Способ получения декстраназы

, С 120 13/10 51 присоединением заявкиГосударствениый комитет Совета аеиийстров СССР по делам изобретеиийи открытий 32) Приорит ано 05,02.75. Бюллетень5 ликования описания 31,07.75Г. А, Молодова, Л. И, Петрова и Н. Н, Бурцева Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ54) СПОСОБ ПОЛ УЧ ЕН ИЯ ДЕКС 1 РАНАЗЫ Предлагаемыи способ позволяет в 3 - 4 раза увеличить активность декстраназы в культу- ральной жидкости,Активность внеклеточной декстраназы определяют вискозиметрически по разжижающей способности фермента с использованием в качестве субстрата 0,8%-ного раствора нативного бактериального декстрана. Для этого к 15 мл 0,8%-ного раствора декстрана в 0,1 М Ма-ацетатном буфере (рН 5,0) добавляют 1 мл культуральной жидкости (после соответствующего разведения). Реакционную смесь инкубируют при 37 С. Через определенные интервалы времени измеряют время истечения реакционной смеси на вискозиметре ВПЖс диаметром капилляра 0,54 - 0,56 мм, термостатированном при 37 С.Активность декстраназы рассчитывают по формуле: олнительное количест льную жидкость вводи ирования продуцента, об осуществляют след А;: де А -С,Ч -Выр на сре О декстрИзобретение относится к ферментной области микробиологической промышленности, аименно к способу получения декстраназы приглубинном культивировании мицелиальногогриба Реп 1 с 1111 цтп 1 цп 1 сц 1 озцтп 15.Известен способ получения декстраназы путем культивирования ее продуцентов на водной минеральной среде, содержащей декстран,с последующим выделением декстраназы изкультуральной жидкости.Недостатком известного способа являетсянизкий уровень активности получаемой декстраназы.С целью повышения активности декстраназы предлагается в процессе культивирования 1в культуральную среду, дополнительно вводить0,05 - 0,1% декстрана.Целесообразно допводекстрана в культура ть 2на 2 - 3 сутки культивПредлагаемый спос Ующим образом,В процессе выращивания продуцента декстраназы Реп 1 с 1111 цгп 1 цп 1 сц 1 озцгп 15, культивируемого на синтетической питательной среде известного состава с 1% нативного высокомолекулярного декстрана, к растущей культуре на 2 - 3-сутки культивирования добавляютдополнительно 0,05 - 0,1 % декстрана. 3 активность, ед./л;- концентрация субстрата, %;относительная вязкость;- время реакции, сек.щивание штамма-продуцента проводяе, содержащей (в %): 1,0 нативногна; 0,1 МаИОз, 0,08 К 2 НР 04 и 0,0459497 Таблица 1 Биомасса,ностьг/лед/л Время введения дополнительного количества декстрана, суткиАктивность, ед/л Исходное содержание декстрана в питательной среде, %0,05Контроль 3,5 2,8 257 64 0,1Контроль 60 65 4,3 3,0 135 64 0,2Контроль 3Мд 504. рН среды до стерилизации 6,0. Культивирование ведут в колбах на качалке (200 об/мин) при 29 - 30 С в течение четырех суток.Посевным материалом служит трехсуточный мицелий гриба.Посевной материал вносят в опытные колбы в количестве 4%.П р и м е р 1. На вторые или третьи сутки культивирования в опытные колбы, содержащие 100 мл среды с 1% декстрана, вносят дополнительно 0,1% декстрана, т. е, 10 мл вышеописанной среды.,Для,контроля во всех примерах продуцент выращивают на среде с 1% декстрана. На четвертые сутки роста определяют активность внеклеточной декстраназы (см. табл. 1),ф На вторые н третьи сутки вводят по 0,1% дек- страна Из данных. табл. 1 видно, что незначительное дополнительное внесение декстрана резко увеличивает биосинтез декстраназы, в то время как рост мицелия практически не меняется. Наиболее эффективным оказывается добавление 0,1% декстрана на третьи сутки культивирования. При этом наблюдается трех- четырехкратное увеличение активности декстраназы в культур альной жидкости (до 220 - 250 ед/л) . П р и м е р 2, В процессе культивирования продуцента на третьи сутки в опытные колбы со средой, содержащей 1% декстрана, вносят 5 10 15 20 4дополнительно 0,01; 0,03; 0,05; 0,1 и 0,2% дек. страна в виде стерильной исходной питательной среды, На четвертые сутки роста в культуральной жидкости определяют активность декстраназы (см. табл, 2).Наибольший уровень активности наблюдается на третьи сутки культивирования при внесении 0,05 и 0,1 % декстрана, Увеличение или уменьшение количества добавляемого декстрана в процессе культивирования не приводит к столь значительному увеличению активности (активность увеличивается только в 1,5 раза).П р и м е р 3. На третьи сутки,культивирования продуцента в опытные колбы вносят дополнительно 0,1% декстрана при разном исходном содержании его в питательной среде (0,5 - 1%), На четвертые сутки культивирования определяют активность декстраназы в культуральной жидкости (см. табл, 3).Таблица 3 Из данных табл, 3 видно, что дополнительное внесение 0,1% нативного декстрана на третьи сутки культивирования приводит к 3 - 4-кратному увеличению активности декстраназы, когда исходное содержание декстрана в питательной среде составляет 1%. При уменьшении исходного содержания декстрана в среде увеличения ферментативной активности не наблюдается. При выращивании продуцента на среде с 1,1% нативного декстрана, внесенного однократно до стерилизации среды, активность декстраназы на четвертые сутки культивирования не превышает активность контрольных труб, содержащих 1% декстраназы (59 - 64 ед/л).Таким образом, использование предлагаемого способа получения декстраназы позволяет увеличить активность последней в 3 - 4 раза. Предмет изобретения1. Способ получения декстраназы путем культивирования ее продуцентов на водной минеральной среде, содержащей декстран, с последующим выделением декстраназы из культуральной жидкости, отличающийсяЗаказ 16669 Изд, Ме 388 Тираж 529 Подписное ИНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж-З 5, Раушская иаб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 тем, что, с целью повышения активности декстраназы, в процессе культивирования в культуральную среду дополнительно вводят 0,05 -0,1 о/ д"кс-.-апа 2, Способ по п, 1, отличающийся тем, что дополнительное количество декстрана в культуральную жидкость вводят на 2 - 3 сутки культивирования продуцента.