Способ контроля питательных сред, используемых для вибриоцинотипирования холерных вибрионов

оочумный инИзобретение отно ской микробиологии пользовано при оцен тельных сред,. исполь риоцинотипирования ится к медицин- и может быть ис-, е качества питазуемых для виболерных вибриоупп среде Хьюкислоты бе ных услови-,арб инол. ов,е ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ ститут(56) Инструкция по бактериологическому контролю диагностических питательных сред для холерного вибрионаСаратов, 1983.(54) СПОСОБ КОНТРОЛЯ ПИТАТЕЛЬНЫХСРЕД, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ ВИБРИОЦИНОТИПИРОВАНИЯ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ(57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть Цель изобретения - повышение точности способа.Для осуществления способа используют в качестве тест-штаммов культуры бактерий 71 Ъго сЬо 1 егае е 1 т,ог Р, Ри Р, которые депонированы под номерами КМ, КМи КМ5 соответственно и.характеризуются следующими признаками.Культурально-морФологические и Физиолого-биохимические признаки. Грамотрицательные полиморфные изог 8015412 1 А 1 использовано при оценке качества питательных сред, используемых для виб" риоцинотипирования холерных вибрионов. Цель изобретения - повышение точности способа, Для проведения контроля питательных сред используют три тест-штамма ЧЪг 1 о с 11 о 1 егае е 1 т,ог КМ, КМи КМ. Тестштаммы высевают на исследуемую среду, посев инкубируют и затем подсевают индикаторные культуры энтеробактерий. Посевы инкубируют и определяют спектр ингибирующей активности всех тест-штаммов в отношении индикаторных культур, По характеру спектра определяют пригодность иссле- дц дуемой среды для вибриоцинотипирования холерных вибрионов. 4 табл. нутые палочки. ОтносятсяХейберга,Расщепляют глюкозу лейФсона с образованиегаза в аэробных и анаэ ях. Образуют ацетилметОксидазопозитивные, обладают лизин- и орнитин-декарбоксилазой. Н имеют .аргининдигицролазы. Образуют индол, Не образуют сероводород,Итаммы КМи КМагглютинируются до титра сыворотками "0" и пИнаба" и не агглютинируются сывороткой "Огава", Штамм Кагглютинируется до титра сыворотками 0 и "Огава" и не агглютинируется сывороткой "Инаба", Все штаммы чувствительны кфагам "Эльтор" и не чувствительны кФагам "С".Штаммы КМи КМхорошо рас"тут на агаре с полимиксином(50 ед/мл), штамм КМна этой среде образует единичные колонии и обладает широким спектром вибриоциногенной активности, штамм КМ-умеренным спектром, штамм КМ5 -узким спектром,Способ осуществляют следующим; .образом.Суточные бульонные культуры каждого тест-штамма КМ, КМиКМ5 засевают полосой на серединытрех подсушенных пластинок 1,5 Х-нотопитательного агара с цитратно-фосфатным буфером, Посевы инкубируют при37 С в течение 48-72 ч, По истечении 20срока инкубации посевы тест-штаммовподвергают холодовому шоку, затемобрабатывают хлороформом, К полосамвыросших тест-штаммов подсевают бульонные культуры индикаторных штаммов 25энтеробактерий: 1 - БМде 11 а Г 1 ехпегх 3189; 2 - Б 1 пяе 11 а Г 1 ехпег 38/40;3 - БМде 11 а йуяеп 1 егхае 43; 4 -Б 1 п.де 11 а яоппех М 2/2 (22); 5 - БМде 11 а яоппех М(31); 6 - БМце 11 аяоппе 17(2); 7 - ЕясЬегс 1 п.а со 1 хС(1 ); 8 - ЕясЬегзсМа со 13. 6( );9 - ЕясЬегсИа со 1 К; 1 0 - ЧИгхо сйо 1 егае 541 (54); 11 - ЧУгюсЬо 1 егае 296/,1 (20); 12 - ЧуосЬо 1 егае 24 БЬеьп 1077.35Посевы инкубируют в течение 18 чЧувс твительность индикаторных культур к вибриоцииам регистрируют поотсутствию их роста на полосе илиза пределами роста тест-штаммов,40Спектр чувствительности устанавливают по табл.Испытуемый агар считают пригодньидля вибриоцинотипироваиия при воспроизведении спектра ингибирующейактивности тест-штаммов по отношениок индикаторным культурам в соответ"ствии с табл. 1,П р и м е р 1. Контроль 1,5 Х-но-.го агара Мартена, рН 7,6, серия 1550на пригодность для вибриоцинотипирования. По результатам контроля тестштаммом Р(прототип) агар этой серии признан годным для диагностикихолеры,Первый день. Суточные агаровыекультуры тест-штаммов КМ(Р0588). КМ(Р) и КМ(Р) засевают в бульон Мартена, рН 7,6.Второй день. К расплавленному иоостуженному до 45 С агару добавляютингредиенты цитратно-фосфатного буФера из расчета на 1 00 мл по 2,0 мл253-ного раствора двузамещенногофосфорио-кислого калия и лимонно-кислого натрия и 0,5 мл 0,6 Х-ного раствора хлористого аммония.По одной капле суточных бульонныхкультур каждого из тест-штаммов наносят в край тщательно подсушеннойпластинки взятого для исследованияагара и дают стечь по середине пластинки в виде полосы, После подсыхания посевного материала чашки помещают в термостат при 37 С на 48 ч,Четвертый день, Чашки Петри с выросшими на них культурами тест-штаммов переносят в холодильник при +4 С,фПятый день. Рост тест-штаммов наполосе посева счищают предметнымстеклом, обрабатывают парами хлороФорма 1 ч, а затем проветривают 12 ч. Суточные бульонные культуры индикаторов (по 4 культуры на каждуюпластинку) подсевают перпендикуляр"но к полосе роста продуцента такжев виде полос.Шестой день, Учет результатовприведен в табл. 2,П р и и е р 2. Контроль агараВНИИВС, серия 8. Работа в первыйшестой дни проводится аналогично примеру 1, Учет результатов приведенв табл. 3.П р и м е р 3, Контроль агара дрожжевого, серия 3. Работа в первый-шестой дни проводится аналогично примеру 1. Результаты приведены в табл. 4.Использование предлагаемого способа позволяет повысить точность отбора сред, пригодных для вибриоцинотипирования холерных вибрионов, что невозможно при использовании известного способа,Формула и з о б р е т е н и яСпособ контроля питательных сред, используемых для вибриоцинотипирования холерных вибрионов, включающий посев тест-штаммов на исследуемую питательную среду и инкубирование посевов, о т л и ч а ю щ и й с я тем,1541251 что, с целью повышения точности способа, в качестве тест-штаммов используют культуры бактерий ЧЪгхосЬо 1 егае е 11 ог, штаммы КМ, КМ и КМ, среду параллельно засеваюткаждым тест-штаммом, после инкубирования к тест-штаммам подсевают ин 1 Таб лица Тест-штаммСпектрингибирующей активНаличие зон ингнбиции роста индикаторных культур 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 О 11 12 ности Широкий+ - + + + --- + + Узкий Таблица 2 Тест-штамм Наличие зон ингибиции роста индикаторных культур Заключение о пригодностиагара длявибриоцинотипирования 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 О 11 12 Годен(Р) дикаторные культуры энтеробактерийФ 1и холерных вибрионов, посевы инкуби"руют и определяют пригодность среды 5для вибриоцинотипирования по спектру ингибирующей активности всех тест,штаммов в отношении индикаторныхкультур.1541251 Таблица 3 ЗаключеТест-штамм ние о при-годностидля вибриоционоти 10 11 4 5 6 7 1 2 3 пирования Не годен 4 Таб лица Заключение Тест-нтаммы о пригодности агара для вибриоцинотипиро- вания 2 3 4 О 1 2 е(Р) Наличие зон ингибиции роста индикаторных культур+ + + -+ - + - + + аличие зон ингибиции роста индикаторных культур