Способ получения биомассы

Республик Зависимый от патентааявлено 22.Ч 11.1970 ( 146127028-13 М. Кл, С 12 с 11,1 Прцоритет Комитет па а изобретений и открытий при Совете Министров СССРОпубликовано 16,Х.1972, Бюллетень3 Дата опубликования описания 20.Х 1.1972 УДК 663.143(088.8 Авторыизобретени Иностранцыси Ватаиабе, Йосио Симада, ХКендзи Сузуки и Фумио(Япония)Иностранная фирКанегафучи Кагаку Когио К(Япония) Кийо зиме Кавахарада анака аявцтель маабусики Кайс ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ Сложные эфиры, крахмалопоства и кислоты не образует.Потребляет пептон, сульфатчевцну и аспарагцн.После выдержцванця в темесяца в солодовом экстрактезуется кольцо.Ферментцрует глюкозу, сахферментирует галактозу, малыи рафинозу не ферментцрует,добные вещеаммоция, мочепце одного прц 17 С обраарозу. Слабоозу. Л актозу Потреблфруктозу,эскулцц,салицин,Не потстрин, кр ребляет лактозу, рафцнозу ахмал, мелибиозу, арабинозу Изобрстенйе относится к микробиологической промышленности, а именно к способамполучения биомассы,Известен способ получения биомассы путем выращивания углеводородокисляющих 5дрожжей ца водной питательной срсде, содержащей в качестве источника углеродая-парафины и н-парафицсодсржащце углеводороды минеральные соли, стимуляторыроста, в присутствии пецогаситсля и при 10аэрации среды воздухом, Однако выход биомассы при этом способе недостаточно высокий.Предлагаемый способ позволяет увеличитьвыход биомассы благодаря тому, что в качестве углеводородокисляющих дрожжей используют штамм Сапс 11 да поч е 1 цв,Штамм Сапс 11 да поче 11 цз имеет следующуюхарактеристику, После трехдневного выдерживацця в солодовом экстракте при 25 С 20форма клеток видоизменялась от круглой доовальной, оци были размером 3 в ,4 - 6 р,Воспроизводство осуществлялось с помощьюмногосторонней окулировки.Псевдомццелцц хорошо развиваются на 25косом картофельном агаре, хорошо образуются бластоспоры и бластокоцидцц.После вырап 1 ивацця в течение одного месяца при 17 С возникает штриховая разводкаНа пластине, окрашенная в кремовый цвет. 30 Оптигиальные условия роста прц рН 5,0,температуре 30 С, при аэрации,Условия роста: рН 2,5 - 9,0, температура2 - 39 С.Нитраты не ассимилируют.Реакция на лакмусовое молоко: коагуляцци пет, цвет изменяется до синего.Желатицу разжижает,Потребляет бцотин,Каротицоидных пигментов не образует.Утилизация этанола положительная.Расщепляет арбутин. яет глюкозу, маннозу, галактозу, сахарозу, мальтозу, трагалозу,а-метцлглюкозид, ццулин, ксцлозу,аф Ьщф ЯххРофо о,о,офоф фф фФМ йоНэоОфф 1 а 1,о ф о" фф ох Х: Добавка к основной45 культуральной среде Не раз- множаютсяф 105,5 103,0 101,5 106,0 Нет добавки 50БнотинБиотцнКукурузная жидкостьДрожжевые экстрактыЧеласса55 3100,20,050,1 57,0 57,9 58,2 57,0 56,8 4,0 4,3 4,7 4,1 4,5 Способ получения биомассы с использованием штамма дрожжей Сапйда поче 1 Ов заключается в следующем.Культивируют дрожжи Сапйс 1 а поче 1 цз в аэробцых условиях на водной питательной среде, содержащей н-парафины и и-парафннсодержащие углеводороды в качестве главного источника углерода.и-Парафины представляют собой парафины, имеющие 9 - 30 атомов углерода в молекуле, которые получают с использованием молекулярных сит, метода аддукта моче- вины.н-Парафинами, например, являются керосин, газойль пли неочищенные парафины, которые перерабатываются в процессе получения нефтяных фракций и содержат более 50 о/о н-парафинов. Концентрация н-парафинов при непрерывном культивировании обычно составляет 0,01 - 1/о.Температура культивирования колеолется от 25 до 40"С, предпочтительно 27 - 35 С, рН культуральной среды составляет 3,5 - 6,0, предпочтительно 4,0 - 5,0.В культуральную среду добавляют незначительные количества фактора роста, например биотин или гомолог, имеющий такую же физиологическую активность, как и биотин, например дестиобиотин, или 0,02 - 0,5% биотинсодержащего вещества, такого как меласса, дрожжевые экстракты или кукурузная жидкость,В качестве вспомогательных сырьевых ве. ществ используют: источник калия, магния, цинка или железа, например хлористый калий, сульфат магния, сульфат цинка, сульфат железа; источник азота, например аммиак, сульфат аммония или мочевину, и источник фосфора, например фосфорную кислоту, первичный кислый фосфат натрия, вторичный кислый фосфат натрия, первичный кислый фосфат калия или вторичный фосфат калия,В зависимости от условий культивирования могут добавлять противопенящий агент, например соевое масло, селикоцовые смолы илц производные жирных кислот.В процессе культивирования в культуральную среду пропускают газ, содержащий свободный кислород.Пример 1. 200 мл культуральной среды, состоящей из 2 о/о н-парафинов (чистота 98 о/о, Со - 2), 0,2% фосфорной кислоты, 0,2 о/о КС 1, 0,06 /о сульфата аммония, 0,2 /о мочевицы, 0,06% Мд 504 7 Н 20, 30 частей ца лглн. Хпс 104 7 Н 20, 50 частей на мли. Гес 104 7 Н,О, 100 частей ца млн. СаС 12 2 Н,О, О,1/о мелассы и водопроводной воды, нейтрализованной до рН 6,0 с помощью ХаОН, выливают в двухлитровую встряхцваемую колбу, автоклавируют и доводят рН среды до 6,0, Культуральную среду пцокулцруют штаммом С апд Ыа поче 11 цз,Штамм культивируют прп встряхивании в течение 24 час для получения посевной культуры. 420 л питательной жидкости, имеющей тотже состав, что и культуральная среда, но несодержащеи мочевииы, заливают в дО-л фермеизационньш сосуд и сгорилизуют в течение5 1 Ь мин при 120 . 11 осле того как рН доводят до О,о, ООО мл посевнои культуры ипок 1- лирую г в ша гательную жидкость. дооавляю го 7 о -ныи воДнын аммиак Длн подДеРжаиипигагельнои среды при рН 4 - 5. Ь,ультивиро 10 ванне проводят при эО , и перемешивапппоо об/мин. госле прекращения погреоленияаммиака полученные клетки отделяют и промывают водои.выход клеток в расчете на н-парафин со 15 с гавляет 10 оо%, содержание неочпщенно опрогеица Ы,Ь%, а скорость роста равна О,вн,11 р и м е р 2. Используют те же посечшыекультуры, питательную жидкость для основного кулы цвирования (за исключением того,20 что вместо мелассы используют дрожжевоиэкстракт) и штамм ( апОгга поче 1 пв, 11 осевцую культуру переносят в ферыентатор, ггалогарифмической фазе роста культивирование проводят непрерывно.25 Й течение культивирования к питательнойжидкости того же состава, что и в примере 1,но не содержащей н-парафин, непрерывнодобавляют н-парафин (чистота 99/о, -и - 2 а)при этом концентрацию клеток поддержива 30 ют пРи 1,7 - 1,9/о, а концентРацию н-паРафина при 0,1 - 0,3%,Культивирование проводят при 33 С иперемешивании 1000 об/мин, при скоростиаэрирования 30 м/мии и рН 4 - 5.35 1 емпературу регулируют автоматически.Прекращают культивирование через 200 час.Выход клеток в расчете на н-парафин составляет 106,5%, содержание неочищенногои-протеина 58,1/о, продуктивность клеток40 4,2 г/л час. ф Размножение прекращалость после 32 час непрерывного культивирования. П р и м е р 3. Посевное культивирование и 60 непрерывное культивирование проводят втех же условиях, что в примере 2. Однако в качестве основной жидкости для непрерывного культивирования используют среду, как в примере 2, за исключением дрожжевого 65 экстракта, К среде добавляют биотин, куку.( оставитель В. куньеРедактор Л. Жаворонкова Техред А, Евдонов Корректор Т. Гревцова Заказ 3672/13 Изд. Чв 1557 Тираж 406 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Ж, Раушская иаб., д. 4/5 Типография, пр, Сапунова, 2 рузную жидкость, дрожжевой экстракт и мелассу соответственно.Культивирование проводят в течение 120 час, Результаты культивирования сведены в таблицу. Г 1 редм ет изобретенияСпособ получения биомассы путем выращивания углеводородокисляющих дрожжей на водной питательной среде, содержащей в качестве источника углерода н-парафин и и-парафинсодсржащие углеводороды, минеральные соли, стимуляторы роста, в прпсут ствии пеогасителя и при аэрации среды воздухом, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода биомассы, в качестве углеводородокисляющих дрожжей используют штамм Сапс 1 Ыа поне 1 цз.