Способ получения ферментного препарата для свертывания молока

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ц 42380 Союз Советскн оциалистическ Республик) 1960071/28-1 а я вл е 07.09,7 с присоединением заявкисударственный комите вета Министров ССС о делам нзабретенийи открытий Приоритет 53) УДК 577.15.08И, Я, Веселов, Т. А. Смирнова и Н. А. Балашова Московский ордена Трудового Красного Знамени технологический институт пищевой промышленностиБ ПОЛУЧЕНИЯ фЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ СВЕРТЫВАНИЯ МОЛОКА(54) С 2 кислыи марганец и сернокислое этом указанные компоненты вво следующих соотношениях (% ):КрахмалПептонДвузамещенный фосфорнокислый калийОднозамещенный фосфорнокислый калийСернокислый магний Сернокислый марганец Сернокислое железо Углекислый кальций Остальное железо, при ят в среду а 2,0 1,0 0,5 0,0 0,0 0,0 клеток дкость ентратом, вание13 - источ- колиона и НРО 4, СОз -(%): те 1 -Изобретение относится к ферментной промышленности,Известны способы получения ферментного препарата для свертывания молока путем культивирования микроорганизмов, относящихся к виду Вас 111 цз ро 1 угпуха, на питательной среде, содержащей источники углерода, однозамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний и углекислый кальций, с последующим отделением клеток микроорганизмов от культуральной среды, например центрифугированием и выделением фермента из фугата, например высаливанием сульфатом аммония до концентрации 0,3 - 0,8% насыщения.Однако такой препарат наряду с молокосвертывающей активностью обладает и высоким протеолитическим действием на казеин. При использовании этого препарата при производстве сыра образуется мягкое сырное зерно, которое плохо вымешивается.Цель изобретения - увеличение активности получаемого фермента и снижение активности одновременно продуцируемых протеолитических ферментов.Для этого из вида Вас 111 цз ро 1 утпуха используют штамм 13 - 13, в качестве источника углерода используют крахмал, а в питательную среду дополнительно вводят пептон, двузамещенный фосф ори окисл ый калий, серноЦелесообразно перед отделением микроорганизмов в культуральную жи добавлять хлористый кальций до конц ции 0,05 М,0 Предлагаемый способ заключается в что осуществляют глубинное культивир Вас 111 цз ро 1 утпуха, в частности штамм 13, на питательной среде, содержащей ник углерода, в частности крахмал в 5 честве 2%, источник азота - 1 % пеп минеральные соли, такие как К КНР 04, МфО,; Мп 304, - т е 50, Са в количествах, соответственно равных 0,5; 0,5; 0,05; 0,05; 0,001 и 0,2, в течен о 4 суток.5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 0,50,05 65 Затем в культуральную жидкость добавляют хлористый кальций до содержания 0,05 М и центр ифугируют; клетки микроорганизмов удаляют.Из фугата фермент осаждают сернокислым аммонием, Полученный осадок растворяют в воде и диализуют.П р и м е р Штамм Вас 111 цз ро 1 утуха 13 - 13 выращивают на стерильной питательной среде, содержащей 2 крахмала, 1/, пептона, 0,5/, фосфорнокислого однозамещенного калия, 0,5% двухзамещенного фосфорнокислого калия, 0,05% сернокислого марганца, 0,05 О/о сернокислого магния, 0,001 /о серно- кислого железа и 0,2% углекислого кальция в течение 4 суток при 20 - 25 С.Молокосвертывающая активность полученной культуральной жидкости 3500 ед/мл, протеолитическая - 0,80 ед/мл.В культуральную жидкость вводят хлористый кальций до содержания 0,05 М и центрифугируют, клетки микроорганизмов удаляют, а из фугата выделяют фермент.Для этого в него добавляют сернокислый аммоний в концентрации 0,3 - 0,8/о насыщения.Образовавшийся осадок отделяют и растворяют в воде, а затем диализуют против дистиллированной воды при температуре 0 - 5 С в течение 24 час. Полученный диализат лиофильно высушивают. Получают ферментный препарат, представляющий собой порошок светло-серого цвета, растворимый в воде.Выход препарата по активности 90%.Молокосвертывающая активность препарата 300000 ед/г, протеолитическая - 60 ед/г.Молокосвертывающую активность определяют по времени свертывания 100 мл молока в 1 мл 1/,-ного раствора препарата и выражают в единицах активности.За единицу активности молокосвертывающего (сычужного) фермента принято количество частей молока, свертывающихся одной частью фермента при 35 С в течение 40 мин.Протеолитическую активность (ПА) определяют стандартным методом на казеине по Гаммерстену при рН б,5 (рН - молока).За единицу ПА принято такое количество фермента, которое за 1 мин при 30 С катализирует переход в неосаждаемое ТХУ состояние количество субстрата, содержащее 1 мк моль тирозина.Характеристика используемого штамма Вас 111 цз ро 1 утуха 13 - 13.Штамм выделен из пастер изованного молока.При определении вида использовали определитель ЦЕОН.В настоящее время штамм хранится в музее культур микроорганизмов кафедры технической микробиологии МПИПП,М о р ф о л о г и я. Палочки размером 0,45 К (1,75 - 7,0 мкм. Подвижные, перитрихи. Палочки располагаются поодиночке и цепочками, Грамположительны. Культуральные признакиПри выращивании на мясном, сусловом, крахмало-аммиачном, почвенном агаре - колонии круглые, серовато-белые, мелкозернистые, блестящие, дольчатые,На косом агаре образует пышный, серовато-белый налет.При росте на желатине образуются серовато-белые колонии, плоские, расплывающиеся, блестящие, просвечивающие.На желатине уколом культура образует слабый, белый, толстый, поверхностный налет. Наблюдается мешковидное разжижение.На картофеле растет нежным, серовато-белым налетом,При выращивании бактерий на жидких средах (мясном бульоне по Готтингеру, сусло- бульоне, средах с углеводами) на поверхности образуется сероватая пленка. Наблюдается помутнение среды и хлопьевидный осадок.Физиологические признакиВ аэробных условиях сбраживает глюкозу, лактозу, галактозу, ксилозу, арабинозу, мальтозу, сахарозу, фруктозу и крахмал с образованием кислоты и газа.желатин разкикает.Крахмал гидролизует.При росте на средах с крахмалом клетки образуют гранулозу, дающую синюю окраску при обработке иодным раствором.Является факультативным аэробом,П р ед м ет изобретения 1. Способ получения ферментного препарата для свертывания молока путем культивирования микроорганизмов, относящихся к виду Вас 111 цз ро 1 угпуха на питательной среде, содержащей источник углерода, однозамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний и углекислый кальций, с последующим отделением клеток микроорганизмов и выделением фермента из культуральной жидкости, например высаливанием сульфатом аммония до 0,3 - 0,8% насыщения, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью увеличения активности получаемого фермента и снижения активности одновременно продуцируемых протеолитических ферментов, из микроорганизмов Вас 111 цз ро 1 утуха используют штамм 13 - 13, в качестве источника углерода - крахмал, а в питательную среду дополнительно вводят пептон, двузамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый марганец и сернокислое железо, при этом указанные компоненты вводят в среду в следующих соотношениях (о/о):Крахмал 2,0Пептон 1,0Двузамещенный фосфорнокислый калий 0,5Однозамещенный фосфорнокислый калийСернокислый магнийКорректор Л. Денисова Редактор А. Бер Заказ 2424/15 Изд. ЛЪ 751 Тираж 529 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 Сернокислый марганец 0,05Сернокислое железо 0,001Углекислый кальций 0,2Вода Остальное 2, Способ по п. 1, отличающийся тем, что перед отделением клеток в культуральную жидкость вводят хлористый кальций до концентрации 0,05 М.