Способ получения гонадотропина из сыворотки крови жеребых кобыл

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГОНАДОТРОПИНА ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЖЕРЕБЫХ КОБЫЛ, включающий внесение в емкость сыворотки крови жеребых кобыл, введение в сыворотку при постоянном перемешивании охлажденного этилового спирта, доведение в смеси pH до 5,95 - 6,05, выдерживание смеси для осаждения балластных белков, отделение осадка балластных белков центрифугированием, сбор и охлаждение центрифугата, введение в центрифугат охлажденного этилового спирта, осаждение гонадотропина и отделение осадка гонадотропина центрифугированием, отличающийся тем, что, с целью снижения потерь гонадотропина и ускорения процесса его получения, после внесения в емкость сыворотку жеребых кобыл охлаждают до 10 - 12^oС, этиловый спирт охлаждают до 10 - 12^oС, распыляют и добавляют к сыворотке жеребых кобыл в виде аэрозоля с диаметром капелек 0,5 - 1,5 мм с расходом 4 - 5 л/мин в соотношении 1,2 : 1 - 1,3 : 1, выдерживают смесь для осаждения балластных белков в течение 30 - 40 мин, отделяют осадок балластных белков центрифугированием при факторе разделения 9000 - 9500 и скорости протока через центрифугу 3 - 4 л/мин, введение в центрифугат этилового спирта осуществляют при его температуре 10 - 12^oС с расходом 4 - 5 л/мин в соотношении 1,1 : 1 - 1,15 : 1, осаждение гонадотропина проводят в течение 6 - 8 ч, а отделение осадка гонадотропина центрифугированием осуществляют при факторе разделения 9000 - 9500 и скорости протока через центрифугу 1,5 - 2 л/мин.

Изобретение относится к биологической промышленности и может быть использовано при производстве гонадотропного препарата из сыворотки крови жеребых кобыл.
Целью изобретения является снижение потерь гонадотропина и ускорение процесса его получения.
Схема осуществления способа показана на чертеже.
Схема включает емкость 1 для сыворотки крови жеребых кобыл (СЖК) объемом 250-630 л с якорной мешалкой 2 с приводом мешалки 3, создающим скорость вращения мешалки 2 в пределах 30-40 об/мин, систему 4 охлаждения емкости 1. Емкость 1 снабжена распылителем 5 с отверстиями, обеспечивающими распыление жидкости капельками диаметром 0,5-1,5 мм при расходе ее 4-5 л/мин. К распылителю 5 трубопроводом 6 подсоединена емкость 7 для этилового спирта. Выходной патрубок емкости 1 подсоединен к проточной центрифуге 8, которая может обеспечить фактор разделения 9000-9500 при скорости протока 1,5-4 л/мин. Центрифугат из центрифуги 8 собирают в емкости 9.
П р и м е р 1. Сыворотку крови жеребых кобыл (СЖК) с активностью 160 м. е. /мл в количестве 100 л заливают в реактор с якорной мешалкой объемом 250 л и охлаждают до 10^оС. Включают привод и устанавливают скорость вращения мешалки 30 об/мин. Охлаждают этиловый спирт до 10^оС. Затем спирт под давлением подают на распылитель и в распыленном виде (аэрозоль) над поверхностью вводят его в СЖК. Диаметр капелек аэрозоль составляет 0,5 мм. Скорость распыления 4 л/мин. Всего распыляют 120 л этанола (соотношение объема этанола и объема СЖК 1,2:1).
В полученной смеси устанавливают рН 5,95-6,05 и выдерживают 30 мин для осаждения балластных белков. Балластные белки выделяют на центрифуге при факторе разделения 9000 и скорости протока 3 л/мин. Балластные белки отбрасывают, а центрифугат собирают в емкости и перекачивают в реактор, в котором осуществляют осаждение гонадотропина. Центрифугат охлаждают до 10^оС и распыляют над его поверхностью охлажденный до 10^оС этиловый спирт капельками аэрозоля диаметром 0,5 мм и скоростью распыления 4 л/мин. Всего распыляют 187 л этилового спирта (соотношение объема этилового спирта и объема центрифугата 1,1:1).
Смесь выдерживают для осаждения гонадотропина 6 ч. Осадок гонадотропина отделяют центрифугированием при факторе разделения 9000 и скорости протока 1,5 л/мин. Затем осадок гонадотропина в количестве 30 г выгружают из центрифуги. Контрольный опыт ведут по способу-прототипу.
Проверка полученного по предлагаемому способу гонадотропина дала следующие результаты:
Выход по актив- ности, % 84,,4
Активность, м.е./мг белка 450
Проверка гонадотропина полученного по способу-прототипу показала следующее:
Выход по актив- ности, % 75,8
Активность, м.е./мг белка 400
П р и м е р ы 2-15. Осуществляют выделение гонадотропина из СЖК по предлагаемому способу. Опыты проводят аналогично изложенному в примере 1. Параметры и режимы, а также результаты приведены в таблице.
П р и м е р ы 1, 2, и 3 осуществляют на режимах, указанных в формуле изобретения. Пример 2 показывает оптимальную эффективность получения гонадотропина.
В примерах 4-15 осуществляют проверку получения гонадотропина при режимах, выходящих за пределы, указанные в формуле изобретения.
В примере 4 при поддержании оптимальных режимов диаметр капелек аэрозоля этилового спирта при распылении равнялся 3 мм ( в формуле изобретения 0,5-1,5 мм), а также увеличили расход спирта до 8 л/мин (в формуле изобретения 4-5 л/мин).
Выход гонадотропина и его активность значительно понизились (см. таблицу).
В примере 5 увеличили число оборотов мешалки до 70 об/мин (в формуле изобретения 30-40 об/мин) и получили снижение выхода и активности гонадотропина.
В примере 6 снизили число оборотов мешалки до 20 об./мин (в формуле изобретения 30-40 об/мин). Выход и активность гонадотропина понизились.
В примере 7 повысили температуру СЖК и спирта до 20^оС (в формуле изобретения 10-12^оС). Снизился выход гонадотропина и его активность.
В примере 8 понизили температуру СЖК и этилового спирта до 4^оС (в формуле изобретения 10-12^оС). Выход гонадотропина понизился.
В примере 9 увеличили время осаждения балластных белков до 60 мин (формула изобретения 30-40 мин). Выход гонадотропина понизился.
В примере 10 уменьшили время осаждения балластных белков до 20 мин (формула изобретения 30-40 мин). Снизилась активность гонадотропина.
В примере 11 уменьшили фактор разделения при центрифугировании до 8000 (формула изобретения 9000-9500). Понизился выход гонадотропина и его активность.
В примере 12 уменьшили соотношение объемов этилового спирта и СЖК при осаждении балластных белков до 1,1:1 (формула изобретения 1,2:1-1,3:1). Снизилась активность гонадотропина и его выход.
В примере 13 увеличили соотношение объемов этилового спирта и СЖК при осаждении балластных белков до 1,4:1 (в формуле изобретения 1,2:1-1,3:1) и при осаждении - до 1,2:1 (в формуле изобретения 1,1:1-1,15:1). Получили понижение выхода гонадотропина.
В примере 14 увеличили скорость протока смеси через центрифугу при осаждении балластных белков до 5 л/мин (в формуле изобретения 3-4 л/мин). Уменьшился выход гонадотропина и его активность.
В примере 15 увеличили скорость протока смеси через центрифугу при осаждении гонадотропина до 3 л/мин (в формуле изобретения 1,5-2 л/мин). Снизились выход гонадотропина и его активность.
В контрольном опыте, проведенном в лабораторных условиях, получен выход гонадотропина на 10% меньше, чем в предлагаемом, проводимом на промышленных установках.
Изобретение относится к биологической промышленности. Целью изобретения является снижение потерь гонадотропина и ускорение процесса его получения. В емкость 1 вносят сыворотку крови жеребых кобыл и охлаждают до 10-12°С. Включают привод 3 и приводят во вращение якорную мешалку 2. Скорость вращения мешалки 2 30-40 об/мин. Из емкости 7 по трубопроводу 6 на распылитель 5 под давлением подают этиловый спирт, охлажденный до 10-12°С, и распыляют над поверхностью СЖК в виде аэрозоля с капельками диаметром 0,5-1,5 мм с расходом 4-5 л/мин. Соотношение объема распыленного этилового спирта и СЖК составляет 1,2:1-1,3:1. В полученной смеси устанавливают pH 5,95-6,05 и выдерживают ее в течение 30-40 мин для осаждения балластных белков. Через выходной патрубок емкости 1 смесь подают в центрифугу 8 и центрифугируют при факторе разделения 9000-9500 и скорости протека 3-4 л/мин. Центрифугат собирают в емкости 9. Центрифугат из емкости 9 подают в емкость 1, где осуществляют осаждение гонадотропина. К объему центрифугата добавляют объем распыленного этилового спирта в соотношении 1,1:1-1,15:1. Смесь выдерживают 6-8 ч. При этом выпадает в осадок гонадотропин. 1 ил., 1 табл.