Способ моделирования однокамерного эхинококкоза

) С 09 В 23/2 ОСУД РЕТЕНИЯ ДЕТЕЛЬСТВУ аразит едицинская е болезни, ДНОКАИЕР-. с. ана ЕЙНЫЙ КОМИТЕТ%ТЕНИЯМ И 0 ТНРЫТИЯМ ССОф ОПИСАНИЕ К АВТОРСКОМУ СВ. НОГО ЭХИНОКОККОЗА Изобретение относится к медицине, а именно к гельминтологии.4 щ /.5ФЦель изобретения - повышение воспроизводимости способа.Для исполнения предлагаемого способа в качестве донорского материала используют ларвоцисты ЕсМпососсиз шп 1 сх 1 оси 1 аг 1 з от хлопковых крыс, на которых постоянно поддерживают лабораторный штамм паразита. Хлопковых крыс-доноров заражают следующим образом. Нивотныи обоего пола в возрасте 1 - 1,5 мес и массой 40 " 60 г вводят в брюшную полость по 500 - 1000 про" тосколексов.и 200 - 300 ацефалоцист, вцделенных иэ ларвоцист альвеолярного эхинококка от предшествующих доноров того же вида.Хлопковых крыс-доноров заражают инокулятом, приготовленным следующим образом. Ларвоцисты альвеолярного эхинококка массой 30 - 50 г выделяют от предццущнх доноров того же вида(57) Изобретение относится к медици-не, а именно к гельминтологии. Цельповйшение воспроизводимости способа. Для этого иэолят ЕсМпососсцз пв 1 с 1- 1 оси 1 агз пассируют на хлопковой крысе. Затем забирают ацефалоцисты и вводят инокулят, содержащий 300- 1000 ацефалоцист, золотистому хомяку. Применение способа позволяет повысить воспроиэводимость модели однокамерного эхинококкоза до 1003.(1 - 2 крыс), вскрытых через 2 - 3 иес после заражения, и измельчают ноэяицами, Полученные фрагменты смешивают со стерйльным физиологическим раствором хлорида натрия при соотношении объемов фрагментов ларвоцист и Физраствора 110. Полученную смесь процеживают через мельничный газ с диаметром ячеек 1,0 мм. Полученный Фильтрат повторно процеживают через мельничный газ с диаметром ячеек 0,3 мм. Затем Фильтрат взбалтывают и после 2 - 3 мин отстаивания удаляют надосадочную жидкость и заменяют ее свежим Физраствором до конечного объема 50 мл. Эту бперацню повторяют 5 - 7 раз до достижения полной прозрачности надосадочной жидкости, что необходимо для последующего под- счета зародышевых элементов в инокуляте. При последней замене надосадочной жидкостью используют Физрастворнтибиотнками (0,3 мг/мл гентамнции 2000 Ед/мп пенициллина).317В приготовленном таким образом и, пригодном для заражения животных инокуляте определяют концентрацию протосколексов и ацефалоцист альвеолярного эхинококка следующим образом.Инокулят равномерно перемешивают намагнитной мешалке со скоростью1000 об/мин и забирают из него 1,0 млв шприц с ограничителем объема и иглой внутренним диаметром 0,3 мм, Затем из шприца сразу же наносят напредметные стекла 5 - 10 капель инокулята и подсчитывают при малом увеличении микроскопа число протосколексов и ацефалоцист в каждой капле, Определив среднее число протосколексови ацефалоцист в 1 капле и количествокапель в 1 мл инокулята, вычисляютчисло протосколексов и ацефалоцист вуказанной единице объема инокуллта,Приготовленным инокулятом с известной концентрацией зародьппевых элементов альвеолярного эхинококка заражают 25 - 30 хлопковых крыс обоегопола в возрасте 1 - 1,5 мес и массойчО - 60 г. Гаждому животному обрабаотывают переднюю брюшную стенку 96этиловым спиртом, голову и задние конечности. фиксируют руками, животноеповорачивают головой вйиз и заданныйобъем инокулята (0,5 - 1,0 мл), содержащий 500 - 1000 протосколексов и200 - 300 ацефалоцист, вводят с помощью шприца и инъекционной иглы внутренним диаметром 0,3 мм в брюшную по"лость животного через нижнюю частьбркппной стенки во избежание травмирования петель кишечника,Хлопковых крыс вскрывают через2 - 3 мес после заражения, выделяютиз их брюшной полости развившиесяларвоцисты альвеолярного эхинококка,выделяют из ларвоцист зародышевыеэлементы, которыми заражают золотистых хомяков-реципиентов. Инокулят издонорских ларвоцист готовят так же,как это описано, за исключением того,что при определении концентрации винокуляте зародышевых элементов учитывают содержание в инокуляте толькоацефалоцист, так как протосколексамизолотистые хомяки не заражаются. Золотистых хомяков заражают инокулятомтак же, как и хлопковых крыс-доноров.Оптимальная доза инвазионного материала составляет 300 - 1000 ацефалоцист на животное.П р и м е р 1, Экспериментальнуюмодель однокамерного эхинококкоза воспроизводят у золотистого хомяка(самки) в возрасте 1 мес и массой56 г. В качестве донорского материалаиспользуют ларвоцисты Есп 1 пососсозшц 111 оси 1 аг 1 я от хлопковой крысы,зараженной внутрибрюшинно протосколексами и ацефалоцистами альвеолярного эхинококка от экспериментально зараженного предыдущего донора того жевида, Хлопковую крысу-донор заражаютвнутрибрюшинно инокулятом, приготовленным следующим образом. Ларвоцистыальвеолярного эхинококка массой 32 гвыделяют из брюшной полости предыдущего донора, вскрытого на 83-й деньпосле заражения, измельчают ножницами и полученные фрагменты смешивалисо стерильным физиологическим раствором хлорида натрия при соотношенииобъемов Фрагментов ларвоцист и физраствора 1:10. Смесь процеживают через мельничный газ с диаметром ячеек1,0 мм. Полученный фильтрат пропускают через мельничный газ с диаметром 2ячеек 0,3 мм. Затем фильтрат взбалтывают и после 2 мин отстаивания удаляют надосадочную жидкость. Эту операцию повторяют 5 раз до полной прозрачности надосадочной жидкости, При ЗО последней замене надосадочной жидкости используют физраствор с антибиотиками (0,3 мг/мл гентамицина и2000 ЕД/мл пенициллина) и объем фильтрата доводят до 50 мл.В приготовленном таким образоминокуляте определяют концентрациюпротосколексов и ацефалоцист следую"щим образом, Инокулят равномерно перемешивают на магнитной мешалке со ,щ скоростью 1000 об/мин и забирают изнего 1,0 мл в шприц с ограничителемобъема и иглой внутренним диаметром0,3 мм. Затем из шприца сразу же наносят на предметные стекла 5 капельинокулята и подсчитывают при маломувеличении.микроскопа число протосколексов и ацефалоцист в каждой капле.Определив среднее значение числа протосколексов и ацефалоцист в 1 капле,равное 5,7 и 2,3 экз, соответственно,вычисляют и количество капель в 1 млинокулята, равное 89, подсчитываютчисло протосколексов и ацефалоцист в1 мл инокулята, которое составляет 5соответственно 507 и 205 экз.Инокулят в указанном объеме вводятв брюшную полость хлопковой крысеП р и и е р 2. Экспериментальнуюмодель однокамерного эхинококкозавоспроизводят у золотистого хомяка(самца) в возрасте 1,5 мес и массой68 г, Источник донорского паразитарного материала, способ заражения донора, а также способ приготовленияинокулята из донорских ларвоцист альвеолярного эхинококка такие же, каки в примере 1, Концентрация ацефалоцист в используемом инокуляте1000 экз/мп. Хомяк получает внутрибрюшинно 1,0 мл инокулята способомпо примеру 1. К сроку Вскрытия жиВОтного через 7 мес после заражениябрюшно хомяка резко увеличивается.При вскрытии из брюшной полости хомяка выделено 39 ларвоцист однокамерно го типа, диаметр которых колебаетсяот 8 до 32 мм, а масса варьирует впределах 0,73 - 8,54 г. Общая массавыявленных у хомяка ларвоцист 41,3 г(48,7 Х от массы тела животного, раву 5 ной 84,8 г), Во всех ларвоцистах обнаружены выводковые капсулы, содержавшие по 64 - 362 зрелых протосколексов.Пременение способа позволяет повь 1- сить воспроизводимость модели однокамерного эхинококкоза до 1003. Способ моделирования Однокамерного 35 эхинококкоза, .Включаоций внутрибрюшинно введение экспериментальному животному зародышевых элементов личи.ночной стадии эхинококка, о т л и -ч а ю щ и й с я тем, что, с целью 40 повышения воспроизводимости способа,предварительно изолят ЕСЬ 1 пососсозшц 11 т 1 оси 1 агав пассируют на хлопковойкрысе, затем осуществляют забор ацеФалоцист и вводят инокулят, содержа ций 300 - 1000 ацефалоцист, золотистому хомяку. Составитель А.Бобров Редактор И.щербак Техред ,Иоргентал Корректор И.Эрдейи а ваааав ав а ва аа ва аввааавааа а ваЗаказ 2364 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101 51745740 6брюшную стенку крысы обрабатывают96" этиловым спиртом, голову и задниеВконечности животного Фиксируют руками и поворачивают крысу головой внизи с помощью шприца и иньекционной иг-.лы внутренним диаметром 0,3 мм забирают 1 мл равномерно перемешиваемогона магнитной мешалке инокулята и вводят в брюшную полость хлопковой крысе через нижнюю часть брюшной стенки.Через 76 дн после заражения крысуВскрывают, выделяют .из брюшной полости животного развившиеся ларвоцистыальвеолярного эхинококка, масса которых составляет 26 г, и используют ихдля приготовления инокулята описаннымспособом,При количественном определении со. держания зародышевых элементов паразита учитывают концентрацию толькоацефалоцист, В 50 кп приготовленногоинокулята концентрация ацефалоцистсоставляет 752 экз/мл, Этим инокулятом заражают подопытного золотистогохомяка так же, как и хлопковую крысудонора путем внутрибрюшинного введения животному 0,5 мл инокулята, содержавшие 300 ацефалоцист эхинококка,Ва 63-й день после заражения хомякавскрывают и выделяют из брюшной полости животного развившиеся ларвоцисты эхинококка. Всего выделено 17 лар- ф о р и у л а и з о б р е т е н и явоцист, масса которых варьирует от0,48 до 5,63 г, а диаметр - от 5. до12 мм, Все ларвоцисты однокамерноготипа. При проколе стенки каждой ларвоцисты препаровальной иглой в однойточке поверхности наблюдают полное.спадение всей ларвоцисты с истечениемиэ нее гидатидной жидкости. Общаямасса ларвоцист у животного составляет 26,8 г .(35,6 Е от массы тела хомяака, равной 75,2 г). В 12 ларвоцистахвыявлено множество,выводковых капсулс 37 - 175 юными и зрелыми протосколексами в каждой. Остальные ларвоцисты стерильны.