Способ отсроченного определения гликемии

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 180739 01 й 33/46 ГОСУДАРСТВЕННО ВЕДОМСТВО ССС (ГОСПАТЕНТ ССС АТЕ Р)ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 1(57) Использа именно кбретения -изобретенияределяют сомоглобинасодержаниямой определэффект, изоуровень глижизни. ко-германское д овалева, В льство СС 33/46, 198 ЧЕННОГО Р,ЕДЕК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ Изобретение относится к области медицины, а именно к судебной медицине,Цель изобретения - повышение точности.П р и м е р 1, Женщина 60 лет, смерть наступила от кровоизлияния в желудочки мозга в результате закрытой черепно-мозговой травмы. Кровь берут шприцам из бедренной вены и исследуют через 1-1,5 часа после изъятия следующим образом, Сначала определяют концентрацию общего гемоглобина методом, применяемым в клинико-диагностической лаборатории и переведенную в моль/л. Для этого в/йл трансформирующего раствора. состоящего из ацетоциангидрина -0,5 мл, калия желеэистосинеродистого - 200 мг, натрия двууглекислого - 1 г и дистиллированной воды до 1 л добавляют 10 мкл цельной жидкой трупной крови, дают постоять 20 мин и затем колориметрируют на спектрофотометре Сфпротив холостой. пробы при длине волны 540 нм, Зкстинкция общего гемоглобина равна 0,350, затем по калибровочному графику находим концентрацию общего гемоглобина, она равна 13,1 г %, что соответствует при переводе в моль/л - 2,03 10 ,ование; относится к медицине, судебной медицине. Цель изоповышение точности, Сущность ; в сухом пятне крови трупа опдержание гликированного геи при увеличении его в 2 - 3 раза по сравнению с норяют гликемию, Положительный бретение позволит определить кемии за истекшие 3 - 4 месяца Затем определяют концентрацию гликиро- Я ванного гемоглобина, Для этого в пробирку наливают 0,1 мл цельной трупной крови, добавляют 0,9 мл дистиллированной воды и 0,5 мл 0,2 н раствора трихлоруксусной кис- . лоты, Пробирку закрывают резиновой проб- . кой, в которую вставлена иньекционная игла. Пробу перемешивают и ставят в штатив, помещенный в кипящую водяную баню, - 4 4 ерез 10 мин иглы вынимают. Пробу нагре С 1 вают еще 50 мин (общее время нагрева 60 ( мин), Затем пробу вынимают и после охлаждения к ней добавляют 0,5 мл 400-ного раствора трихлоруксусной кислоты (для осаждения белков), После перемешивания пробу центрифугируют 10 мин при 6000 фф об/мин, Затем в обычную пробирку аккуратно отбирают 1 мл надосадочной жидкости и добавляют 1 мл концентрированной соля- д ной кислоты и 1 мл 0,02 м раствора тиобарбитуровой кислоты, Пробу перемешивают, пробирку закрывают стеклянной пробкой "слезкой" и инкубируют 6 мин на кипящей водяной бане. После инкубации измеряют величину экстинкции окрашенного комп-. лекса при длине волны 432,5 нм. Окраска стабильна в течение 1 ч. Контрольная пробафику и переведенная в моль/л равна 1,57 10Для определения концентрации гликиро-. ванного гемоглобина в пробирку набирают 0,2 мл раствора крови, добавляют 0,8 мл дистиллированной воды и 0,5 мл 0,2 н раствора трихлоруксусной кислоты. Далее исследование идет по выше указанной методике, Содержание гликированного гемоглобина в крови выражают в процентах от суммарного гемоглобина. Величина гликированного гемоглобина по калибровочному графику соответствует концентрации 2,52 10 моль/л, Далее подставляют в формулу, параллельно определяют количественное содержание глюкозы в растворе крови глюкозооксидазным методом, для чего в центрифужную пробирку наливаем 0,2 мл 5%-ного раствора сернокислого цинка, 0,2 мл 0,3 н раствора едкого натра, 0,5 мл дистиллированной воды и 100 мкл раствора крови.Результат смотрят по калибровочному графику в мг%, В данном случае содержание глюкозы в сухом пятне крови равно - 0,0 МГ%П р и м е р 2, Мужчина 60 лет, смерть наступила от интоксикации в результате рака желудка с прорастанием в поджелудочную железу, Кровь взята шприцом иэ бедренной вены. Исследования проводят соответственно вышеописанным методикам; сначала в жидкой цельной крови, затем через трое суток в сухом пятне крови, Содержание гликированного гемоглобина и глюкозы в жидкой цельной крови, соответственно, было равно. 4,23% и 0,00 мг%.Содержание гликированного гемоглобина и глюкозы в сухом пятне крови, спустя трое суток после высушивания, соответственно, было равно: 4,3% и 0,00 мг%,П р и м е р 3, Мужчина 41 года, смерть наступила в результате разрушения головного мозга при огнестрельном ранении в голову. Кровь взята шприцом из бедренной вены, Содержание гликированного гемоглобина и глюкозы в жидкой цельной крови, соответственно, было равно: 4,5% и 0,00 мг%.Содержание гликированного гемоглобина и глюкозы в сухом пятне крови, спустя сутки после высушивания, соответственно, было равно: 4,59% и 0,00 мг%,Использование изобретения позволит определить уровень глюкозы эа истекшие 3 - 4 месяца жизни. 50 млением 20 мкл раствора крови,хоКонцентрация его по калибровочному грасодержит 1 мл дистиллированной воды, 1 мл концентрированной соляной кислоты 1 мл 0,02 м раствора тиобарбитуровой кислоты, контроль нагревают 6 минут на кипящей водяной бане, 5Содержание гликированного гемоглобина в крови выражают в процентах от суммарного гемоглобина, Определение концентрации гликированного гемоглобина проводят по калибровочному графику, по- "О строенному по стандартным растворам кетоаминного соединения - фруктозоглицина, величина экстинкции которого соответствует величине зкстинкции гликированного гемоглобина, 15Величина экстинкции гликированного гемоглобина равна 0,085, что по калибровочному графику соответствует концентрации 3,25 10 моль/л. Далее подставляем в формулу; 20Ндс(% 2 СН О 100%=100% - 4,0%3,2510 42,203 10 2 25Параллельно определяют количественное содержание глюкозы в крови глюкозо-. оксидазным методом, для чего в центрифужную пробирку наливают 0,2 мл 5%-ного раствора сернокислого цинка, 0,2 30 мл 0,3 н раствора едкого натра, 0,5 мл дистиллированной воды и 50 мкл крови, Центрифугируют 5 мин при 4000 об/мин, отбирают 0,5 мл надосадочной жидкости и добавляют 2,0 мл рабочего раствора, состо ящего из Н ацетатного буфера с рН=4,8, глюкозооксидазы, пероксидазы и 1%-ного раствора ортотолидина в абсолютном спирте. Осторожно перемешивают и проводят исследование через 15 мин. Колориметри руют при длине волны 620 нм против холостой пробы. Результат смотрят по калибровочному графику в мг%. В данном случае содержание глюкозы в крови равно - 0,0 мг%, 45 Затем высушивают данный образец крови в чашке Петри в эксикаторе, распределив его тонким слоем, в течение суток. После этого приступают к определению гликированного гемоглобина и глюкозы в сухом пятне. Для этого навеску сухой крови массой 120 мг помещают в пробирку, растирают стеклянной палочкой и заливают 0,8 мл раствора. Оставляют стоять 50-60 мин,постоянно перемешивая палочкой,Определение общего гемоглобина проводят по выше укаэанной методике с добавф о р мул а и зоб ретен и я Способ отсроченного определения гликеии путем биохимического исследования суго пятна трупной крови, о т л и ч а ю щ и йЗаказ 1316 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 с я тем, что, с целью повышения точности, определяют содержание гликированного гемоглобина и при увеличении содержания его в 2-3 раза по сравнению с нормой определяют гликемию,