Поливалентная вакцина вгнки против лептоспироза животных и способ ее получения и использования

(53)М. Кл. А 61 К. 39/02С 12 й УОО с присоединением заявки РЙ Гаеуларстееннцй кентет СССР(23) Й риоритет Опубликовано 23. 01 е 83Бюллетень Ме 3 нв аннан нзобнетекнй и открытий(53) Уд К 616.986. . 7: 615. 5711 /372(088.8) Дата опубликования описания 26.01.83 Ю.А, Малахов, А.П. Самохвалов, А.Н. Шуплико, В.Р,И . Алехин, В.С. Панов, Г,ф. Денисенко, А. . КойВЩВуИ.Г. Серегин, И.А. Логинов, В.В. Шорохов, А Иг Лаиир,Н.И. Иванова и Г.Л, Соболева ;3 ш ,ВВсесоюзный государственный научно-контрольный Юйщр:,.1 х;хветпреп аратов(54) ПОЛИВАЛЕНТНАЯ ВАКЦИНА ВГНКИПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА ЖИВОТНЫХИ СПОСО 6 ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ 1Изобретение относится к ветеринар"ной микробиологии, в частности к способам получения вакцин, применяемыхдля профилактики лептоспироза животных.Известна поливалентная Феноловаявакцина для профилактики лептоспиро"за сельскохозяйственных животных ипушных зверей й способ ее изготовления. Способ включает выращивание леп.тоспир шести серогрупп на сывороточной или альбуминовой среде в балло"нах, смешивание выращенных культурв определенных сочетаниях с последую"щим консервированием Фенолом, рас"Фасовкой, проверкой стерильности,безвредности, активности1,, Известное предложение 1 1) не по"зволяет получить в вакцине достаточ"ную концентрацию специфических анти"генов, что вынуждает вводить ее жи"вотным двукратно в больших дозах:крупному рогатому, скоту - до 25 мл,свиньям " до 17 мл,2У вакцинированных животных создается непродолжительный иммунитет "у поросят и ягнят до трех месяцев,у телят и взрослых свиней - до шестимесяцев.5Известна вакцина и способ ее изго"товления, включающая. выращивание шести штаммов лептоспир, ВГНКИ, ВГНКИ"2,ВГНКИ, ВГНКИ"4, ВГЙКИ, ВГЙКИ"6,осаждение лептоспир трихлоруксуснойкислотой. в количестве 3,0"3,33, от"стаивание, декантирование надосадоч"ной жидкости, дополнительное сгущениеосадка центрифугированием, нейтрали" 5 зацию кислотц в осадке 10 е-ным воднымраствором аммиака. К нейтрализованно"му центрифугату добавляют дистиллированную воду из расчета, чтобы осадок бцл сгущен в 25-30 раз по срав нению с исходной культурой. К полученной массе добавляют гидроксал до 33"353"ной концентрации. Вакцина вызывает образование иммунитета продолжительностью до шести месяцев у молод") 3 828няка и двенадцати месяцев у взрослыхживотных при однократном введении вдозе 0 3"2,0 мп21,Известная вакцина2не нашла применения из"за сложной технологии приготовления и трудности введения ееживотным вследствие большой плотнос"ти.Цель изобретения - повышение имму"ногенности вакцины.Для достижения цели вакцина оодер"жит антигены указанных серотипов приследующем соотношении,ВГНКИ"2 . 1 О"40ВГНКИ" 3 10"40ВГНКИ"410-40ВГНКИ"6 10-40или антигенов укаэанных серотиповпри следующем соотношении их, 3:ВГНКИ" 1 10" 40ВГНКИ" 4 10"40ВГНКИ10-40ВГНКИ-б 1 О" 40при следующем соотношении компонен"тов на 1 л вакцины:Антигены лептоспир 100-120 мгГидроокись алю"миния 25,7"28,9 гСыворотоцныйбелок 3,5-7,0 гКонсервант О, "0,2 гВода : До 1 лДля достижения поставленной целиобрабатывают трихлоруКсусной кисло"той половинный объем культуры лептоспир после осаждения белка и выдер".живания надосадочную жидкость декан"тируют в количестве 50"70 от обработанной кислотой культуры, а оставшуюся часть после ее нейтрализациисмешивают с отделенной второй поло"виной культуры .Вакцину вводят в следующих дозах:крупному рогатому скоту в возрасте1-12 мес. " 4)0"4) мл, а в возрастеот 12 месяцев и старше 8-10 мл, сви"ньям 6"10 мл, поросятам в возрасте1"3 мес. вакцинируют двукратно в до"зе 2,0-2,1 мл, мелкому рогатому ско"ту вакцину вводят в дозе 2-5 мл, аплотоядным - "3 мл.П р и м е р 1. Для приготовлениядепонированной поливалентной вакциныВГНКИ против лептоспироза животныхберут шесть штаммов лептоспир "ВГНКИ"1) ВГИКИ"2, ВГНКИ"3, ВГНКИ"4,ВГНКИ"5, ВГНКИ"6, отобранных по широте иммуногенного спектра, обеспечивающих изготовление препарата, про"филактирующего заболевание сельскохозяйственных и проюсловых животныхот лептоспироза в любой. точке Совет".ского Союза и в большинстве регионовмира. Выращивают их на сыворотоцнойпитательной среде, консервирует тиомерсалом в концентрации 1:10000, далее к половинному объему культуры добавляют трихлоруксусную кислоту до3- 3)13-ной концентрации для осажде"ния белка среды и лептоспир, Полу"ценную смесь выдерживают 2-3 ч для вы"падения осадка, надосадочную жидкость декантируют в количестве 55"603 от общего объема смеси, оставшийся осадок нейтрализуют аммиаком и фйосле нейтрализации, смешивают со второйполовиной исходной культуры, затемдобавляют б)0-6,14-ный раствор гидроокиси алюминия в количестве 29"30 .Полуценную таким образом вакцину расфасовывают и контролируют на актив"ность, безвредность и стерильность.П р и м е р 2, Берут штаммы лепто"спир, выделенные от сельскохозяйственных животных и селекционированныепо признаку максимальной иммуногеннойи антигенной активности и относящие"ся к шести серологическим группам:ВГНКИ, ВГНКИ"2, ВГНКИ 3, ВГНКИ"4)ВГНКИ, ВГНКИ-б.Для изготовления вакцины атамань выращивают на сыворотоцной среде в ре"акторах или баллонах, смешивают вдвух вариантах:1-й вариант: ВГНКИ, ВГНКИ,ВГНКИ"4 и ВГНКИ-б.2-,й вариант: ВГНКИ, ВГНКИ"4,ВГНКИи ВГНКИ,Смесь культур лептоспир консервируют мертиолятом 1:10000. Консервиро"ванную культуру выдерживают при комнатной температуре не менее 10-12 ч.Половину объема консервированной иподготовленной для изготовления сериивакцины культуру осаждают трихпорук"сусной кислотой, добавляя к 1 л культуры 30 мл насыщенного раствора трихлоруксусной кислоты, Белок .средыпод действием кислоты переходит в состояние геля и выпадает вместе с лептоспирами в осадок, Через 2 ч последобавления кислоты сифогом декантируют надосадочную жидкость в объеме 603от общего количества обработаннойкислотой культуры.8284 5Осадок нейтрализуют насыщеннымраствором аммиака де рН 7,0-7,2. При этом наблюдается растворение осадка. Нейтрализованную массу вносят в реактор с оставшейся культурой лептоспир и добавляют 30 гидроокиси алюминия 6-ной концентрации, т.е. на 700 мл культуре - 300 мл гидроокиси алюминия. Смесь энергично перемешивают и проводят расфасовку вакцины во флако"10 .ны при постоянной работе механической мешалки.Вакцину, изготовленную этим способом, контролируют на стерильность и безвредность общепринятыми метода миТаблица 1 Состав вакцины Содержание в 1 литревакциныминимум максимумеюе еееваюеюеее Компоненты вак"цины Ю ИВВ ю мее еее Антигены лептоспир 1 ОО мг 120 мг Концентрированная Предло" жен"ная ЭО ддьювант состо,2 г 3519 гящий из: а) гидро"окиси алюми ния идрсолей Выход вак"Чины на100 л,28,9 г культуры 25,7 г 100 л 5 л 100 л Иожно привить голов 70 г.Консервант 0,1 г 0,2 г 968,8 мл 970,6 мл Вода а) Один литр готовой вакцины содержит: 100 мг антигенов лептосяир серогруппсйегоЕаееогг 1 ад 1 ае, Са" п 1 со 1 а, Роейа, Тагаззоч (по 25 мг, на каждую серогруппу) 29,2 г адью" ванта, 0,1 г консерванта - соли тиомерсала (мертиолат) 970,6 мл. воды.б) 1,л готовой вакцины 2-го вариан" та содержит в своем составе: 120 мг антигенов лептоспир серогрупп Ог 1 рройуроза, Ропкеа, Тагаззоч 1, НеЬдоаад 1 з (ло 30 мг на каждую серогрупб) сыворо"точного бел"ка крови 3,5 г 59 6пу) 35,9 г адьюванта, 0,2 г тиомерсала, 963,8 мл водй.Антигенные свойства вакцины контролируют на пяти кроликах весом 2,0- 2,5 кг, которым вводят вакцину внутрибрюшинно однократно в дозе 3,0 мл. Через 25"27,дней после введения вак" цины у кроликов берут кровь и .опреде" ляют титр в каждой пробе сыворотки в РИА с лептоспирами всех серологи" ческих групп, входящих в состав вак" цины.Вакцину считают активной, если не менее, чем у четырех из пяти вакцио-" нированных кроликов титр сыворотки будет не ниже 1;400 к лептоспирам: дгрро-СурЬоза, ровопа, йагаззоч 1, ЬеЬдопвд 1 з и не ниже 1:100 к леото,спирам; 1 сйегоЬаепюггЬаде, сап 1 со 1 а.Сравнительные данные по феноловой,концентрированной и депонированнойвакцине представлены в табл. 2.Таблица 2Сравнительная характеристикавакцины Показатели феноловая крупного рогатого скота 4000 2500 10000 Вакцина, изготовленная предложен" ным способом, имеет значительные преимущества перед применяемой феноловой и концентрированной вакциной.Поливалвнтную вакцину ВГНКН вводят однократно в дозе: крупному рогатоМу скоуу до 12 мес. 4 мл., от 1 до 2 лет " 8 мл, взрослым животным10 мл, свиньям " до 3 мес. " 2 мл, от 3 до 1 О мес. - 6 мп, хрякам и сви" номаткам " 10 мл, мелкому рогатому скоту до 6 мес. - 2 мл, от 6 до 12 мес. - 2-5 мл, баранам и овцемат"кам " 5 мп.828459 8или антигенов указанных серотиповпри следующем соотношении,их, 3:ВГНКИ10-40вгнки10-40вгнки10"4 овгнки-б 1 о при соотношении компонентов на 1 лвакцины:Антигенцлептоспир 100" 120 мгГидроокисьалюминия 2,56-28,9 гСывороточ"ный белок 3,5"7,0 гКонсервант 0,1-0,2 гВода До 1 л2, Способ получения поливаментнойвакцины против лептоспироэа живот"ных по и, 1, включающий выращиваниекультур штаммов лептоспир в сьворо"точной среде, консервацию лептоспир,добавку трихлоруксусной кислотыдо 3,0-3,5-ной концентраций дляосаждения белка среды и лептоспир,выдерживание полученной смеси длявыпадения осадка, нейтрализацию щелочью и добавление депонирующего ве".щества, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что обрабатывают трихлоруксуснойкислотой половинный объем культурылептоспир, после осаждения белка ивыдерживания надосадочную жидкостьдекантируют в количестве 50"70 отобработанной кислотой культуры, аоставшуюся часть после ее нейтрализа"ции смешивают с отделенной второй половиной культуры;3 Способ использования вакциныпо и. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что вакцину вводят в следующих дозах;крупному рогатому скоту в возрасте1-12 мес. " 4,0-4,1 мл, а в возрастеот 12 мес. и старше " 8"10 мл, сви"ньям 6"1 О мл, поросятам в возрасте1"3 мес. двукратно по 2,0-2,1 мл,мелкому рогатому скоту - 2-5 мл, аплотоядным " 1"3 мл,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1 Инструкция по изготовлению иконтролю вакцины против лептоспирозасельско"хозяйственных и промысловыхживотных, ГВУ МСХ СССР, 1968,2 Авторское свидетельство .СССРИф 555664, кл. С 12 К УОО, 1976. Штаммы, используемые в вакцине,являются вакцинными и по широте иммуногенного спектра обеспечивают изготовление препарата, профилактируащего заболевание сельскохоэяйственных 5и промысловых животных от лентоспироза в любой точке Советского Союза ив большинстве регионов мира,Технология изготовления вакциныпо предложенному способу исключаетнеобходимость концентрирования культуры с помощью центрифугирования, чтоявляется немаловажным фактором, еслиучесть, что в стране ежегодно изготав"ливают около 400000 л противолептоспирозной вакцины; сокращает потребность в трихлоруксусной кислоте.Введение вакцинь животным практически не вызывает затруднений. Концент"рированную же вакцину можно вводить 20.только иглами с широкими каналами,что вызывает лишнюю травму тканей животных, но и в этих случаях инъекционные иглы часто засоряются, что затрудняет .массовую вакцинацию животных 25Предложенный способ позволяет изготовить из равного объема культурыв 2,5 и 4 раза больше доэ поливалентной вакцины ВГНКИ против лептоспиро"за животных, чем феноловой и концеНт"30. рированной вакцины.Способ позволяет сократить затраты .биофабричноЬ производства, а приме"нение вакцины обеспечит экономиюзатрат труда на 35,"40 млн, инъекцийежегодно, что составит экономию более 2,8 млн. рублей, исключит гибельот лептоспироза животных, аборты илептоспироносительство.формула изобретения - 401. Поливалентная вакцина ВГНКИпротив лептоспироза животных, содер"жащая антигены из штаммов лептоспирсеротинов ВГНКИ"1, ВГНКИ"2, ВГНКИ"3,ВГНКИ, ВГНКИ"5, ВГНКИ"6, консер" 45вант " гидроокись алюминия, сцвороточньи 4 белок и воду, о т л и ч.а ю щ а"я с я тем, что, с целью повышенияиимуногенности, вакцина содержит антигены укаэанных серотипов при следую" 50щем соотношении, Ф:ВГНКИ"2 1 О"40ВГНКИ10-40ВГНКИ"4 10-40ВГНКИ10-40 55 ВНИИПИ Заказ 10790/7 Тираж 711 Подписное