Способ изготовления коллагеновых покрытий для использования в офтальмологии

.Амстисов аучно-техии глаза"Багров, Т,и А.В.Оси ьство СССР00, 1985, ВЛЕНИЯ КОЛЛАГЕЛЯ ИСПОЛЬЗОВА- ИИ ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(54) СПОСОБ ИЗГОТОНОВЫХ ПОКРЫТИЙНИЯ В ОФТАЛЬМОЛО. Изобретение относится к офтальмологии, а именно к коллагенопластике, и может быть использовано для повышения качества хирургического лечения врожденной и при.обретенной патологии зрения.Цель изобретения - повышение выхода и чистоты целевого продукта.Способ осуществляют следующим образом,Склеру глаз сельскохозяйственных животныхтщательно очищает от внутренних оболочек, остатков коньюнктивы, мышц и проч. и выделяют строму, которую нарезают небольшими кусочками. Навеску ткани промывают дистиллированной водой до полного удаления механических примесей и крови, переносят в колбу и заливают 10- ным раствором едкого натра в насыщенном растворе сернокислого натрия (из расчета 500 мл раствор на 10 г ткани) на 48 ч при 18 С. Раствор сливают и проводят нейтрализацию ткани до рН 6,0 - 7,0, перемешивая ее в 2(,-ном растворе борной кислоты и аюА 61 К 37/12//А 61 Р 9(57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано для изготовления коллагеновых покрытий, используемых в офтальмологии. Цель изобретения - повышение выхода и чистоты целевого продукта.Для этого из склеры глаз выделяют строму.Из нее получают раствор коллагена, кото. рый Фильтруют через стеклянный фильтрЗатем проводят изоэлектрическое осаждение коллагена. Полученную смесь диспергируют, а целевой продукт отделяют от низкомолекулярных примесей ультрафильтрацией дисперсии.,неоднократно меняя раствор. Ткань промывают дистиллированной водой до полного Я удаления иона сульфата в промывной жидкости и заливают 1 М раствором уксусной кислоты из такого расчета, чтобы конечная ъ концентрация белка в растворе составляла. сЦ; Массу перемешивают и оставляют в хо- ъ вадильнике на 1-3 сут при 4 С. Массу гомо-.генизируют, центрифугируютмин при 2000 об/мин и оставляют на 1 сут при 4 С, .Полученный раствор фильтруют через стеклянный фильтр. Для изменения конформации макрочастиц в полидисперсной системе и снижения величин вязкости раствора кол,. лагена проводят изоэлектрическое осаждейие коллагена в пределах рН 4,2-8,6, что значителько облегчает дальнейшую очистку коллагена от низкомолекулярных примесей, : Для этого к раствору коллагена в 0,25 М уксусной кислоте добавляют эквивалентное .количество едкого натра в форме 1-1 00-ного раствора едкого натра. С помощью диспергатора при скорости вращения ротора,10000-20000 об/мин. в течение 6-3 минполучают гомогенную дисперсную системус размером частиц коллагена в дисперснойфазе 5-25 мкм.Данная операция необходима, так какулучшает условия очистки и повышает степень очистки эа счет того, что все частицыдисперсной фазы имеют одинаковую поверхность и равномерно распределяются в объеме дисперсной среды,Полученную дисперсию коллагена разбавляют солевыми растворами или буферными смесями с низкой ионной иглой (0,002М) до концентрации,0,1-0,2 вес.7 ь, снижая,таким образом, возможность ассоциациимакрочастиц и повышая эффективность очистки. Разбавленную дисперсию подают поддавлением для циркуляции в замкнутую си,стему, включающую трубки диаметром 2-3мм,стенки которыхпредставляют собой полупроницаемую мембрану, Все, молекулы,мол. масса которых меньше 10000 дальтон,проходят через стенки и удаляются с потоком фильтрата.Непрерывная циркуляция дисперсии всистеме обеспечивает постоянное переме. шивание дисперсии вдоль рабочей поверх. ности ультрафильтрационной мембраны.Очистка и концентрирование дисперсииколлагена идут эа счет ультрафильтрации,через полупроницаемую мембрану (стенкатрубы) Циркуляцию и перепад давления поразные стороны мембраны обеспечиваетперистальтический насос. Давление навнутреннюю .(рабочую) поверхность мембраны составляет 0,7 кг/см в начале цикла иг1,8 кг/см в конце цикла. Скорость циркуляции 1.8 л/мин в начале и 0,3 д/мин в концецикла. Очистку и концентрирование завершают при концентрации коллагена в дисперсии 0,65-0,75 вес, .П р и м е р 1, 20 г очищенной и нарезанной стромы склеры заливают 1 л 10%-ногораствора едкого натра в насыщенном растворе сернокислого натра и оставляют на 48ч при 15 - 18 С. Раствор сливают и проводятнейтрализацию ткани до рН 6,0 - 7,0, непрерывно перемешивая на магнитной мешалкев 20 -ном растворе борной кислоты.(времянейтрализации около 2 ч, общий обьем 20 ного раствора борной кислоты около 4 л).Ткань тщательйо промывают дистиллированной водой при осторожном непрерывном перемешивании до полного удалениясульфатиона из промывной жидкости (время промывки около 2 ч, общий обьем дистиллированной. воды около 5 л). Кполученному объему обводненной тканидобавляют равный обьем 0,5 М уксусной кислоты, перемешивают и оставляют на 1 сут при 4 С. Массу гомогениэируют, центрифугируют ЗО мин при 2000 об/мин, и оставляют на 3 сут при 4 С, Готовят 1-ный растворколлагена в.0,25 М уксусной кислоте. Пол 5 ученный раствор фильтруют через стеклянный фильтр,К 200 мл полученного раствора добавляют 1 г едкого натра в форме 1 - 10%-ногораствора едкого натра, интенсивно переме 10 шивая раствор коллагена после добавлениякаждой порции раствора щелочи. С помощью диспергатора при скорости вращения ротора 20000 об/мин в течение 3 минполучают гомогенную дисперсную систему15 рН 4,2 с размером частиц коллагена в дисперсной фазе 5 мкм, Полученную дисперсию разбавляют 0,002 М буфернойсмесью рН 5,4-5,6 до 0,1-0,2 вес;коллаге-.на, еще раз диспергируют 3 мин при 2000020 об/мин и подают для циркуляции в систему,выключающую сосуд, перистальтическийнасос, систему трубок диаметром 2-3 мм,.стенки которых являются полупроницаемоймембраной, Перистальтический насос обес 25 печивает начальную скорость циркуляциидисперсии коллагена в системе 1,8 л/минпри начальном давлении на внутреннюю(рабочую) поверхность полупроницаемыхтрубок в 0,7 кг/смг. По мере концентрирова 30 ния дисперсии скорость ее циркуляции снижается до 0,3 л/мин, а давление на рабочуюповерхность полупроницаемых трубок возрастает до 1,8 кг/см .2Ультрафильтрацию заканчивают при35 концентрации коллагена в дисперсии 0,75вес о Далее процесс идет в соответствии спрототипом: полученную дисперсию центрифугируют 15 мин при 1000 об/мин,40 разливают на матрицы, повторяющие,сферический контур переднего отрезка глаза,проводят воздушную сушку в пылезащитном шкафу 48 ч при 15 С и относительнойвлажности воздуха 40-50, Готовые изде 45 лия подвергают радиационной стерилизации в у-лучах при дозе 25 кГрей и мощности5 кГрей/ч, Стерильность материала под-.тверждают контрольным бактериологическим исследованием готовых изделий.50 Кислотно-щелочное состояние готовых иэделий определяют контрольной рН-метриейводной вытяжки навески готовых иэделий,Значение рй изделий из данного варианта5,4. Количество низкомолекулярных приме 55сей определяют по формуле ф 100, гдеЬМЬ М - изменение массы готовых изделийотносительно их первоначальной массы М 1. после промывки их в сверхчистой воде, Со1711897 Составитель СгБыков Редактор И.Касандрг .Техред М,Моргентал Корректор С.ШевкунЗаказ 485 Тираж .. ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж;, Раушская наб 4/5ь Произаодстаенно.издательские комбинат Патент.", г. ужгород, ул,Гагарина, 101 держание низкомолекулярных примесей в готовом изделии для данного варианта составляет 0,9.П р и м е р 2. Аналогичен примеру 1, за исключением того, что к 200 мл 1-ного раствора коллагена в 0,25 М уксусной кислоте добавляют 1,5 г едкого натра в форме 1-10-ного раствора едкого натра. С помощью диспергатора при скорости вращения ротора 10000 об/мин в течение 6 мин получают гомогенную дисперсную систему рН 5 с размером частиц коллагена в дисперсной фазе 25 мкм. Полученную дисперсию разбавляют 0,002 М раствором ацетата натрия рН 7,2 до концентрации коллагена 0,1- 0.2 вес еще раз диспергируют при тех же условиях (6 мин, 10000 об/мин) подвергают ультрафильтрации до концентрации колла- гена в дисперсии не менее 0,65 вес, Ядалее аналогично примеру 1.Контрольная рН-метрия водной вытяжки навески готовых изделий показывает значение рН 6;8. Содержание низкомолекулярных примесей в готовых изделиях составляют 1-1,5;,П р и м е р 3; Аналогичен примеру 1, за исключением того, что к 200 мл 1 ф 4-ного раствора коллагена в 0.25 М уксуснойкислоте добавляют 2,5 г едкого натрия в форме 1-10 жного раствора едкого натра. С по-. мощью диспергатора при скорости вращения ротора 20000 об/мин в течение 3 мин получают гомогенную дисперсную систему рН 8,6 с размером частиц в дисперсной фазе 5-10 мкм. Полученную дисперсию разбавляют дистиллированной водой до концентрации коллагена 0,1-02 вес,оД, еще раз диспергируют при тех же условиях (3 мин, 20000 об/мин). Ультрафильтрацию проводят аналогиЧно примеру 1 до концентрации коллагена в дисперсии 0,65-0,75 вес. 7 ь. Далее к очищенной дисперсии коллагена до-. бавляют дексаэон из расчета 0,5 мг на . каждое изделие.-При формовании и сушке применяют вибрационное воздействие Ра, диационную стерилизацию готовых изделий проводят при -196 С при дозе у-излучения 25 кГрей и мощности 5 кГр/ч, Сохранность дексазона после стерилизацииопределяется на приборе изотахофор фир 5 мыКВ и составляет 98 ф от исходного ко- .личества, Контрольная рН-метрия воднойвытяжки навески. готовых изделий показывает значение рН 7,6Использование предлагаемого способа10 изготовления коллагеновых покрытий дляофтальмологии позволяет существенно повысить как выход целевого продукта. так и. степень очистки коллагена от низкомолекулярных примесей за счет последовательно 15 го использования в предлагаемом способеизоэлектрического осаждения коллагена,диспергирования, 8-10 кратного разбавления дисперсии коллагена, циркуляции иконцентрирования.дисперсии посредством20 ультрафильтрации, Скорость очистки возрастает в 5-6 раз, а эффективность очистки -в 5 раз по сравнению с прототипом,Формула изобретения 25 Способ изготовления коллагеновых покрытий для использования в офтальмологии, заключающийся в том, что иэ склеры глаз животных выделяют строму, промывают, обрабатывают щелочно-солевым рас твором, нейтрализуют, промывают,обрабатывают уксусной кислотой, гомогениэируют, центрифугируют, полученный раствор коллагена фильтруют через стеклянный фильтр, удаляют низкомолекуляр:ные примеси, повторно центрифугируют,раствор коллагена помещают в форму, высушивают, формуют и стерилизуют, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода и чистоты целевого продукта, после 40 получения фильтрации раствора коллагена и,фильтрации через стеклянный фильтр производят изоэлектрическое осаждение коллагена и диспергируют полученную смесь, а удаление низкомолекулярных примесей иэ дисперсии 45 производят путем ультрафильтрации.