Способ получения зимозана

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 1 И 19 114 С 12 Р 19/ гсш 0 НИЕ Е Е аЛИО 4225992/28-107.04.87 3 биотсхнополучения С выхение етс зана с тносится Изобретен логик, а име зимозана, ко в иммунологи ления уровня крови. Цель и выхода иции при- нтативных атуры инкуб ивации ферм эан не обра но к способуорый находит и медицинепропердина в применен к де я опреде ыворотке те ость процесса болобразна, так какйшему увеличениюти зимозана. По ои суспензию лодки е и од нецелесо к дальне активнос инкубаци рНЗиф нит. Зав ыхо зобретения - уве повышение активн чениети зимо онча ляют окатио ильтруют через исимость выход дующим мозан тавле й суспензии в течение ях происходит с помощью их накоплениемнкубирования пре жиматабл.Посл про ия через с центрифуг атионит суспенэию садок обезвоживаю пирт а св ени еньшем указанературе ниже ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИПРИ ГКНТ СССР ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Научно-производственное гидролизное объединениеГидролиэпром"и Всесоюзный научно-исследовательскийинститут особо чистых биопрепаратов(56) Авторское свидетельство СССРУ 138334, кл, С 12 Р 19/04, 1960.Авторское свидетельство СССРУ 141990, кл, С 12 Р 19/04, 1960. эана.Способ осуществляютобразом. Дрожжи в виде воднооинкубируют при 35-55 С1-7 сут. В этих условипроцесс лиэиса клетокферментативных системв осадке зимозана. Прикубации, большем или много интервала, и темп(57) Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения эимоэана из дрожжей, Цель изобретения - увеличение выхода эимозана и ускорение процесса получения. Водную суспензию дрожжей инкубируютопри температуре от 35 до 55 С в течение 1-7 сут. После инкубации суспензию пропускают через колонку с сульфокатионитом, центрифугируют. Полученный осадок обезвоживают спиртом и вакуумной сушкой. Выход зимозана составляет 347 в пересчете на сухие дрожжи. 2 табл. куумной сушкой. Для испытания эимозана в кач ве иммунологического агента обр1490156 10 20 30 л и ц а 1 Выход зимозана, г/кгпресс.дрожжей Темперас тура, С Время инкубиронания,сут 3,58386 30 35 40 1575 полученные по предлагаемому способу,фирмы Сигма (США) и Реахим Г.Олайне(СССР) подвергаются кипячению наводяной бане в течение 1 ч и 6-8 кратному центрифугированию при10000 я н забуференном физиологическом растворе.Полученный реагент добавляют ксыворотке крови человека до концентрации 2 мг/мл, Смесь инкубируют 1 чопри 37 С, после чего реагент удаляютцентрифугированием 20 мин при 5000 8.0 степени активации пропердиновогокомплемента судят по его остаточнойактивности и путем определения иммунохимическим методом образовавшегося белка С За. Результаты испытанийв сравнении с имеющимися коммерческими препаратами представлены втабл.2,П р и м е р 1. В промытый и простерилизованный аппарат заливают 250 мл дистиллированной воды, загружают 1 кг свежих прессованных пекаро ских дрожжей, инкубируют при 35 С в течение 7,0 сут при непрерывном перемешивании. По окончании времени инкубации водную суспенэию подкисляют до рН 3 и пропускают снизу нверх через колонку с катионитом КУ 2 х 8 в Н -форме (1,9 х 10,5 см) со скоростью 75 мл/ч.Нерастворимый эимоэан, прошедший через копонку, отделяют от элюата центрифугированием в течение 10 мин при 10000 об.мин, Препарат промывают 5 раэ 96 Х-ным этиловым спиртом (2 л), экстрагируют в экстракторе Соксклета 8 ч абсолютным спиртом, сушат на накуумсушилке. Иэ 1 кг прессованных дрожжей полу чают 83 г зимозана, что составляет ЗЗ,ЗХ в пересчете на сухие дрожжи.Т а б П р и м е р 2, Способ осуществляют согласно примеру 1, но инкубациюведут при 55 С в течение 1 сут,Выход эимоэана 68 г, что составляет 27,27. в пересчете на сухие дрожжи.П р и м е р 3, В промытый аппаратзаливают 60 мл дистиллированной воды,загружают 250 г прессованных некондиционных пекарских дрожжей, содержащих 651 дрожжей СапдЫа шдсос 1 егшаоФи инкубируют 36 ч при 48 С и непрерывном перемешиванииПоследующуюобработку проводят согласно примеру 1.Получают 21 г эимоэана, что составляет ЗЗЕ в пересчете на сухиедрожжи.П р и м е р 4, Способ осущестнляют согласно примеру 1, но инкубациюведут в течение 1,5 сут при 50 С,а в качестве сульфокатионита используют Амберлит ИР,Выход зимоэана 85 г, что состанляет 34 Е в пересчете на сухие дрожжи.Таким образом, предлагаемый способ позволяет более чем в 10 раз увеличить выход зимозана и более чем в2 раза сократить время получения.Активность полученного препарата на5-107 выше известных коммерческихпрепаратов,Формула изобретения Способ получения эимозана, предусматривающий лиэис дрожжевых клеток с последующим выделением целевого продукта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью увеличения выхода эимозана и ускорения процесса, лиэис дрожжевых клеток осуществляют путем инкубации водной суспенэии дрожжей при температуре 35-55 С в течение 1-7 сут, а выделение целевого продукта проводят фильтрацией суспенэии через сульфокатионит.1 90156 11 родолжение табл,1Ъ 91 80 68 3,5 1,5 1,0 24,3 0,5 Т а б л и ц а 2 КоличествоС За, 7 Активность абсолютноПрепарат го компле -мента, 7 100 30 31 35 36 предлагаемому способу 41 38 Составитель Т.ИелентьеваТехред Л,Олийнык Корректор И,Самборская Редактор И.Петрова Заказ 3651/29 Тираж 500 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035,:дсква, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 СывороткакровиЗимоэан