Способ диагностики вирусных гепатитов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИН 9) (111 4 СОЙ 33 5 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТЛО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(1) Рижский медицинский институт (72) А,Ф. Блюгер, Х.М. Векслер, О.О. Сондоре и. Н.А. Осна(56) Алейник М.Д., Быстрова Г.Н., Федотов В,А. и др. Изучение структуры заболеваемости вирусными гепатитами. - В кн.: Актуальные проблемы медицинской вирусологии, - М.: 1985, с, 100-О.(54).СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ(57) Изобретение относится к вирусологии, Цель изобретения - повышение Изобретение относится к медицине,касается гепатологии, в частностивопросов иммунологической диагностикивирусных гепатитов А (ВГА) и В (ВГВ).Цель изобретения - повышение точности диагностики вирусных гепатитов.Способ осуществляют следующим образом.Из крови выделяют лимфоцитарнуювзвесь в градиенте плотности фиколлвераграфина. Эту взвесь доводят доконцентрации 2 10 ,кл/мл в растворе6Хэнкса (рН 7,2). В 12 пробирок вносят по 100 мкл суспензии лимфоцитов6в концентрации 2 10 кл/мл, в 4 изних добавляют НААЛЕ в концентрации20 мкг/мл и в 4 пробирки - НВ А 8 вконцентрации 20 мкг/мл ,по белку). точности диагностики, Суспензию лим-фоцитов вносят в пробирки и в четыреиз них добавляют вирус гепатита А.В следующие 4 пробирки вносят вирусгепатита В, Все пробы ставят в термостат. Из каждой группы вынимаютпо пробирке через 5; 30; 60 и 90 мин,добавляют раствор акридинового оранжевого, смешивают и наносят на предметное стекло. Проводят цитофотометрическое измерение препарата, При нарастании флюоресценции более 257. впробе с вирусом гепатита В диагностируют вирусный гепатит В. Способ позволяет достоверно диагностировать заболевание в стадиях разгара и рекон- Явалесценции.:Все пробы ставят в термостат при 37 С. Попробирке из каждой группы (контрольные лимфоциты, с НААЛЕ и с НВ Ая), вынимают через 5; 30; 60 и 90 мин, добавляют раствор акрицинового оранжевого (концентрация О М на ацетатном буфере, рН 4,4),-Фсмешивают, через 10 мин наносят на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и закрепляют парафином. Цитофотометрические измерения препарата проводят на зондовом цитофотометре при % =365 нм и длине волны 530 нм. Йа каждом препарате флюоресценцию 30 - 50 клеток измеряют и подсчитывают среднее значение интен-, сивности флюоресценции. Высчитывают нарастание интенсивности флюоресцен 14588ции в опыте по сравнению с контролямии этот показатель используют для диагностики ВГА и ВГВ.При нарастании флюоресценции бо 5лее 257 в пробе с НВ Ая диагностируют ВГВ, при нарастании флюоресценции.более 257. в пробе с НАА .диагностируют ВГА.П р и м е р 1. Больная А, предъявляла жалобы на недомогание, ломотув суставах, тошноту (в анамнезетри месяца назад внутримышечные инъекции). Объективно: желтушность склери кожи, повышение уровня бялирубина,АлАТ, Произведено .обследование с помощью известного и предлагаемогоспособов, При применении способа-прототипа наблюдалось торможение прилипания в опытном ,обработанном НВэА) 20образце лимфоцитов по сравнению сконтрольным, которое составляло 37,т.е, получен отрицательный результатПри использовании предлагаемого способа при инкубации лимфоцитов в концентрации 2-10 кл/мл втечениео60 мин при 37 С с НВэАр интенсивностьфлюоресценции акридинового оранжевого повысилась на 1507, инкубациялимфоцитов с НААЛЕ в аналогичных ус- ЭОловиях не дала увеличения флюоресценции акридинового оранжевого. Прове -дение предлагаемого способа с использованием лимфоцитов в концентрации510 кл/мл позволило выявить измене- Зние интенсивности флюоресценции акридинового оранжевого на 157 при обработке НВэАя и отсутствие измененияпоД действием НААя, Таким образомспособ позволил диагностировать ВГВ, 40при этом концентрация лимфоцитов55 1 О кл/мл оказалась неоптимальнымусловием постановки реакции.В сыворотке крови больнойметодомвстречного иммуноэлектрофореза выявлен НВзАя, чем подтверждена правиль"ность выставленного диагноза,П р и м е р 2. Больной П. предъяв.лял жалобы на боли в правом подреберье, тошноту (в анамнезе - парентеральные вмешательства). Госпитализирован с подозрением на вирусный гепатит. Объективно; желтушность кожныхпокровов и склер, повышение билирубина и АлАТ.55Обследован с помощью известногои предлагаемого способов, При применении способа-прототипа выявлено тор -можение прилипания лимфоцитов под 274влиянием НВв Ая на 27 - отрицательный результат. При использованиипредлагаемого способа в пробе сНВ Ая ,20 мкг/мл) наблюдалось повышение интенсивности флюоресценциина 257. на 30-й мин инкубации прио37 С; в опытах с ННАй интенсивностьфлюоресценции не изменилась. При проведении способа в нестандартных условиях использовании НВэАд в концентрации 50 мкг/мл)интенсивностьфлюоресценции повысилась лишь на157 На основании данных, полученныхпредлагаемым способом, был диагностирован ВГВ. Циагноэ был подтверждентем, что в сыворотке крови встречным иммунозлектрофорезом обнаруженНВ,Ля,П р и м е р 3. Больной Б. предьявлял жалобы на слабость, тошноту,боли в правом подреберье. Объектив-.но: желтушность склер и кожи, повышение билирубина и АлАТ. С помощью способа-прототипа не представлялось возможным уточнить диагноз.,С помощьюпредлагаемого способа было обнаружено отсутствие изменений интенсивностифлюоресценции при обработке лимфоцитов НВэА и повышение на 307 связывания акридинового оранжевого под цействием НААя.Применение неоптимальных условий(инкубация лимфоцитов с НААЛЕ и НВ Ацв течение 2 мин).позволило выявитьнарастание интенсивности флюоресценции под влиянием НААЛЕ на 107, что позволило диагностировать ВГА. Циагнозподтвержден отсутствием НВ Лй в сыворотке крови при регулярном контроле(каждые 1 О дней) и обнаружением 1 дМантигенов-антител иммуноэнзимныйметод, набор фирмы Эббот),С помощью способа-прототипа вразгаре ВГВ правильный диагноз былпоставлен в 5 из 9 случаев, в реконвалесценции - в 3 из 9 случаев. Способ-прототип не позволяет диагностировать ВГА, поскольку он не адаптирован к использованию антигена вирусагепатита А.С помощью предлагаемого способаверный диагноз ВГВ и ВГА в период,разгара и реконвалесценции был .поставлен у 1007 больных. Правильностьдиагноза ВГА и ВГВ подтверждена клинико-беохимическими и иммунологическими .исследованиями больных .на протяжении 1-3 мес заболевания.Заказ 367/51 Тираж 788 подписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, 3-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие., г. Ужгород, ул. Проектная, 4 5 1458Таким образом, предлагаемый способ позволяет достоверно диагностировать вирусные гепатиты А и В в стадиях разгара и реконвалесценции. Ф о р м у л а и з о б р е т е н и яСпособ диагностики вирусных гепатитов, включающий забор у больного крови, выделение лимфоцитов, добавление НВв антигена и инкубирование, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа,827 6дополнительно берут пробу с лимфоцитами, добавляют в нее вирус гепатита А, далее обе пробы инкурируют в течение 5; 30; 60 и 90 мин при 36- 38 С, далее окрашивают раствором акридинового оранжевого, оцределяют интенсивность флюоресценции ядер и при нарастании флюоресценции по сравнению с пробами без антигенов более чем на 253 диагностируют соответственно гепатит А или гепатит В.