Прибор для электрофореза биологического материала в полиакриламидном геле

оюцЕеОПИСИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 332684 Союз Советских Социалистических РеспубликЗависимое от авт. свидетельстваЗаявлено 15.1 Ъ 70 ( 142769028-13 М. Кл. С 01 п 1/1 с присоединением заявкиПриоритетОпубликовано 05 Х.1972. Бюллетень ЬДата опубликования описания 7 Х 1.19 Хамитет по делам зобретеиий и открытий при Совете Министров СССРЪ 15 УДК 663 33 (088.8) АвторыизобретениЗаявители Б. А, Устинников, В. Л, Яровенко и Г. А. Ермолесоюзный научно-исследовательский институт продуктов Всесоюзный институт гельминтологии им, акад, К. И,брожения икрябина ПРИБОР ДЛЯ МАТЕРИА Л ЕКТРОФОРЕЗА В ПОЛИАКРИЛ ИОЛОГИЧЕСКОГОИДНОМ ГЕЛЕ корение сбо упрощение бо РУ ках. На ч резисльный разор, про теже показан пение по А - А. Изобретение относится к области исследований методом фракционирования биологического материала,Известен прибор, содержащий концентрично размещенные цилиндрические стеклянные сосуды с расположенным между ними полиакриламидньтм гелем, две кюветы с буфер/ным раствором и сисгему охлаждения.Детали этого прибора связаны с помощью резьбового соединения, Однако такое соединение на стеклянных деталях ненадежно, сложно в изготовлении и неудобно при частой разборке и сборке.Цель изобретения врки и разрки прибора, а также его консткции.Это достигается тем, что прибор снабжен двумя фасонными крышками и стягивающимися болтами. Крышки имеют отверстия для прохождения буферного раствора в гель и канавки для циркуляции охлаждающей жидкости. Кюветы расположены таким образом, что одна из них непосредственно укреплена на верхней крышке, а другая, заполненная буферным расствором, сообщена с нижней.Кроме того, систему охлаждения выполняют в виде змеевиков, смонтированных на крышКонцентрические стеклянные цилиндры 1, 2и 3 прибора расположены между двумя фасонными крышками 4 и 5, которые стягиваются болтами б. Диаметры внутреннего цилиндра 5 1 и цилиндра 2 подбирают таким образом,чтобы толщина кольцевого пространства 7 между ними была не более 8 лл. Это пространство заполняют полиакриламидным гелем, который и является рабочим слоем, где про изводится электрофорез и фракционированпебелков как по электрофоретической подвижности, так и по величине молекул.Гель во время работы охлаждается водой,поступающей в цилиндр 1 по каналу 8 и ухо дящей по каналу 9, которые расположены вкрышках 4 и б. Омывая внутреннюю поверхность цилиндра 1, вода охлаждает кольцо гсля с внутренней стороны, Для охлаждения геля с наружной стороны воду подают в кольце вое пространство между цилиндрами 2 и 3 поканалу 10, а отводят по каналу 11 в крышках 4 и 5, В последних имеются сквозные отверстия 12, через которые гель контактирует с верхним и нижним буферным раствором, 25 Буферные растворы находятся в верхней 13и нижней 14 кюветах, выполненных из оргстекла, Прозрачность всего прибора необходима для того, чтобы можно было наблюдать движение свидетеля-маркера сквозь слой геля сверху 30 вниз под действием разгпщы потенциалов,Кювета 13 прикреплена к крышке 4 прибора болтами 15, а кювета 14 стоит на столе и ее горизонтальное положение регулируют установочными винтами. Кювета 13 имеет крышку 1 б, к которой прикреплена стойка 17. На стойке закреплен электрод из платиновой проволоки. В кювете 14 нмеется также платиновый электрод, укрепленный на подставке 18 из оргстекла. В кюветы при работе прибора заливается буферный раствор. Уровечь буферного раствора в нижней кювете таков, что прибор погружен в него на /зТак как металлические части не должны соприкасаться с буферным раствором, то нижняя часть болтов б окружена специальными втулками 19 из оргстекла, которые приклеены к крышке Б. Уплотнение между крышками и цилиндрами создается прокладками из пористой резины, вставленными в пазы. Дляохлаждения буферного раствора во время работы установлен змеевик 20 из стекла, аналогичныи змеевик расположен и в нижней кювете.Прибор ратотает следующим образом.Сначала заливают рабочие растворы геля, рабочие растворы с катализаторами по методике, аналогичной аналитическому диековому электрофорезу, но только в больщих объемах. Так, при наружном диаметре внутренне- по цилиндра 100 мм, высоте рабочего слоя геля 100 мм и лще его 8 мм, обем геля составляет около 280 смз,После полимеризации растворов на крышке 4 закрепляют кювету 18 и заливают буферные растворы в верхнюю и нижнюю кюветы. Через отверстия 12 с помощью шприцев наносят испытуемый раствор и подают воду для охлаждения в цилиндр 1, в кольцевое пространство между цилиндрами 2 и 3 и в змеевики верхней и нижней кювет. После этого подают напряжение на электроды соответствующих кювет и проводят электрофорез по методике, аналогичной аналитическому диоковому электрофорезу.После проведения опыта прибор разбираюти из него извлекают весь кольцевой пласт полиакриламидного геля, который разрезают, Можно вырезать один или несколько столбиков и окрасить их на белок. Полученные зоны 10 вырезают, элюируют и затем подвергают исследованию.С помощью такого прибора можно в течение одного опыта разделить около 1 г белка НВ фракции, различающиеся как по электро форетической подвижности, так и по величинемолекул. Предмет изобретения20 1. Прибор для электрофореза биологического материала в полиакриламидном геле, содержащий концентрично размещенные цилиндрические сосуды с расположенным между ними полиакриламидным гелем, две кюве ты с буферным раствором и систему охлаждения, отличающийся тем, что, с целью ускорения сборки и разборки прибора, а также упрощения его конструкции, он снабжен двумя фасонными крышками, стягивающимися ЗО болтами и имеющими отверстия для прохождения буферного раствора в гель, а также каналами для циркуляции охлаждающей жидкости, .при этосом кюветы раоположены так, что одна из них непоаредсэвенно укреплена 35 на верхней ирыщке, а друтая, заполненнаябуферным;раствором, сообщена с нижней.2, Прибор по п. 1, отличающийся тем, чтосистема охлаждения представляет собой змеевики, смонтированные на крышках.337684А12Составитель С. Могилевский Редактор Т. Рыбалова Техред Л. Богданова Корректор Л, Бадыламаказ 1536/12 Изд,675 Тираж 448 Подписное ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий прн Совете Министров СССР Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5пография, пр, Сапунова, 2