Способ получения гибридных культур грибов

(54) С 110 ГИБ ПТУР ГРИБОВ(57) Изобретениетехнологии, н час ДН 111 Х К к биолиянию носитс м. Л, 11 рд бак мии ности Н,Н, Ну 0 брдзцо )1 ждфдро 6:11,522 Г ГЕПСК Г 11 1, ),1(убидз ва, В, нд цЛ ;58 08 спользоозяйстет быт ан,илзгтон у и мн медицине,иелью изобретие выхода и о емина, Кие сон (088.8) а(1975,ельском ия янл цо Л,5 ется и ве,вьппе у 1,табильности гиббон, Способ состо идцых культур гри,)-,.,арар. ного и г;.г; аи);1 ил а сть м, что ир ит в роди обрд раци концент-10 мин оницом батынают дельт 0,01-0,02 Х н течение ос умень(пает стабилов,дбот я к биотехно ИзобретециОГИИ Д ИМЕГ относитО К СГГОС оила у получениякоторый ри получениза- огияют следую тур гриб ользовдц грибов с гибридцых куль может быть иси заранее икробиол 1 р омьппл е дммОВ снойст н меди оных ш анными дми ческой и сель ицско яйстне, тения Г гти гибри м х б вьппение вы ных культу 1 ель дд и стабильн грибов,Сио то перед дилиян рон" ельскдцым ом57 и центраНри коность екти сниьтур жаетс ири к стаби етк Х пад При аетсяетеньгриб хран гаре р 1, Культура геева 1 Цч 944, но-дестрозцом ПримесйоГ)агтпакартоФель шем нр Фектин время р +л4 ", СО(03 СОВЕТСКИ)(ф . - СОЦИАЛИСТИЧЕСИ)(:с, - РЕСПУБЛИК ОСУДАРСТБЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИПРИ П(НТ СССР ОПИСАНИ К АВТОРСКОМУ соб состоит в том, ч ем иротоиласты одног их штдммов обрдбатын гликозидом дельтонин ции 0,027 н течение нцентрдции ниже 0,0 слияния уменьшается выход гибридных ку ццецтрациц вьппе 0,0 ьцость иротоилдг.тон меци обрдботк(Г сциж ость слиянии, больп льских штаммов перед слияние Гиособ осуществи щимобразом,Протопласты грибов получают с помощью литической смеси ферментов,К сусиензии протоиластов одного нэштдммон добавляют дельтонин до концентрации 0,01-0,02 Х, выдерживают5-10 мин ири комнатной температуреГлияцие протопластов осуществляютв буферном растворе, содержащем полиэтиленгликоль и стабилизирующие вещества. Через определенные промежут 1ки времени под микроскопом отбираютгибридные культуры и помещают на селективцую среду нырапц(нацияПолученные гибриды стабильны и ири культивировании не распадаются на родительсГстстстител Б, ДемкинТехред Г 1. стык Корректор С, Черни Реддктлр Н, Ястяг Заказ -71 Тистж 88 ПодписноеР"ИИПИ ос.удстрстнеццо с ксцят:т, ц1 с ретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113 с.)Г 1 тск;т, сс- , аупт. кдя цдб., д, 4/51 рли гогстт тссО-т д,ттт:с к Яо г" с а т Патент, г, Ужт лрод, ул, Гагарина, 1)1 Иск сят Готов т ц Гити;ин сттй ттде. 1)ср;ттиптиг ведут т клпбдх )р - лгцмРтс.ст цэт ИРрРИРпинстции тт; ГттегР 1 дгц цри .10 т;, После 2 Г)-чдслнгл 1 стд мицелии лтделянт Ьистьтрсцдццем, днаж ги ц р лмьтн сттст дистис Ни)тдтттЙ водой, здтем 0,05 Г 1 сЬОСдттп,пт буфером с рН б,5, слдс.рждщим 0,7 Г 11:41 (лсмлтцческий стстбиттдтлр ) с гтрец тсмитнтцгульЬдт н клнцецтрдцтти 250 мкг/мл (буфер Л), 100 мг цромьттого мицелия (гтст сыр му весусусттендирутпт н т мл буЬерд Л, слдерждщегст также 50 мг лцирунппей смеси, сстоящей из техтптчегких фермецтцьгх препаратов целллнирцдцнд и пектофледица, взятых в сллтцсппеции 1:1, Плгпе часовой ицкубдции получетцппе протоц тдс тОтгегтятпт От церд рутпеццых клеток ЬттптттЯдцттеьт через стекпяц - цый си.тт,тр, ттрлмындют несколько раз буфером г. ц коццецтрцруспт фильтр;тт цецтрттЬуги 1 лндцием при 1000 Г, н течение 15 ытттт, 25Таким же лбрд.лм получают протоплдсть из О чдГО 30 О мицелия Гр)тбов.г г Гтагтсгс ста;т,е с)з унлн 1 ог 1.тпт Г 107 т. К коццецтрирондццлй суспензии нрлто- ПЛдСТОВ ТГ ;1 О 1".Г.а ГОЕ;-,Е 1 дОбдНПЯЮТг,т дельтотсиц до концентрации О,ц 1/, нттдержттвают 5 ыттц, цецтрифугиру т цри 1000 об,/ми;т, Концентрировдцнук суспению прлтлплдстлн разводят О,Г)3 Г трттс;1 буферцым рдстнлром с рП 8,0, содерждтпим 0 02 Г 1 Г;д;1 и Г),7 Г 1 1 П 1 С,"1, до коццецтрдцци протоплдстон 10 мл, К 3 мл ттлхтучРттгтли суГпензии длбавзтттпттг 7 250 мкг стрецтомитцтцсульфатд, 2 эс. толитцлгттгликоя и 0,2 мл гус ттеции40 протлп.ттдстотТг Г.1:лсегтпа гоезе 1 (О кстцечнгт) концентрации 10 протоцлдстлн н ьтл Гистсму ицкубируют цри 30 Г, цдблптддя цод микроскопом а процессом слияния протоцластлн, Полученцьте фуздцты (прлдукть Слиягтия, от) бирдют плд митсрлскоцлм и ньтсендтст нд кдртлфет Нл-Гсзтсстрстзттутс среду, Через цегкол к дней ккстити, млпптл ттцег. -ки .тцспятРГЛ с)т )гитРттГктх пттдм ы 1 ньтГ е ттт ц псле,Он дтельньтм рдзбднлецием цллучдтпт млцльлетку, Нд остсстР млцлклеткц ныгендют кспстнттю,Плуч еццдт ГибригцсЯ культура ЯнлЯется стдбильцой (хранится более года 1и жизттеспстстбттстт, Лубинцле культивирование ведут нд средах Г 1 дндельга,Киркд,Исследование морфологии гибридных клеток снидетельстнует об осуптестнлеции межродового слияния мицелиальных грибов двух классов - дейтеромицетов и бдзидиамицетов, Новаякультура продуцирует ферментттый комп 1 КГ гтРОЯВЛЯЮпий ЛИГНОЛИтИЧЕСКУЮР)тапеос)таете г.)тгунонрог 1.дп) .ицеллюлолитическую (как ТгСГо 1 еггпа.Р; .,) активности, По сравнению ср;дительскими тптаммами повьппаетсядктинцость целлобиазы,И р и м е р 2, Способ осуществлятт г:гласно примеру 1, но н качестверодительских тдтаммон используютТг с)то 1 с гпта 1 отс;1 Ьгас)1 аЬпп, Р 1 ецгоЬтг; т,гегЬгз 082, Дельтонином вклц:сентрдции 0,022 обрабатываютпротоплдсты Тг 1 с)то 1 еггпа 1 оп 1 ЬгасГ 1 я, -Ьцгп 726 н течение 10 мин, Получаютстабильные жизнеспособные фузанты,Таким образом, предлагаемый спо-,гоб позволяет получать стабильныегибридные культуры грибов, принадлежащих различным родам,Формула изобретенияГпособ получения гибридных культур грибов, включающий слияние прогоцлдстон в буферном растворе, содержащем полизтипенгликоль и стабилизирующие вещества, о т л и ч а ю щ н й с ятем, что, с целью повьпдения выходаи стабильности гибридных культур,перед слиянием протопласты одной изрлдительских форм обрабатывают дельтоцином в концентрации 0,01-0,023 втечение 5-10 мин,