Способ прогнозирования рецидивов увеита

:,О О.,ГОСУДАРСТВЕ ННЫ Й КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН У довательский Гельмгольца ева, А.Ф.Ка Ю. Барышни и лечение увеи мных заболева ндации, М., 198 ИРОВА 7) Иэобрет ожет быть ания разви тся к медицинео для прогнозироу больных сомати К АВТОРСКОМУ СВИД(71) Московский научно-исслинститут глазных болезней им(54) СПОСОБ ПРОГНОЗДИВОВ УВ ЕИТА(5 ение относим использованв тия увеитов Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и предназначено для прогнозирования характера течения эндогенных увеитов и ретиноваскулитов.Цель изобретения - прогнозирование рецидивов увеита у больного до развития симптомов основного заболевания.Способ осуществляется следующим об-. разом.Периферическую кровь (15-20 мл) из локтевой вены забирают в пробирку с разведенным 1:100 гепарином, наслаивают на градиент плотности фиколлверографин 1077 (9 объемов крови на 3 объема градиента), центрифугируют в течение 30 мин. при 1000 об/мин, Мононуклеары собирают пастеровской пипеткой из интерфазы, Клетки отмывают средой 199 (5 - 7 мл) трех-. ческими заболеваниями. Цель иэобретения - прогнозирование увеитов у больного без симптомов основного заболевания, У больного берут кровь, определяют в ней уровень бласттрансформации лимфоцитов ыа неспецифический митоген, выявляют лимфоциты, содержащиеа- и 1 ГАантигены, устанавливают групповую принадлежность крови и при снижении уровня бласттрансформации по сравнейию со здоровыми, количестве 1 а, содержащих лимфоцитов ниже 10, количествеГА - 1, содержащих лимфоцитов ниже 50, у больного с группой крови А прогнозируют развитие увеита. Способ по сравнению с прототипом позволяет прогнозировать развитие увеита у больных до развития симптомов основного соматического заболевания. кратным центрифугированием по 20 мин при 1000 об/мин.Выделенную таким способом культуру лимфоцитов разводят средой 199 для получения концентрации не более 1,5-2 х 10б клеток в 1 мл.Предметные. стекла заготавливаются следующим образом.На предварительно обезжиренные и слегка подогретые на пламени газовые горелки накладывают кусочек парафильма М с вырезанными отверстиями-лунками диаметром от 3 до 5 мм и плотно прижимают к стеклу с целью полного приклеивания. Подогрев следует проводить осторожно, чтобы парафильм не расплавился, иначе лунка будет мелкой и содержимое ее может соединяться с содержимым соседней лунки, но ине слабым, иначе содержимое лунки будет затекать под парафильм, Такие стекла могут храниться длительное время.В день исследования в лунки наносят поли-:лизин (20 - 50 мкг/мл) и для контакта помещают на 1 ч в термостат при 37 С. Далее отмывают в среде 199 от избытка поли-:лизина и в такие подготовленные лунки помещают культуру клеток в количестве 20 - 50 мкл в зависимости от диаметра лунки с последующей инкубацией в термостате в течение 1 ч. Далее в эти лунки вносят моноклональные антитела (МКАТ) и вновь инкубируют в течение 1 ч в термостате. П ромы вают от излишка М КАТ 5 раз по 1 мин в среде 199. Для окрашивания клеток наносят 20 - 50 мкл Г (ав)г.-фрагмента кроличьей люминесцирующей сыворотки против глобулинов мыши. Контакт с красящим фрагментом проводят в течение 1 ч при 4 С в холодильнике, Затем промывают пятикратно в стаканах со средой 199 (по 30 - 50 мл среды) в течение 1 мин в каждом, После этого в лунку вносят 50-ный глицерин, закрывают лунки покровным стеклом. Препарат готов к микроскопическому исследованию,В качестве МКАТ служила асцетическая жидкость от мышей-носителей гибридомы, линии ВА В/С в разведении 1;100. В работе использованы МКАТ серии ИКО:ИКОпротив 1 а-антигенов и ИКО - 11 противЕА-Г-антигена,Г(аЬ)г-фра.гменты приготовляли из кроличьей антисыворотки против иммуноглобулинов белой мыши, меченых ФИТЦ, причем приготовляли их по стандартной методике, адсорбировали печеночным порошком и лимфоцитами человека и в реакции использовали в разведении 1;10.Микроскопия проводится в фазовоконтрастном и люминесцентном режимах с исследованием нескольких полей зрения попеременно; то в одном, то в другом режиме с подсчетом 200 клеток специфического типа иммунофлюоресценции при увеличении объектива х 90 - 100, окуляра 2,5 - 10 под масляной иммерсией. Согласно литературным данным, 1 а-антигены участвуют в презентации антигена, клеточном взаимодействии, определяют генетическую рестрикцию и силу иммунной реакции,ЕА-;лимфоцитарный функционально ассоциированный аьтиген участвует в начальной распознающеадгезионной фазе реакции цито-оксических Т-лимфоцитов и играет роль "адгезионного клея", Недостаточность.и отсутствие а- и ЫА-,1; антигенов обуславливают дефект гумо 10 ность экспрессии от 10 и ниже для а- и от 45 тается сниженным и расценивается какугнетение функциональной активности Т- лимфоцитов,По нашим данным у 42,7больных часто рецидивирующими увеитами отмечался 50 сниженный пролиферативный ответ лимфоцитов на неспецифический митоген. 30 35 40 рального и клеточного иммунитета и приводят к иммунодефициту. В контрольной группе доноров - практически здоровых людей (75 чел) экспрессия а-антигена составила диапазон от 11; до 35 в среднем 292,3%, Экспрессия .РА - антигена в контроле (20 чел) колебалась в пределах 6 - 15 в среднем 12,4+1,4. Эти данные позволили расценивать выражен 5 и ниже дляРА-,-антигенов как проявление дефицита а- иЕА;положительных клеток.Сопоставление выраженности экспрессии а- и .ГА+антигенов на мононуклеарах крови у больных увеитами в зависимости от характера течения увеита показало достоверно выраженную связь между дефицитома- иРА-;положительных клеток и часторецидивирующим характером течения увеита (р0,01; р0,01). Реакцию бластрансформации лимфоцитов с неспецифическим митогеном про-. водят по общепринятой методике и используют либо фитогемагглютинин фирм ОВо или В/еВоще или отечественный лимфоцитарный митоген в дозе 0,05.мл на 3 мл культуральной смеси, После трехдневной инкубации в термостате при микроскопировании мазка, приготовленного из инкубированной культуры клеток, определяют число бластных клеток на 500 лимфоцитов и выражают в процентах, Мазки окрашивались водным раствором азурэозина следующего состава: эозин 20 мл; азур 26 мл; дистиллированной воды до 100 мл, Краска наносилась на мазок в объеме 3-4 мл на 10 - 15 мин, Затем мазки промывались под струей проточной воды, Краска наносилась на мазок в объеме 3 - 4 мл на 10 - 15 мин, Затем мазки промывались под струей проточной воды. Краска готовилась ехвгпрогае. При наличии менее 55бластов пролиферативный ответ лимфоцитов счиОпределение групповой принадлежности крови больного по системе АВО проводитсяя по ста нда ртной методике определения эритроцитарных антигенов с помощью коммерческих гемагглютинирующих сывороток 4-х групп кровищ(0, а,ф И(А, Д, (В, а), Ч(А, В., О),логическим данным. Клиническое течение; рецидива правого глаза - свежие полиморфные преципитаты через 8 мес.Предложенный способ прост, Все исследования проводятся одномоментно,55 П р и м е р 1, Б-ной Б., 23 года, амбулаторная карта М 7870/88.Диагноз: генерализованный увеит ОИ (обоих глаз), неактивный, Длительность заболевания 25 года. Заболевание левого глаза 5 (ОЯ) возникло без видимой причины в феврале 1987 года, правый глаз (ОД) заболел через год, в феврале 1987 г. До августа1988 г рецидивы увеита ОД отмечались 3 раза, левого глаза - 10 раз, 10При первичном иммунологическом обследовании обнаружены; низкое содержание 1 а и 1 РА-Г клеток (10 и 5 соответственно); сниженный ответ лимфоцитов на лимфоцитарный митоген (42); 15 группа крови А(И).Полученные данные позволили предположить неблагоприятный прогноз,Клиническое течение: возникновениерецидива увеита левого глаза через 6 мес в 20 виде субретинальных геморрагий и отека сетчатки.П р и м е р 2. Б-ной А 36 лет, амбулаторная карта Ь 6153/88, Диагноз: ангиит ОД, Процесс первичный, длительность за болевания 2 мес. Прибыл в институт для уточнения диагноза и лечения. При иммунологическом обследовании установлены низкие уровни 1 а- иРАсодержащих клеток (10 и 30/О соответственно) группа крови А 30 (11), снижение функциональной активности лимфоцитов (400/ бластных форм), Прогноз неблагоприятный по иммунологическим показателям.Клиническое течение: рецидив гемоф тальма ОД через 2 мес после окончания курса лечения.П р и м е р 3. Б-ой С 38 лет, амбулаторная карта В 12388/88. Диагноз: генерализованный уверит ОИ неактивный. 40 Длительность заболевания левого глаза 25 лет, правого глаза 1 год. До мая 1988 года обострения на левом глазу отмечались 12 раэ, на правом - 2 раза. В момент обследования установлены: группа крови 45 А, низкий уровень 1 А - и 1 РАклеток(8 и 1% соответственно), сниженный пролиферативный ответ лимфоцитов в РБТ на неспе. цифический митоген (450).Прогноз неблагоприятный по.иммуноокончательный результат может быть получен в достаточно короткий временной промежуток (4 дн).Предложенный способ прогнозирования тяжести течения увеита основан на последних достижениях фундаментальной иммунологии с применением новейших методов исследования, в частности моноклональных антител, позволяющих определять качественные и количественные дефекты в иммунной системе на молекулярном уровне.Использование предлагаемого способа на основании оценки функции иммунокомпетентных клеток, групповой принадлежности крови больного по системе АВО дает возможность прогнозирования рецидива увеита, определения групп больных повышенного риска рецидива, нуждающихся в диспансерном наблюдении, и возможность предупредить развитие тяжелых исходов путем своевременного профилактического патогенически обоснованного курса лечения с применением иммуномодуляторов направленного действия и, как следствие, сокращение и уменьшение трудопотерь, увеличение продолжительности трудоспособного периода больного.Предлагаемый способ позволяет прогнозировать развитие рецидивов увеита без клинического проявления основного соматического заболевания, а по прототипу. возможно прогнозировать увеит только в . случае развития у больного симптомов общего заболевания.Ф о рмул а изобретен и яСпособ прогнЬзирования рецидивов увеита, включающий забор крови, инкубацию ее с митогеном и определение уровня бласттрансформации, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью раннего прогнозирования до развития симптомов основного заболевания, дополнительно выявляют в крови лимфоциты, содержащие 1 а и 1 РАантиге-. ны, устанавливают групповую принадлежность крови.и при снижении уровня бласттрансформации по сравнению со здоровыми при количестве 1 а, содержащих лимфоцитов ниже 10, и количестве 1 ГАсодержащих лимфоцитов ниже 5, у больного с группой крови А(11), прогнозируют рецидив увеита.