Способ получения сыворотки против опухоли эрлиха

; ,л ",:., . сг - .ЕГ1. . .: . С ,фСОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК (191 (11)ЗШ А 61 К 39 395 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ АВТОРСКОМУ СВИДЕ СТВУ ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ ОПУХОЛИ ЭРЛИХА .,(57) Способ получения сыворотки против опухоли Эрлиха путем иммунизациймышей опухолевым антигеном с последующим выделением целевого продукта,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью повышения активности сыворотки, в качестве антигена используютштамм клеток асцитной карциномы Эрлиха АКЭМили АКЭС.Изобретение относится к медицине и может быть использовано в онкологиипри иммунотерапии рака,Известныспособы получения сыворотки для иммунотерапии рака путем иммунизации животных клетками (анти геном) исходной опухоли (1) .Однако сыворотка, полученная этим способом, недостаточно активна.С целью повышения активности сыворотки по предлагаемому способу в 19 качестве антигена используют штамм клеток асцитной карциномы Эрлиха АКЭМили АКЭС.Штамм опухоли АКЭМполучен из исходного штамма опухоли Эрлиха, пассируется на мышах в Институте генетики и цитологии АН БССР.Получают штамм АКЭМследующим образом. Мьпдам (самцам) линии Ц вводят в хвостовую вену по 1.10 клеток опухоли Эрлиха, предварительно отмытых (трехкратно) раствором Хэнкса. На 22-й день после введения опухолевых клеток из легкого выделяют опухолевый узелок размером с просяное зерно. Прививкой нормальным25 мышам выделенного опухолевого узелка получают штамм опухоли АКЭМ.Опухоль АКЭМпредставляет собой гетерогенную популяцию клеток, состоящую в основном иэ двух хромосом ных классов; тетраплоидного и околооктаплоидного с выраженным преобладанием тетраплоидного. В популяции клеток доминирующими являются три клеточных клона с 80-, 82-, 84-хромосомными наборами. В метафазных пластинках присутствуют маркерные хромосомы: 1-2 большие суб- и метацентрические 1-2 телоцентрические с двойной перетяжкой. Почти в каждой метафазной пластинке встречаются40 1-2 малые метацентрические хромосоОпухоль растет в асцитной и солидной Формах на мышах, линейнонеспецифична, продолжительность жизни 45 при внутрибрюшинном введении мышам линии 4 (по 5.10 опухолевых кле 4ток) составляет 22+4 дня.Для получения сыворотки против опухоли Эрлиха группу мышей линии 50иммунизируют путем внутрибрюшинного (3-кратного с интервалом 7 дней) введения облученных (10 000 Р ) клеток штамма опухоли АКЭМ(по 3, 10 клеток). Мышей линии СЭН/Бп нммуни зируют путем внутрибрюшинного (6 кратного с интервалом 7 дней) введения облученных (10 000 Р )клеток опухоли АКЭС(по 1, 10 клеток на мышь) .На 10-й день после последней иммунизации у мышей получают сыворотку изкрови.Влияние сыворотки анти АКЭМисыворотки анти АКЭС, полученныхпутем иммунизации мышей клетками опухоли АКЭМили АКЭС, и сывороткианти АКЭ, полученной ранее известным способом, т.е. иммунизацией мышей клетками опухоли Эрлиха, на скорость роста опухоли Эрлиха, приведеныв таблице.Мышам линии д или СЗН/Яп внутрибрюшинно прививают но 5"104 клетокопухоли Эрлиха. Через 24 и 48 ч после прививки опухоли мышам вводятдвухкратно внутрибрюшинно: первойгруппе по 0,5 мл сыворотки антиАКЭМ, второй - по 0,5 мл сыворотки анти АКЭС, третьей - по 0,5 млсыворотки анти АКЭ.Контрольной серией служат мыши, получившие по указанной схеме сыворотку интактных мышей или раствор Хэнкса. Прививаемость опухоли у мышей при введенииим по 5 х 10 клеток АКЭ составля 4ет 100.О противоопухолевом эффекте антисывороток судят по скорости ростаопухоли, которую определяют по среднему количеству опухоленых клеток,накапливающихся в брюшной полостиу мышей к 14-му дню (мыши линии Ь )или к 10-му дню (мьпди линии СЗН/Бп)после прививки, Определяют процентторможения опухолевого роста. Проводят цитогенетический анализ популяции опухолевых клеток в контрольныхи опытньх сериях. В каждой сериианализируют по 50 метафазных пластинок,Иэ таблицы видно, что сывороткианти АКЭМили анти АКЭС, введенные мышам с привитой опухолью Эрлиха, вызывают торможение опухолевогороста на 86 и 51% соответственно,в то время как сыворотка анти АКЭ исыворотка интактных мин;ей не оказывают достоверного влияния на скоростьроста этой опухоли.Предлагаемый способ позволяет получать иммунную сыворотку против опухоли Эрлиха, которая при введениимышам с привитой исходной опухольювызывает значительное (до 86%) торможение опухолевого роста563752 Мыши СЗН/ Серия опыта Мыши линии Ай,Кол чес Тор- може рос- мыш таопухоли л Клетки АКЭ+сыворотка интактныхмышей 7 18 2354 2)0,05 1-20,0 Клетки АКЭ+сывоотка анти АКЭ 16 392+64 7 93 ф 51 10, 2 с 0,05 2-3 с 0,05 Клетки АКЭ+сыв ротка анти АКЭ 9+ 1-ЗсО Клетки АКЭ+сывоотка анти АКЭС18 . 106+23 51,0,05 летки АКЭ+растор Хенкса 44792 1"5)0,05 О,и е: стове сть данных по линиям актор Л.1 техныа Техред АБабнне;т Корректор Л.Пилипенкое ещ Подписо комитета СССРи открытийРаушская наб., д 4(5щ щщ еще щ ее ще1 лигл ППП Патентф, г.ужгород, ул.Проектн акаэ 3889/1оспо делам113035, Мо Среднееколичествоопухолевыхклетокх 106 Тираж 688 дарственноизобретени ква, Ж"35,оли- Ср е- не тво коей чесе- во ии, оп