив рециркуляционнэй воздушной сушилке при 3560 С и давлении 760 мм рт. ст, в течение 4 мин, Отдельные проверочные диски проверяют на равномерность содержанияцефалэтина методом спектрофотометрическэго анализа, десять дисков показали отклонения от среднего значения менее Ь%. Проверочные диски, приготовленные предлагаемым способом, испытывают на эффективность путем проверки чувствительности к антибиотикам у микроорганизмовКеЬеГГа Р ие ч иою а.Диски кладутся на агар как стороной, бывшей в контакте с антибиотиком, так и противоположной стороной, Наблюдают одинаковые зоны подавления независимо от того, какой стороной диск бып положен на агар.Другие диски хранят при 37 оС без осушителей, Технические диски, приготовленные известным способом, хранят точно в таких же условиях.Результаты испытаний показывают, что проверочные диски с цефапотином натрия, приготовленные предлагаемым способом, отличаются большей стабильностью при нагреве и хранении, чем технические проверочные диски, приготовленные известным способом. Формула изобретения Способ получения индикатора для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам путем нанесения антибиотика в виде суспензии на поверхность абсорбента с последующим высущиванием абсорбента, о т и и ч а ю щ и й с я тем, чтэ, с целью повышения стабильности индикатора, кристаллический антибиотик типа 3-пактама перед нанесением на абсорбент соединяют с носителем.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе;1 Ате саи, У.Сйетв.у Раей, 45 1966, р,493.