Способ выделения возбудителя бруцеллеза вида brucella меliтеnsis из патологического материала

А 1 СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК БРЕТЕНИЯ ЛЬСТВУ отовят сл Изобретени логии и может выделения воз да шеНйепз 1 з молока и внут ванных плодовотнобыть ится к микробиоспользовано для я бруцеллеза видивидуальных проб органов абортиро инятои реицериновый серийно- референтдные по бщепр зо"гл удител из ин енних хои ные Цель .изобропления бакт овышения сел приг один бавк ения- увеличение наой массы за счести,иэ трех Ингретивн ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИК АВТОРСКОМУ СВИ(56) Лабораторные исследования в ветеринарии,/Под ред. В.Я.Антонова и П.Н.Блинова, М.:Колос 1971, с. 49-61.Наставление по диагностике бруцеллеза животных. М.: Агропромиэдат, 1985, с 7-13.(54) СПОСОБ ВЫЧЕЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ БРУЦЕЛЛЕЗА ВИДА. ВЮСЕЬ 1 А МЕ 1 1 ТЕБ 818 ИЗ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА (57) Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для выделения возбудителя бруцеллеза вида ще 1 з.1 епз 1 з из загрязненных посевов. Целью изобретения является увеличе-ние накопления бактериальной массы за счет повышения селективности. В приготовленный .по общепринятой рецептуре печеночный глюкозо-глицериновый ЯО 152176(51)4 С 12 0 1/04, С,12 агар или зритрит-агар сухой серийного производства вносят один из трехвариантов селективной добавки,ингре-диенты селективной добавки вносят приследующем соотношении компонентов,г/л: оксациплина натриевая соль0,025-0, 1; полимиксина И сульфат25000-100000 ед, невиграмон 0,01250,05, или вносят полимиксина М сульФат 25000-100000 ед, метициллина натриевая соль 0,125-0,5; кристаллвиолет 0,0013-0,0017, или вносят полимиксина М сульфат 25000-100000 ед,оксациллина натрневая соль 0,025-0,1,кристаллвиолет (или геницианвиолет)0,0013-0,0017. На предложенных средахФормируются колонии возбудителя бру- Жциллеза из малых посевных доз. Приме- дкение антибиотиков отечественногопроизводства в качестве селективно.го Фактора без изменения технологиивыделения бруцелл увеличивает возможности лабораторной службы. Применение селективных сред исключает необходимость засева исследуемого материала на большое количество косяковс последующими пересевами для очисткивозбудителя Вг, ше 11 йепз 1 з от обильной посторонней микрофлоры. 1 табл.Я Пример 1. Средующим образом.В приготовленный по оцептуре печеночный глюкоагар или зритрит-агар сго производства, провереными штаммами бруцелл исвоим качествам, вносятвариантов селективной додиенты селективной добавки в растворенном виде в Физиологическом растворе или дистиллированной воде вносят при перемешивании в расплавленный и остуженный до 45,-50 С агар при слеО 5 дующем количественном соотношении компонентов, г/л:Оксициллина натриевая соль 0,05Полимиксина М сульФат, ед 50000.Невиграмона 0,025 илиПолимиксина М сульФат, ед50000Метициллина натриевая соль 0,25Кристаллвиолет 0.0013-,50,0017(или в разведении 1:6000001 ф 800000).Индивидуальные пробы из свежевыделенного молока овец или другого дойного животного берутв объеме 4-5 мл. При невозможности высева не" посредственно после доставки высев молока проводят через 16-18 ч при хранении молока при 4 С. Материал засевают на отдельные чашки Петри или про бирки (косяк) с селективной средой пипеткой в объеме О,1 мл. Органы абор" тированных плодов засевают методом отпечатка среза на отдельные чашки Петри или пробирки со скошенным селективным агаром. Взвесь органов или содержимое желудка засевают в .объеме 0,1 мл в отдельные чашки Петри или пробирки со скошенным селективным агаром.Посевы инкубируют при 37 С в течение 7-12 сут с ежедневным контролем роста после двусуточной инкубации. Возбудитель бруцеллеза на селективных питательных средах обычно вырастает в течение 3-7 сут.Бруцеллы вырастают на селективной среде в виде колоний с ровными краями, выпуклые, прозрачные с голубоватым оттенком (при добавлении краски) 55 и гладкой поверхностью, гомогеныы, иногда с нежной зернистостью в центре колонии. С возрастом нежные и прозрачные колонии бруцелл постепенно теряют голубизну и мутнеют, Колонии бруцелл по размеру и:темпу роста несколь"ко отстают по сравнению сростом наобщепринятых плотных питательных средах. При хранении культур на селективной среде до 1-1,5 мес признаковдиссоциации не отмечается.Испытано 2488 индивидуальных пробовечьего молокаи выделен 41 штаммВг, ше 1 дйепядя. Из них 1552 пробыбыли доставлены из благополучных побруцеллезу овцеводческих хозяйств ивыделены 25 штаммов бруцелл видаше 1 дйепядя.На контрольной среде, т,е.общепринятой печеночной глюкозо-глицериновой среде, выделен только одинштамм Вг.ше 1 хепяя,Из 126 исследованных внутренних органов абортированного плода мелкогорогатого скота на селективной средевыделены 76 штаммов Вгисе 11 а ше 1 дйепяя , на контрольной среде - только63 штамма бруцелл. От четырех абортированных плодов крупного рогатогоскота выделена одна культура Вгосе 11 ааЬогця ,а от пяти абортированныхплодов свиней бруцеллы не выделены.На предлагаемых.селективных питательных средах дополнительно выделены 14штаммов бруцеллеза (18,47.). Сравнительные данные приведены в таблице,Результаты бактериологического исследования молока овец и внутреннихорганов абортированных плодов мелкого рогатого скота приведены в таблице.На предлагаемых селективных питательных средах Формируются колониивозбудителя бруцеллЕза из малых посевных доз. Применение антибиотиков отечественного производства в качествеселективного Фактора без изменениятехнологии выделения бруцелл в значи-.тельной степени увеличивает возможность лабораторной службы.Приготовление предлагаемых селективных сред не представляет трудностей и не требует специальной подго-,товки практических работников.Внесение селективных добавок взначительной степени экономит средыи сокращает время исследования.Формула изобретенияСпособ выделения возбудителя бруцеллеза вида Вгцсе 11 а ше 1 дйепзя иэ патологического материала, включающий посев исследуемого материала на пита20 Исследуемый материал Кол-вопроб Выделено культур на средах прото Предлагаемая 1 2 3 Всего Молоко из благополучных хозяйствМолоко из неблагополучных хозяйств Внутренние органы абортплодов:мелкого роготогоскотакрупный рогатыйскот 1552 0 25 24 25, 25 1 16 16 16 16 936 126 62 33 18 41 76 4 О 1 1 1 1 Составитель П.Игнатов Редактор Н.Киштулинец Техред Л.Олийнык Корректор Т,МалецЗаказ 6892/24 Тираж 501 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, 3-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г,ужгород, ул. Гагарина,103 5 1521762 6 тельную среду , содержащую печеночно- виолета при следующем соотношении глицериновый или эритрит-агар и селек- компонентов, г/л: тивную добавку, культивирование с пос- Полимиксина М сульфат, ледующим выделением чистой культуры, ед 25000 100000 о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с5Метициллина натриевая целью увеличения накапления бактерисоль О, 125-0,5 алькой массы, в качестве селективной Кристаллвиолет 0,0013-0,0017 добавки используют смесь полимиксина или смесь оксациллина натриевой соли, М сульфата, оксициллина натриевой со полимиксина М сульфата и/или кристаллли и невиграмона при следующем соот- виолета и генцианвиолета при следующем ношении компонентов, г/л: соотношении компонентов, г/л:Оксациллина натриеваясоль 0,025"0,1 Оксициллина натриеваяПолимиксина М сульфат, 5 соль 0,025-0,1ед 25000-100000 Полимиксина М сульфат,Невиграмон 0,0125-0,05 ед 2500-100000 или смесь полимексина М сульфата, ме- Кристаллвиолет или тициллина натриевой соли и кристалл- генцианвиолет1,0013-0,0017