Способ получения растений-регенерантов риса

(46) 07.02. (71) Всесою тельский ин (72) Л,А,К (53) 578.02 (56) Тканев селекции ра 1979, с. 34 5/30-13 иотехироожет стении.овынтов орененв том, е регеащивани- обраба(54) СПОСОБ ПО НЕРАНТОВ РИСА ЕНИЯ РАСТЕНИЙ-РЕГЕи,при Способ стоит в том, ч стений-регенер нтов,з экспланубкультинии р ающем п ни в аклю атов ичко о каллуса, с го, переносе на у и последующем згормональной ср еранты икаллусыг е виров егенера нии еую средна бе цион вани левы доращиеде, стебо стеб г ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОАНИЕ ИЭОБ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛ 87,90. Бюл. У 5зный научно-исследовститут рисаучеренко3,85(088.8)ые и клеточные культустений. - М.: Колос,-35Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в селекции растений для получения новых исходных форм риса методомкультуры изолированных тканей.Практическая значимость метода культуры тканей для селекции тем выше, чем больше выход из каллуса растений-регенерантов и чем выше процент их приживаемости после пер садки в почву.Цель изобретения - увеличение выхода укорененных регенерантов и повышение их приживаемости в грун(57) Изобретение относитсянологии, в частности к кульванию растительных тканей,использоваться в селекции рЦелью изобретения являетсяшение приживаемости регенерпочве и увеличение выхода укных растений, Способ состоичто растения-регенеранты поснерационной среды перед дорем на безгормональной средетывают раствором ауксина, 1Ь-лы, 3 табл. левыми почками перед переносом на безгормональную среду обрабатывают С раствором ауксина.П р и м е р 1, Получение растений-регенерантов из каллуса различных сортов риса. Каллусы получают из д различных эксплантатов (целые семена, зародыши зрелых и молодых семян, отдельные части зародьппей или прорастающих семян, зачаточные метелки) на индукционной среде Мурасиге и Скуга Сф (МС) с добавкой 4 мг/л 2,4 Д + агар 17 М Полученные каллусы субкультивируют на той же среде, но с уменьшенным содержанием 2,4 Д (2 мг/л) в течение нескольких (до 10) пассажей продолжительностью по 20-30 сут, высаживая часть каллусов по окончании каждого пассажа на регенерационную среду МСс цитокинином 6-БАП (5 мг/л), Через 20-30 сут культивирования каллусов на этой среде в них образуются зеленые почки, часть из которых в даль1541252Регенерационная среда, МС + Вид морфогенеза,полученного нарегенерационнойсреде 6-БАП, 5 мг/л+ИУК, 10 мг/л 6-БАП, 5 мг/л Родина ВНИИР 22 ВНИИР 7405 Альтаир Альтаир Высажено каллусов, шт,83 378 6 350 350 Получено (шт./1 О каллусов) Проростки с корнямиПроростки безкорневой системы(стеблевые регенеранты)Каллусы со стеблевыми почками 5,6 4,6 26,2 40,1 22,3 3,3 5,2 75,4 33,3 19,2 12,9 30,8 Количество каллусов показано числом . трансплантатов величиной 2-3 мм, являющихся единицей пересаживаемого материала. нейшем развиваются в проростки, ачасть прекращают развитие. В табл. 1 Как видно иэ табл, 1, число получаемых неукорененных проростков и стеблевых почек значительно выше, чем регенерантов с корнями. При этом добавка в среду ауксина ИУК, 10 мг/л не способствует увеличению корнеобра. 40 зования у регенерантов. Образовавшиеся на регенерационной среде нормальные проростки переносят в почву, а стеблевые регенеЯнты икаллусы со . с теблевыми почками, п рек ратившие ра з в итие, извлекают из проб ирок или колб, разделяют на отдельные проростки, а каллусы - на кусочки величиной 2-3 мм, после чего проводят их обра-ботку ауксином о(-НУК в концентрации 10 мг/л. Каллусы с почками, а также проростки высотой, не превышающей 1 см, помещают в чашки Петри на фильтровальную бумагу, смоченную раствором ауксина с-НУК (слой не бо 55 лее 1 мм). Чашки закрывают и оставляют в стерильном боксе при комнатной температуре на 1-2 ч. Это время необходимо и достаточно для проникнове, приведены результаты культивированиякаллусов на регенерационной среде.Таблица 1 ния раствора в клетки тканей трансплантатов, Проростки высотой более1 см помещают в пробирки с растворомауксина, высаживая их на мостики иэфильтровальной бумаги так, чтобы обработке подвергалась лишь нижняячасть проросткаПо истечении указанного времени трансплантаты переносят на безгормональную среду, непромывая их от ауксина, В контрольном варианте трансплантаты пересаживают на безгормональную среду длядоращивания, не обрабатывая их ауксином. Все работы проводят с соблюдением обычных правил асептики, принятых в работах с культурами тканей. Примеры 2-4 осуществляются анало" гично примеру 1, отличие состоит в использовании другой концентрации ауксина а(-НУК, а также используют ауксин ИУК в двух концентрациях. Результаты пересадки регенерантов на безгормональную среду с предварительной обработкой их ауксином (сорт ри6Таблица 3 41252 Пересажено Обработка 5 трансплантатов пеВыжило проростков в шт,ред пересадкой на безгормо О нальнуюсреду почву,штБез обра 15 боткио(-НУК,100 мг/л 110 43 39 140 100 79 Таблица 2 Обработка трансплантатов перед пересадкойна безгормональную среду Выход укорененных растений, Е из стеблевых из каллусов состеблевырегенерантов ми почками 71 87 113 113 131 20 83 33 63 108 Без обработкиИУК, 10 мг/л ИУК, 100 мг/ло-НУК, 10 мг/ло-НУК, 100 мг/л Обработка ауксином о(-НУК способствует образованию у проростков мощной корневой системы, что обеспечивает хорошую приживаемость их после пересадки в почву, показанную в табл. 3. Составитель В. ДемкинТехред М.ХоданичКорректор О, Кравцова Редактор А. Мотыль Заказ 264 Тираж 484 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Щ Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101 5 15 са ВНИИР. 7405, 1986-1987 г. ) приведены в табл. 2.Как видно из табл. 2, обработка регенерантов ауксинами резко повышает выход укорененных растений, При этом лучший результат получен при использовании о 1-НУК в концентрации 100 мг/л. Выход укорененных растений более 1007 по отношению к числу пересаженных трансплантатов объясняется тем, что часть стеблевых регенерантов имеют по несколько почек роста, после укоренения они начинают расти и дают по несколько отдельных рас тений. 20 Формула изобретения 1 . Способ получения растений-реге"нерантов риса, включающий посадку 25 эксплантантов на питательную среду собразованием первичного каллуса, субкультивирование его, перенос на регенерационную среду, доращивание регенерантов на безгормональной среде и последующую пересадку растений в грунт, о тличающийс я тем, что, сцелью увеличения выхода укорененныхрегенерантов и повышения их приживаемости в грунте, перед переносом на 35б езгормональную с р еду рег енеранты об -рабатывают раствором ауксинов в концентрации, обеспечивающей максимальное укоренение.2, Способ по и. 1, о т л и ч а 40 ю щ и Й с я тем что, используют ауксины - индолил-уксусную кислоту ио-настил уксусную кислоту