Способ диагностики рассеянного склероза

(71) Пермский государсцинский институт(5 б) Хондакариан О.А.Невский О.М, РассеянныиМедицина, 1987, с. 127 твенный медиыкова ин И.А з. М.: Завал склер РАССЕЯННОГ(57) Изобретение атно ся к меди Способ озом.Забиьца существляют следующ обпал 5 Хго рас для предупрежде Вводят боль 2,53-ного р 30 мин повт писа встр л яют д0,8-0,30 с,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной д агностике заболеваний, может быть использовано для распознавания рассеянного склероза (РС).Цель изобретения - повьппение то ности диагностики рассеянного скле рают 0,05-0,1 мл крови из больного РС в 0,05-0,1 млтвора цитрата натрия ния свертывания крови.ному подкожно 0,5 мл аствора резерпина.Через орно забирают кровь,какранее. После тщательногования пробирки в нее добавя дозирования эритроцитов мл дистиллированной воды н потом доливают до 9-10 мл,801640653 А 1 2цине, а именно к способам диагностики рассеянного склероза. Целью изобретения является повышение точности. Способ диагностики рассеянного склероза осуществляется путем забора крови у пациента до и через 30 мин после введения раствора резерпина и определения числа иммунных розеток лимфоцитов крови с эритроцитами барана, нагруженными серотонином в обеих пробах. При неизменном значении показателя по сравнению с исходным диагностируют рассеянный склероз.Точность диагностики повышается на 17 227 среды 199 для восстановления рН 7,0.Пробирки центрифугируют 5-10 мин при1500 об/мин, после чего надосадочнуюжидкость сливают, а осадок лейкоцитов ресуспендируют в 0,1-0,2 мл изотонического раствора хлорида натрияили среды 199, К полученной взвесидобавляют 0,1-0,2 мп 0,57-ной взвесиглютаризированных эритроцитов барана, нагруженных серотонином, смесьинкубируют 10-15 мин при +37,0-37,5 Спосле чего центрифугируют при1500 об/мин 5-10 мин. Надосадочнуюжидкость удаляют пипеткой, осадокресуспендируют в капле любой интактной сыворотки (бычьей, лошадиной,человеческой). Из полученной суспензия клеток делают мазок фиксируютв метиловом или этиловом спирте,высушивают, окрашивают по РомановскомуГимза. Под микроскопом рассматривают 100 лимфоцитов, отмечая среди нихчисло (Х) клеток, фиксировавших насебе три и более эритроцитов (РОК).Зная содержание в крови больного лимфоцитов (7) и общее количество лейкоцитов, высчитывают абсолютное содержание РОК в 1 мл крови.Обработку эритроцитов барана вглютаровом альдегиде производят следующим образом: соединяют 1 мл 57.-ной Овзвеси тщательно отмытых нативншхбараньих эритроцитов с 0,257.-нымраствором глютарового альдегида в соотношении 1:1Смесь выдерживают при37,0 С в течение 15 мин, после чего 5эритроциты дважды отмывают от альдегида забуференным изотоническим раствором хлорида натрия рН 7,2 и донодят до первоначального объема этимже раствором (57-ная взвесь). Для 20сенсибилизации эритроцитов готовятраствор серотонина с концентрацией0,1 мг/мл на забуференном физиологическом растворе рН 6,4. 1 мл 57-нойвзвеси глютаризированных эритроцитов центрифугируют, надосадочную жидкость удаляют, а к осадку эритроцитов приливают 1 мл раствора серотонина. Смесь тщательно встряхивают ивьдерживают при комнатной температу-,30ре 25-30 мин, после чего эритроцитыдважды отмывают центрифугированиемпри 1500 об/мин в течение 10 минизотоническим раствором хлорида натрия и им же доводят до 0,57-ной35взвеси.Способ иллюстрируется следующимипримерами,П р и м е р 1 . Больной Ш.,ЗЗ года,повторно поступил в клинику нервных 40болезней с жалобами на слабость вногах, пошатывание при ходьбе, головокружение, нарушение функции тазовых органов. Из анамнеза известно,что болен с 18 лет, течение заболевания ремитирующее, обострения отмечались в 1976, 1979, 1982, 1986 гг.При осмотре отмечено: патологиисо стороны внутренних органов нет,пульс 68 уд. в 1 мин, АД 120/80 ммрт.ст.Неврологически: горизонтальныйнистагм в обе стороны, речь несколько дизартрична. Спастический тетрапаре с патологическими рефлексами.Брюшные рефлексы не вызываютея. Выраженная статическая и динамическаяатаксия. На обзорной краниограммепатологии нет. Глазное дно: деколорация височных половин дисков зрительных нервов. Установлен диагноз: рассеянный склероз, цереброспинальная форма.Клинический диагноз рассеянного склероза подтвержден иммунологически. Резерпиновая проба положительная: число серотониновых розеток (97) практически не увеличилось (27) после введения резерпина. Это свидетельствует о том, что иммунная система не дала обычной, характерной для здоровых лиц реакции на эндогенный серотонин в виде увеличения числа иммунных розеток.П р и м е р 2. Больной Б 27 лет, поступил в клинику нервных болезней впервые 7.7,37 с жалобами на снижение зрения, слабость в правой ноге, онемение пальцев рук, шаткую походку, В январе 1987 г, лечился в клинике глазных болезней с диагнозом ретробульбарный неврит. Спустя три недели зрение частично восстановилось, ио присоединилась слабость в ногах, более выраженная в правой, пошатывание при ходьбе. При осмотре: патологии со стороны внутренних органов не выявлено; пульс 72 уд. в 1 мин, АД 120/75 мм рт,ст. Неврологически: больной эйфоричен, критика снижена. Походка атактическая, сила в ногах снижена - 3,5 балла, Сухожильные рефлексы оживлены справа выше, чем слева. Патологические рефлексы с двух сторон. Брюшные рефлексы не вызываются. Статическая и динамическая атаксия. На краниограмме патологии нет. Глазное дно: побледнение височных половин дисков зрительных нервов. Установлен диагноз: рассеянный склероз, цереброспинальная форма, дебют, первая атака. Клинический диагноз подтвержден иммунологически. Резерпиновая проба положительна: число серотониновьтх розеток (77) не увеличилось после введения резерпина (27) Иммунологический диагноз; рассеянный склероз. Цроведение резерпиновой пробы у 17 больных рассеянным склерозом (цереброспинальная и стволово-мозжечковая формы) показало, что у всех введение резерпина не увеличило число иммунных к серотонину РОК: до введения ,среднее 135+3, после введения 89,7+ + 13,7, Р(0,01,1640 Таким образом, точность диагностики по предлагаемому способу достигала 1007, в то время как точность диагностики по аутоантителам к ткани мозга составляла 77-827. Составитель И, Башкаев Техред С,Мигунова.(Редактор Е.Хорина Корректор Л.Бескид Подписное Тираж 41 Заказ 1264 ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, 3-35, Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г,ужгород, ул. 1 агарина, 101 Постановка резерпиновой .пробы напациентах с другими видами пораженийнервной системы подтвердила специфичность способа,РОК до введения реэерпина 9,1+0,9,после введения 44,3+2,7, Р(0,01.Здоровые доноры (20 человек) реагировали на введение резерпина резким увеличением в крови числа иммунных к серотонину РОК,7.: до введения6,7 +0,3, после введения резерпина37,3 + 2,1. 653 6Формула изобретениямиСпособ диагностики рассеянногосклероза путем забора крови с последующим ее иммунологическим анализом, отличающийся. тем,что, с целью повышения точности диаг-.ностики, после забора крови пациенту вводят резерпин и через 30 чиносуществляют повторный забор крови,.к обеим пробам добавляют 0,1-д,2 мп .0,57-ной суспензии эритроцитов барана, нагруженных серотонином,инкубируют смесь в течение 10-15 мин прио37,С, подсчитывают в мазке число розеткообразующих лимфоцитов и при отсутствии достоверного увеличения показателя между обеими пробами диагностируют рассеянный склероз.