Способ определения реактогенности живых чумных вакцин

(я)з 6 0 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ВТОРСКОМУ СВ ЬСТВУ(56)Кн Основные критных штаммов чумногоские рекомендации. С тельский противочуми Закавказья рии отбор вакцин- микроба. Методиче ратов, 1976, 34,(54) СПОСОБ ОПРЕ НОСТИ ЖИВЫХ ЧУ ЕНИЯ РЕАКТОГЕНЫХ ВАКЦИН Изобретение отно частности к способам генности живых бакте тив особо опасных инЦелью изобретен ние точности способа.Способ осуществл не, в акто- просится к меди определения риальных вакц фекций, ия является и ыш яют следующим обраГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР зом,На гистологических срезах регионарных лимфатических узлов иммуйиэированных животных с целью установления степени ответной реакции лимфоидной ткани и повышения уровня объективности оценки реактогенности вакцийных штаммов микроскопически исследуют регионарные лимфатические узлы, а дифференциацию функционально-морфологического состояния осуществляют по увеличению площади "светлых центров" лимфоидных фолликулов в сравнении с контролем иммунизированных эталонным вакцинным штаммом чумного микроба ЕВ.Независимо от примененных доз через 1 сут после иммунизации морских свинок(57) Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии. Целью изобретения является повышение точности способа, Цель достигается тем, что после вакцинации у животных исследуют лимфатическую ткань регионарных лимфатических узлов, в которой осуществляют площадь "светлых центров", По увеличению площади светлых центров в 1,6-2,5 раза на 1-7-е сутки по отношению к эталонному штамму определяют вакцину как реактогенную. Способ значительно повышает точность лабораторного метода. культурой реактогенного штамма чумного микроба К(Кызылкумский 2) площадь "светлых центров" фолликулов регионарных лимфатических узлов увеличивается в 1,6-1,7 раза в сравнении с площадью "светлых центров" фолликулов регионарных лим- а фатических узлов морских свинок, ц иммунизированных культурой эталонного вакционного штамма чумного микроба ЕВ, Более значительное увеличение площади (светлых центров) через 3.-5 сут после имму- ф низации морских свинок культурой реактогенного штамма К(Кыэылкумский 2), в ОР 2,2-2,5 раза в сравнении с площадью "светлых центров" фолликулов регионврных лиы. фатических, узлов морских свинок, иммунизированных культурой эталонного штамма связано со свойствами инвазивности, приживаемости, раэмножаемости и распространяемости микробов, преобладающими у микробов штамма К.Выбор для оценки реактогенности чумных вакционных штаммов ".светлых центров" лимфоидных фолликулов регионарныхлимфатических узлов обусловлен тем, что "светлые центры" являются лабильными структурами лимфоидной ткани на различные токсические воздействия и в них происходит активное размножение лимф)цитов под влиянием антигена, Поэтому оценка реактогенности вакционных чумйых штаммов по увеличению площади светлых центров" фолликулов регионарных лимфатических узлов прэволяет судить о новых свойствах заявляемых отличий.Опытной группе морских свинок вводят подкожно в верхнюю половину бедра двухсуточную агаровую культуру второй генерации реактогенного штамма Кв дозах 100 микробных клеток 10 млн, м.к. и 2 млрд, м.к, по ОСО мутности 42-28-59-85. Контрольную группу. морских свирок иммунизируют двухсуточной агаровой культурой второй генерации эталонного вакционного штамма чумного микроба ЕВ. Морских свинок забивают по 3 на каждую дозу через 1, 3, 5, 7, 8 и 10 сут, вскрывают и регистрируют видимые изменения в органах,Регионарные лимфатические узлы фиксируют в 10 -ном водном растворе формалина, заключают в парафин, готовят среды толщсиной 5 мкм; окрашивают их гематоксилином и зозином, В срезах регионарных лимфатических узлов иммунизированных животных с помощью окулярной линейки проводят измерение диаметров светлых центров лимфоидных фолликулов при увеличении окуляра 10", объектива 9" микроскопа МБИс бинокулярной насадкой АУкратностью насадки 1,5" определяют площадь "светлых центров" по формуле эллиптичности структурЛбмаксСмин 4 К 2 Где л= 3,14; омакс максимальный диаметр "светлого центра"; Омичи - минимальный ди= аметр "светлоФ центра"; К - линейное увеличение объектива. Полученные результаты обрабатывают математически и получают независимо от дозы среднюю величину площади "светлого центра".П р и м е р 1. Опытной группе морских свинок вводили подкожно в верхнюю половину бедра двухсуточную агаровую культуру второй генерации реактогенного штамма умного микроба Кв дозах 100 микробных клеток 10 млн. мк, и 2 млрд, м.к, по ОСО мутности 42-28-59-85(по 3 животных на каждую дозу). Контрольной группе морских свинок вводили двухсуточную агаровую культуру второй генерации эталонного вак Лдмаксбмин К"обрабатывали математически и получалисреднюю величину площади "светлого центра" фолликулов регионарных лимфатических узлов, составляющую в опытной группе 177 + 26 мкм и в контроле - 107+ 14 мкм .Определяли кратность увеличения площади "светлых центров" фолликулов регионарных лимфатических узлов у животных, иммунизированных реактогенным штаммом чумного микроба Кпо отношению к площади "светлых центров" фолликулов регионарных лимфатических узлов в контроле у животных, иммунизированных эталонным вакционным штаммом чумного микроба ЕВ.45Кратность составляла 1.6 - 1.7 раза,50 55 5 10 15 20 цинного штамма чумного микроба ЕВ.в тех же дозах, что опытной группе морских свинок. Животных забивали через 1 сут после иммунизации, вскрывали и регистрировали видимые изменения в органах,Регионарные лимфатические узлыфиксировали в 100 -ном водном растворе формалина, заключали в парафин и готовили гистологические срезы толщиной 5 мкм, ок- рашивали их гематоксилином и эозином, проводили измерение диаметров "светлых центров" лимфоидных фолликулов с помощью окулярной линейки при увеличении окуляра микроскопа МБИ10". объектива 9 ф с кратностью бинокулярной насадки АУ 1,5", Цену деления окулярной линейки определяли с помощью объект-микрометра на указанном микроскопе, Площадь "светлых центров" фолликулов в срезах регионарных лимфатических узлов определяли по формуле эллиптичности структурс П р и м е р 2, Опытной группе морских свинок вводили подкожно в верхнюю половину бедра двухсуточную агаровую культуру второй генерации реактогенного штамма чумного микроба Кв дозах 100 микробных клеток 10 млн. м,к, и 2 млрд. м. к. по ОСО мутности 42-28-59-85 (по 3 животных на каждую дозу), Контрольной группе морскйх свинок вводили двухсуточную агаровую культуру второй генерации эталонного вакцинного штамма чумного микроба ЕВ в тех же дозах, что опытной группе морских свинок, Животных забивали через 3 сут после иммуниза1712818 Составитель Л,СтебаеваРедактор В.Трубченко Техред М,Моргентал Корректор М.Максимишинец Заказ 530 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород. ул.Гагарина, 101 ции, вскрывали и регистрировали видимые изменения в органах.Регионарные лимфатические узлы фиксировали в 10 о -ном водном растворе формалина, заключали в парафин и готовили гистологические срезы толщиной 5 мкм, окрашивали их гематоксилином и эозином, проводили измерение диаметров "светлых, центров" лимфоидных фолликулов с помощью окулярной линейки при увеличе.нии окуляра микроскопа 10", объектива 9", с кратностью бинокулярной насадки АУ, 1 5". Цену деления окулярной линейки определяли с помощью объект-микрометра на указанном микроскопе. Площадь "светлых центров" фолликулов в срезах регионарных лимфатических узлов определяли по формуле эллиптичности структур 5 - где л - 314 смаке - максимальный диаметр "светлого центра", Омичи - минимальный диаметр "светлого центра", К- линейноеувеличениеобъектива, Полученные результаты обрабатывали математически и получали среднюю величину площади "светлого центра" фолликулов регионарных лимфатических узлов в опытной группе, составляющую 238 + 36 мкм и в контроле - 103,. 13 мкм . Определяли крат 2ность увеличения площади "светлыхцентров" фолликулов регионарных лимфатических узлов у животных, иммунизироеан 5 ных реактогенным штаммом чумногомикроба Кпо отношению к площади "светлых центров" фолликулов регионарных лимфатических узлов в контроле у животных,иммунизированных эталонным вакцинным1 О штаммом чумного микроба ЕВ. Кратностьсоставляла 2,2-2,4 раза,Способ позволяет значительно повысить точность определения реактогенностибактерий.15 Формула изобретенияСпособ определения реактогенностиживых чумных вакцин путем вакцинации споследующим микроскопическим исследованием лимфоидной ткани в сравнении с20 эталонным вакцинным штаммом. о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышенияточности способа, исследуют лимфатическую ткань регионарных лимфатических узлов, в которых определяют площадь светлых25 центров и при увеличении площади в 1,6-2,5раза на 1 - 7 сутки по отношению к эталонному штамму определяют вакцину как реактогенную,