Способ получения сыворотки крови животных для культивирования клеток

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИН 9) 1) 51)5 ГОСУДАРСТВЕННЫПО ИЗОБРЕТЕНИЯМПРИ ГКНТ СССР ОМИТЕТ ОТНРЫТИ: 1(ю( %( ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН тельский Казань К.С, Хаететыно Методичеснному полу тных для ирусолодом цент ОРОТКИ КРООВАНИЯ КЛР-( ВИ ЖИТОК(57 Изобретение относится быть нарнои исполь робиологии и может но в научно-исслед ательсях ных ветериет быть(елевого прод вительности к вирусам.ть способа сво тделение сыворо ементов крови пЗатеи холодну ук ул и чувс еток Сущи ится к токи от Форму, что о менных зл при 6-8 Г зводятыворотку А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(56) Хаертынов С.Х. и др,кие рекомендации по ускорчению сыворотки крови живокультивирования клеток игических исследований метрифугирования. И 1985,(54) СПОСОБ ПЙ 1 УЧЕНИЯ СЫВВОТНЫХ ДЛЯ КУЛЬТИВИР производственных лабо ьтивировании клеток жи Изобретение относитсянарной микробиологии и моиспользовано в научно-сс ких и производственных (,( 2вирусов, Цель изобретения - снижение иоксичности целевого продукта и повышение чувствительности клеток к вирусам., Сущность изобретения заключается в удалении взвешенных Форменных элементах крови путем первичного расслоения препарата крови животного при 6-8 Г с последующей фильтрацией через пластины с размерами пор 0,85 - 0,95 мкм и вторичного расслоения полученной сыворотки посредством замоо раживания ее при минус 30-40 Г и размораживании при 40-45 Г, Отделяют верхний слой сыворотки и стерилиэуют пропусканием его через фильтр с размерами пор 0,22 мк при комнатной температуре, Применение данной сыворотки повьппает эффективность культивирования клеток и их чувствительность к вирусам, т.кона содержит меньше общего белка, альбуминов, гамма-глобулинов, 2 табл. без предварительного подогрева дляудаления взвешенных форменных элементов и выпавших криоглобулинов подвергают Фильтрации через пластины с размерами пор 0,85-0,95 мкм. В последующем, с целью расслоения на фракции,полученную сыворотку в прозрачномцилиндрической Формы сосуде эаморажиовают при минус 30-40 С с последующимразмораживанием при 40-45 Г, Объемсосуда зависит от потребности в качественной сыворотке,В результате замораживания и оттаивания сыворотка расслаивается. Приэтом гемоглобиц и другие пигменты, атдкжс. бесконье фракции с высокой молеку;ярцой магсоц, такие кдк гамма-глобуицы, располагаются н цижцем, при 5 легдющем ко дну сосуда, слое, что позволяет отделить их от вгрхшх слоев, Отделение ижего слоя производят путем сливдция в с.учае использованиядля замораживания сыворотки госуда типа делите.ьцой воронки, Отделенный нижний слой, согтавляющий от общей массы сыворотки 5-10 Х после определенной обработки может быть применен при культивировании клеток не для вирусологцческих исследований илц испол,- зован в качестве концентрированногопрепарата гдммд-глобулицон, Остявшиеся верхние слои перелеппвдот и после стерилизуощей фильтрации используот по ндзцдченца,П р и и е р, Кровь берут при помощи иглы пли полого цожа из вени илисердца, сполау здкрытуо систему, исключдояуо коцтдкт с внешним ицфици ронялл ноздухол, Объем сосуда для взятия крови и ее количество определяются потребцостью в сыворотке, Отдеение сыворотки методом отстоя производят при 7 С. Отстоявщуося сыворотку собираот по закрытой системе н сосуд-сборцик под отрицательным давлением (02 дтл. Сбор сыворотки производят специаьной стеклянной трубкой диаметром0 мм, изогнутой гд котине под угоы 90 , открытый конец прикрыт стеклянной реиетчдтой пластиной с размером отверстий 0,5-1,0 мм, Гдгодаря этому ссос гьворотки н трубку происходит г.верху, а це снизу со40 стороны г.густкд, Такое рдсполс 1 жециезасагьдсщего отверстия предотвращаетпоступление мелких сгустков и осевшихна понерхцогти сгустка форменныхэлементов в трубку для отсоса сыворот ки,Гобрдцную гыноротку без подогрева,с целью очистки от взнеецньх форменных элементов, фильтруют через пдгтины с размером пор 085-095 лкм,После этого сыворотку подвергаот рдс 50слоецио путем замораживания при - 15 Гос последуоЧим оттдиндцием при 4:. Г,о Образуооийся при зтом нижний темтпйглой, содерждщи 1 рдз:ичце пигментыи дммд - л обул цьудаляот а Вьпе еждщие слои после еремешивания подвергают стерилизукжеп фильтрации сиспользованием пластин с размеромпор 0,22 мкм,11 оучеццдя сыворотка отличаетсяот изнестцой цо физико-химческил показателям, меньшей токсичностью дляклеток и лучшей чувствительностью книрусам клеток, культивированных нсреде с данной сывороткой,Гравииельные данные по ростовымкачествам сывороток крови приведен н табл.1.11 спользовацие способа позволяетбез применения химических препаратрвполучать сыворотку крови животных;чя культивирования клеток с улучшенными качествами, близкой по свойствамк дефицитной и дорогостоящей эмбриональной сьноротке. Применение даннойсыворотки повышает эффективность вирусолог ических исследований, н том числе чувствительность клеток к вирусами у ск р ет пх количественное накопле.е ц клетках за счет того, что сыворотка, полученная по предложенному способу, содержит меньше общего белка, альбуминов, гаммя-глобулинов,Чувствительность клеток к вирусам представлена в табл,2.Формула изобретения Способ получеция сыворотки крови.животных для культивирования клеток,включдющий взятие крови, отделениесьворотки и стерилизацию при комнатной температуре через фильтры с размером пор 0,22 мкм, о т л и ч а ю -щ и й с я тем, что, с целью снижениятоксичности целевого продукта и повышения чувствительности клеток к вирусам, отделение сыворотки проводят при6-8 С, затем пропускают ее черезфильтры с рдэмером пор 0,85-095 мкм,рдгсляцвакт посредством замораживанияпри мицус 30-40 С и оттаинания прио,40-45 С и стерилизации подвергают образовавшийся после расслоения верхнийслой сыворотки,1544800 Таблица Клетки Индекс пролиферацпи изучаемых сыворо- ток Конт- рольИзвестПредло -жепная Нижнийслой ная ная 1 ПЪ) 2 ВНК4 1,5 22,5 3,75 Нет роста1,5 И р и м е ч а н и е. контрольная сывороткасыворотка хорошего качества;опытная сыворотка - сыворотка, обладающая токсичностью,Табл ица 2 Чувствительность клеКлетки Вирусы ток к вирусам в лгТЦД. /мл сыворотки Предложенный способ Известныйспособ И.3 К ПИЗС И р и м е ч а н и е: в опытах для культивирования клеток использовался 0,57,-ный раствор ГЛАс сывороткой 102-ной кон- центрации Составитель А,. МаныкинТехред М.Дидык Корректор ( Яекмар Редактор В, Данко Заказ 471 тираж 479 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 Ринотрахеита крупного рогатого скота Болезни Ауески 5,15 Ф 0,2 6,4610,16,0 +0,15 7,210,2