Способ получения водорастворимых сорбентов для аффинного распределения ферментов

ют 2 кг зминопропилоного силохромаС(ТУ 6-09-10-1751-86, с содержанием аминогрупп 100 мкмоль/г),предварительно промытого 5 мМ натрий фос,5Фатным буфером рН 7,0. Суспензию перемешивают 1 ч при комнатной температуре и переносят на фильтр, Носительна фильтре промывают 10 л дистиллированной воды ипроизводное ПЭГ-Цибакрон голубой РЗС - А десорбируют с10 л 3 М раствора КС 1 и 10 л 4 М раствора моченины. Оба раствора объединяют и смесь экстрагируют с 6 л хлороформа. Органическую Фазу высушивают над безводным Иа 2 БО и хлороформудаляют выпариванием, Получают 34 гпроизводного ПЭГ 6000-Цибакрон голубой РЗС - А, Вьпход продукта 3,4 отвзятого для реакции количества ПЭГ.Содержание красителя 160 мкмоль/г,П р и м е р 2, Получение производного ПЭГ-красно-Фиолетовый 2 КТ1 кг ПЭГ 6000 (мол.м. 6000-7500,Серна ФРГ) растворяют В 1 л Воды 25добавляют 112 г ЙаОН, 48 г МаБО 4 иперемешивают до полного растворениявеществ. В реакционную смесь добавляют 33 г красителя активного красноФиолетоного 2 КГ и реакцию проводят втечение 7 ч при комнатной температуре,Полученную реакционную смесь растворяют в 30 л 2 М раствора КС 1, добавляют 600 мл 0,5 М раствораЫаНРО и экстрагируют с 15 л хлороФорма, Органическую фазу собирают,высушивают над безводным Ма БО,1 ихлороформ удаляют выпариванием, Остаток растворяют в 20 л 5 мМ натрий 40Фосфатного буфера с рН 7,0 и добавляют 1,5 кг аминопропилоного силохромаС(ТУ 6-09-10-1789-87) с высокимсодержанием аминогрупп 190 мкмоль/г,промытого 5 мИ натрий Фосфатным буфером рН 7,0, Суспензию перемешивают1 ч при комнатной температуре и переносят на фильтр, Носитель на фильтрепромывают 20 л дистиллированной водыи производное ПЭГ-красно-фиолетовый2 КТ десорбируют под действием 15 л, 3 М раствора КС 1, Раствор экстрагируют с 6 л хлороформа, органическую фаФу собирают, высушивают над безводнымИаБО, и хлороформ удаляют упаринанием. Получают 57 г производногоПЭГ 6000 красно-фиолетовый 2 КТ, Выходпродукта 5,7 . Содержание красителя146 мкмоль/г,П р и м е р 3. Получение производного ПЭГ-желтый снетопрочный 2 КТ.Реакцию присоединения красителя активного желтого снетопрочного 2 КТ к ПЭГ 6000 проводят аналогично примерам 1-2. Для очистки производного ПЭГ-желтый светопрочный 2 КТ в раствор вводят 2,5 кг аминопропилового силохрома Сс содержанием аминогрупп 80 мкмоль/г (ТУ 6-09-10-1751-86), адесорбцию производного ПЭГ-краситель проводят с 20 л 3 М раствора КС 1 и 10 л 4 М раствора мочевины. Получают 50 г производного ПЭГ 6000-желтый светопрочный 2 КТ. Выход 5 ., содержание красителя 177 мкмоль/г.П р и м е р 4. Получение производного ПЭГ-Процион голубой МХ-К.Производное ПЭГ 6000-Процион голубой МХ-К получают аналогично примеру 1. Выход продукта 12%, содержание красителя 205 мкмоль/г.Получение производных ПЭГ-краситель на основе полиэтиленгликоля ПЭГ 115 (мол.м. 5000, ТУ 6-14-826-72),П р и м е р 5. Получение производного ПЭГ 115-Цибакрон голубой РЗС - А.1 кг полиэтиленгликоля ПЭГ 115 растворяют н 1 л воды, добавляют МаОН 112 г, ИаБО 48 г и перемешивают до полного растворения веществ, В реакционную смесь добавляют 33 г активного красителя Цибакрон голубого РЗС - А и реакцию проводят н течение 7 ч при комнатной температуре.Полученную реакционную смесь растноряют в 30 л 2 М раствора КС 1, добавляют 600 мл 0,5 М раствора Иа 1 РО и экстрагируют с 15 л хлороформа. Органическую Фазу собирают, высушиваютнад безводным ЫаБО, и хлороформ удаляют упаринанием. Остаток растворяютв 20 л воды, добавляют 200 мл раствора 10 н. НС 1 до значения рН 3,03,5. В полученный раствор вводят2,5 кг аминопропилсилохрома С,и переносят на Фильтр, Носитель на фильтре промывают 1 О л дистиллированной воды, а производное ПЭГ-краситель десорбируют с 10 л 3 М раствора КС 1 и 10 л ацетона. Ацетоновую фазу упаривают досуха и сухой остаток раство/Формула ряют в растворе ПЭГ-краситель в 3 М КС 1, ПЭГ 115-Цибакрон голубой РЗС - А экс.рагируют с 6 л хлороформа, Органическую фазу высушивают над безвод"5 ным БаВО и хлороформ удаляют упари" ванием, Получают 65 г продукта, Выход 6,52, содержание красителя98 мкмоль/г.Аналогично примеру 5 получают про изводное ПЭГ 115-желтый светопрочный 2 КТ, Выход продукта 5,47., содержание красителя 155 мкмоль/г.Выход производных ПЭГ-краситель и содержание красителей в производных 15 представлены в таблице,изобретения а основе ПЭГ 15 На основе ПЭГ 6000 Пример о предлагаемомупособу Активный краситель о предлагаемопособу вестном особу Содержание Соцержаниекрасителя,мкмоль 7 г Содержаниекрасителя,.мкмоль/г красителямкмольlг 6,5 98 (пример 5)6,2 77 2,8 4,0 Цибакро Красно 7 14 летовый 2 128 5 елтый светопрочный Родион голубой НХ-Р расно-коричневый 2 6 12 205 О 5 6 24 8 214 ЗолотиЯркоо-жел 237 15 Ярко-к 9 НЕ цион красныицион голуба,0 205 10 6,7Оранже 40,0 олетов 02,0 13 4 елтый чный Составитель Т.ЧиликинаРедактор С.Патрушева Техред М.Дидык Корректор Л.Патай Заказ 4416 ТВНИИПИ Государственного113035,Подписи ажмитета посква, Жетиям при ГКНТ СССР4/ зобретениям и откр Раушская наб., д. атент", г.Ужгород, ул . Гагарина, 101 й комбин оизводственно-издател Таким образом, предложенный способ позволяет повысить выход целевого продукта в 1,2-2,2 раза. Аминопропильные силохромы полностью регенерируются в отличие от сорбентов прототипа,Способ получения водорастворимых сорбентов для аффинного распределения ферментов, включающий присоединение активного красителя к полиэтиленгликолю с последующей очисткой производного полиэтиленгликоля с красителем путем сорбции на анионообменнике, десорбции солевым раствором и выделения продукта экстракцией хлороформом, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, сорбцию производного полиэтиленгликоля с красителем проводят на аминопропильном силохроме с содержанием аминогрупп 80-190 мкмоль/г при соотношении 1,5-2,5 кг аминопропил 1 силохрома на 1 кг исходного полиэтиленгликоля, а десорбцию дополнительно ведут 4 М раствором мочевины или ацетона.