Способ определения активности фосфолипазы а.

(51)4 С 01 Х ЕНИ ОРС ВНОСТ Нф 15 медицин ния ак- повымии ер ныйва и к.С.Маризм а б ивн нения слоимй комтриуют 5 (088 кое св кл. С СССР30.07.87. ельств 33/48 ско эле три ики о фосфатидилку добавляют ,2 мМ, в оба мин - раствор н - хлористый и 5 мМ, в оба способамфолипазыв медицинопределенифосйолип уют изолинаДТА (д раствор декане концен чейки),ичног ячей ции 0отсе Фосф каль черезез 2 ми и азы,яче Фиг. 1 - ермента 1 показань льт у активь сти кую активност образуется 1 иниц т та при котопринимаю рой за 1 н 1 либровочным крив о ислот остро н тив нос арата.ой активности о Формуле, осческой модели,жет быть определванной на элект н киеП х ост е Ч - ск стного и енциал (Фиг. ном участС - конце рация ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР АНИЕ ИЗОБ У СВИДЕТЕЛЬСТВУ(56) Авторс идеУ 1416918, 01 Изобретение относитсяопределения активности фо и может быть использовано и биологии, например, для активности панкреатическо зы при диагностике заболевании поджелудочной железы.Цель изобретения - повышение чувствительности, ускорение способа и возможность измерений активности в присутствии примесей в исследуемом образце путем измерения разности поверхностных потенциалов бислойной липидной мембраны для определения скорости ферментативного гидролиза.На фиг. 1 - 3 приведены графичесзависимости,р и м е р 1. Построение калибровочной кривой для коммерческого препарата Фосфолипазы А фирмы "Калбиохем" (ФРГ).Ячейку заполняют раствором 100 мМ КС 1, 20 мМ имидазола, рН 8,9. Бислойные липидные мембраны форми(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТФОСФОЛИПАЗЫ А(57) Изобретение относитсяи предназначено для определтивности фосфолипазы А. Целшение чувствительности и успособа. Измеряют скоростьповерхностного потенциала нной мембране при Ферментагидролизе методом автоматичпенсации внутримембранногоческого поля, которую региспо отсутствию второй гармокостного тока. 3 ил,для препарата иэвестнои можно определять активость неизвестного пр Величина фосфолипа зменения поверха (В/с) на началь -1); А=2,4 10 ; оновсго электроли 1474550та ; Ы - активность фосфолипазы (количество моль жирных кислот, образующихся за 1 с на 1 м мембраны).П р и м е р 2. Определение фос 5 фолипазной активности панкреатического сока.Измерения проводят так же, как и при построении калибровочной кривой (пример 1), но мембрану формируют из азолектина, а вместо фосфолипазы добавляют 10 мкл панкреатического сока человека, полученного при зондировании протока поджелодучной железы. Кинетика изменения поверхностного потенциала показана на фиг. 1. Величина активности, рассчитана по наклону начального участка кривой,4 мВ/мин (для данных условий)И = 3.6 10 мс мТакое же значение получается при проведении анализа в присутствии жедчи (на 10 мкл панкреатнческого сока добавляют 10 мкл желчи).Использование бислайной липидной мембраны в качестве субстрата и применение метода автоматической компенсации внутримембранного поля для измерения поверхностного потенциалаэтой мембраны позволяет создать метод определения активности фосфолипазы А в растворе. Предлагаемый способ имеет более высокую точность ичувствительность, чем известный нетребует тщательной очистки препаратаи реагентов, может быть использовандля измерений в присутствии примесей,позволяет проводить анализ быстро и смалым количеством образца,Формула изобретенияСпособ определения активности фосфолипазы А в растворе путем измерения скорости изменения поверхностного потенциала на бислойной липидной мембране при ферментативном гидролизе о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности, ускорения способа и возможности измерения активности в присутствии приме- сей, измерение поверхностного потенциала осуществляют методом автоматической компенсации внутримембранного электрического поля, регистрируемой по отсутствию 2-й гармоники емкостного тока.1474550 о.з ИнцентроциЯ, иг/мл ектор С,Чер едактор Н.Тупица ж 788 по изобретениям и отк -35, Раушская наб., д венного комите 113035, Москва иэводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 и 8 иин1 О Заказ 1887/4 ВНИИПИ Госуд 2 Ю Концентрация фосфолилазы, ОФсюь, еФ/ил Составитель Л.СабуровТехред Л.Сердюкова дписноеытиям при ГКНТ СССР 4/5