Способ индикации антигена

), А 61 К 39 0 ОМИТЕТ ССС СУД АРСТ ВЕН 21)Р 38 В,И.Жиглов,аральник и Й,Ж.Жа телькроно-исследовмиологии, миых болезнейисследователнститут(54)(57) СПОСОБ ИНДИКАЦИИ АНТИГЕНАпутем нейтрализации исследуемогоматериала набором иммунных сывороток с последующим добавлением диагностикумов, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышенияточности индикации антигена, нейтрализацию исследуемого материала осуществляют комплексными сывороткамив разведении 1:50 - 1;100, а в качестве диагностикума используютодин комплексный антительный диагностикум.Изобретение относится к медици-не и ветеринарии, в частности -ксерологической диагностике.Известен способ индикации антигена с помощью реакции торможенияпассивной гемаглютинации (РТПГА )с использованием иммунных сыворотоки гомологичйых 1. антигенных эрИтроцитарных диагностикумов 1 ).Однако известный способ характеризуется недостаточной чувствительностью и не обеспечивает точностиопределения антигенов, а также сло-жен в исполнении, так как возникаетнеобходимость строгого предварительного выбора и контроля адекватности минимальной агглютинирующей дозыдля каждой иммунной сыворотки.Цель изобретения - повышение точности (чувствительности и специфичности ) индикации антигена в исследуемом материале,Указанная цель достигается тем,что при осуществлении способа путем нейтрализации исследуемого материала набором иммунных сыворотокс последующим добавлением диагностикумов, нейтрализацию исследуемогоматериала осуществляют комплекснымисыворотками в разведении 1:50-1:100,а в качестве диагностикума используют комплексный антительный диагностикум.Способ осуществляется следующимобразом.К последовательным разведениямисследуемой пробы материала .добавляют набор (или комплекс ) известных иммунных сывороток (в разведении 1:50 или 1:100 ), смесь выдерживают в течение 30 мин при 18-20 Си затем в нее вносят идентичный по.специфичности иммунным сывороткамантительный (комплексный) эритроцитарный диагностикум. Сущностьспособа индикации антигена заключается в сочетании однонаправленных(идентичных) по специфичности реагентов (иммунных сывороток. и антительных диагностикумов), а такжеиспользования комплексных антительного диагностикума и сывороток.Комплексный антительный диагностикум должен содержать антитела клюбому из антигенов, которые могутнаходиться в исследуемой пробе.Комплексные сыворотки составляюттаким образом, чтобы индикация антигенов достаточно большого набораспецифичностей могла быть осуществлена в минимальном количестве рядов разведений исследуемой пробы.Сочетание идентичных по специфичности реагенто позволяет значительно повысить чувствительность реакций, основанных на торможениипассивной гемаглютинации, специфичность (эа счет взаимного контроля набора используемых сывороток, аиспользование комплексных препаратов позволяет упростить постановкуреакции и сократить время получениярезультатовП р и м е р. При лабораторномобследовании на коли -инфекциюпроводят поиск антигена ешерихий6 наиболее распространенных серогрупп в фекалиях больного ребенка 10 с помощью известного и предлагаемого способов.По предлагаемому способу готовят 3 одинаковых ряда (вместо 6 поизвестному способу ) разведений 15 исследуемого экстракта фекалий от1:2 до 1:256 в объеме 0,25 мл. Ковсем разведениям первого ряда добавляют по 0,25 мл смеси сывороток020, 026, 055, Ко всем разведениямвторого ряда добавляют по 0,25 млсмеси сывороток 0,20, 0111 и 0126,Ко всем разведениям третьего ряда,добавляют по 0,25 мл смеси сывороток 026, 0126 и 0127. Каждая иэ сывороток в смеси содержится в конечном разведении 1:50 или 1:100, Штативы встряхивают и выдерживают в течение 30 мин при 18-20 С для нейтрализации определяемого антигена. Затем во все лунки трех рядов вносятпо 0,05 мл 2,5-ного антительного( например, комплексного, содержащего антитела специфичности 020, 026055, 011, 0126 и 0127) эритроцитарного диагностикума. Штативы З 5 встряхивают и оставляют на 1,5 чпри 18-25 С. В таблице приведены результатыисследования пробы Фекалий. Щ Результаты реакции по предлагаемому способу учитывают следующимобразом. В случае. присутствия висследуемой пробе антигена (в данном примере Е.со 026) во всех рядах разведений пробы с иммуннымисыворотками, не содержащими гомоло.гичных антител (в данном примере.026 ), реакция агглютинации после до.бавления комплексного антительногоэритроцитарного диагностикума положительна в титре, зависящем отколичества антигена в пробе (в данном примере до 1:64). В рядах, гдесодержится гомологичная сыворотка(026),происходит нейтрализация антигена специфическими антителамии после добавления антительного .эритроцитарного диагностикума титргемагглютинации будет отрицательным,В этом случае результат анализа по" 60 ложительный, .т.е, обнаружен анти"ген (в данном примере Е.соР 026до разведения 1:64). Если в исследуемой пробе антиген отсутствует, тово всех рядах отрицательные реэуль. 5 таты гемагглютинации, следовательно1047476 1,64 020+0111 ФО 126 АнтигенЕ со 0 026 обнаружен до разве-.дения исследуемой пробы 1:64 ОтрицательныйфОтрицательный 1:64 Предлагаежй (вариант использования набора сывороток ) 020 Отрицательный 026 1:64 055 АнтигенЕ соР 026 обнаружен до разведенияисследуемой пробы 1:64 1:64 0111 0126 1:64 1:64 0127 Известный Отрицательный 020 1:8 026 Отрицательный 055 Антиген.Е соб 026 обнаружен до разведения исследуемой пробы 1:8 0111 То же 0126 0127 Титр РПГА с антительным диагностикумом.Торможения реакции не обнаружено.Разведение исследуемой пробы, где еще обнаружено торможениереакции,ВНИИПИ Заказ 7793/4 Тираж 713 Подписное Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная,4 рез уль тат анали з а отрицатель ный, т. е. антиген не обнаружен.В данном примере, показыващцем воэможность использования как набо" ра, так и комплекса сывороток, чув ствительность индикацииантигена по предлагаемому способу в 8 раз выше, чем по известному, Преимущест. вом предлагаемого способа является также возможность проведения анализа в трех (в данном примере) вместо обязательных шести по известному методу, что значительно упрощает проведение анализа. Следует отметить, что при возрастании числа антигенов, подлежащих определению и при массовых обследованиях это пре" имущество еще более увеличивается, По предлагаемому способу иммунные сыворотки используют в стандартных(1:50 или 1100) разведениях, а Предлагаемы(вариант использования комплекс- .020+026+055 ных сывороток)026+0126+0127 по известному способу требуютсядва обязательных сложных предварительных этапа - выбор рабочей (4гемагглютннирующнх единицы) дозыкаждой сыворотки для каждого диагностикума и контроль этой дозы каждым диагностикумом что усложняети удлиняет время исследования на3-3,5 ч.Таким Образом, предлагаемый спо соб благодаря сочетанию идентичныхпо специфичности реагентов (антительных диагностикумов и набораиммунных сывороток) характеризуется более высокой чувствительностью 15 индикации и специфичностью (засчет взаимного контроля результатапри использовании комплекса сывороток), а также простотой постановкии быстротой получения результата ;р анализа.