Способ определения т-лимфоцитов

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛ ИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК 1033 ВЗЪЛИОТЕК ЕТЕЛЬСТВУ К АВТОРСКОМ ол ерат 22в УДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРделАм изОБРетений и ОтнРытий ИЕ ИЗОБР(71) Институт клинической иммун огни СО АМН СССР(56) Кожевников В.С. Изучение зависимости рецепции эритроцитов баранаТ-лимфоцитами от их дифференцировкии функционального состояния. Автореф канд.дисс. Новосибирск, 1983,с(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ Т-ЛИИФОЦИТОВ (57) Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения - повышение точности способа. Суспензию мононуклеаров смешивают с взвесью зритроцитов барана, центрифугируют и инкубируют, После суспендирования снова центрифугируют суспензию и инкубируют. Осадок суспендируют, каплю суспензии помещают на предметное стекло и подсчитывают количество лим фоцитов с 3 и более прикрепившимися эритроцитами барана на 100 лимфоцитов, Точность способа повышается2 раза,1 табл.5 1 О 15 20 25 30 35 40 113Изобретение относится к медицине, а именно к исследованию биологических материалов человека и животных иммунологическими методами. Оно может .быть использовано в клинической иммунологии, хирургии, терапии идругих областях медицины в научноисследовательских, диагностическихи лечебных целях.Целью изобретения является повышение точности определения Т-лимфоцитов за счет выявления Т-лимфоцитов,на несущих Е-рецепторы,П р и м е р. Выделение мононуклеаров. 5 мл венозной крови стабилизируют гепарином (250 ед,/мл) и наслаивают на 3 мл раствора верографинфиколл (д=1,082 г/см ). После центрифугирования при 4008 в течение 40мин мононуклеары собирают пастеркойс поверхности раствора и трижды отмывают первый раз при 400 я 10 мин,второй - при 200 я 5 мин (в забуференном физрастворе) и третий - 200 я5 мин в среде 199, Клетки суспендируют в 1 мч среды 199, подсчитываютв камере Горяева и разводят средой6199 до концентрации 2,5 10 кл /мп.Приготовление эритроцитов баранаВенозную кровь барана хранят не более двух недель после забора с консервантом (157. от общего объема);используют трижды отмытые средой 199(первая и вторая отмывка при 200 я5 мин, третья - при 400 я 5 мин)эритроциты барана в виде 1 Е-ной суспензии,Розеткообразование, 0,2 мл суспензии мононуклеаров смешивают с 0,2 млвзвеси эритроцитов барана, центрифугируют 5 мин при 200 я, инкубируюто1,5 ч при 37 С, суспендируют энергичным встряхиванием пробирок до получения гомогенной суспензии (без видимых на глаз сгустков), вновь центрифугируют 5 мин при 200 я и инкубируютпри 4 С 1 бч. Перед подсчетом удаляют 0,2 мл надосадочной жидкости,осадок суспендируют осторожным покачиванием пробирок (обычно 10-15 движений), каплю полученной суспензиипомещают на предметное стекло и нак 59740 2 рывают покровным, При 300-400-кратном увеличении под воздушной иммерсией подсчитывают количество лимфоцитов с 3 и более прикрепившимися эритроцитами барана (розетки) на 100 лимфоцитов.В таблице приведены результаты исследования Т-лимфоцитов периферической крови здоровых людей и больных ревматоидным артритом, хирургическим сепсисом и перитонитом. Для сравнения приведем результаты исследования тех же образцов крови методом-прототипом и методом-аналогом,Предлагаемый способ во всех обследованных группах дает более высокие результаты определения количества Т-лимфоцитов (повышение количества Т-клеток при ревматоидном артрите недостоверно) по сравнению со способом-аналогом и способом-прототипом, которые почти в два раза отличаются друг от друга в случае сепсиса и перитонита (таблица). Метод розеткообразования для идентификации Т-лимфоцитов тем более точен, чем больший процент розеткообразующих клеток он выявляет, следовательно, предлагаемый способ примерно в два раза более точен, чем способ-прототип при исследовании здоровых и больных, и также в два раза более точен по сравнению со способом- аналогомпри исследовании больных сепсисом и перитонитом. Формула изобретения Способ определения Т-лимфоцитов,включающий смешивание мононуклеарныхклеток с эритроцитами барана, центрифугирование, инкубирование при 37ои 4 С, ресуспендирование и подсчетрозеткообразующих клеток, о т л и -ч а.ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения точности способа эа счет 50выявления Т-лимфоцитов не несущихЭЕ-рецепторы, после инкубирования прио37 С осадок клеток суспендируют ицентрифугируют.3 13597404Процентное содержание розеткообразующих клеток среди мононуклеаров здоровых и больных, определяемое разными методами Группа обследован- ных Количе ство наблюдений Способ розеткообразования Аналог Прототип Предлагаемый 61,3 2,92 30,9+1,98Р 0,0140,6+2,82 1 О 67,1+2, 13 Здоровые Р с 0,05 67,83,22 65,1+3,15 Р ) 0,05 30,0+5,25 Р0,01 35,3+4,17 Ревматоидныйартрит Р 0,05 25,14 3,20 52,4+4,45 Сепсис Р с 0,01 27,3:2,81 Р с 0,05 58,4+5,01 Перитонит Р с 0,05 Составитель Г.КрюковаРедактор Т.Парфенова Техред Л.Сердюкова Корректор И.Муска Тираж 776 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д.4/5 Заказ 6151/48 Производственно-полиграфическое предприятие г.ужгород, ул. Проектная,4 Примечание, Достоверность различий по сравнению с предлагаемым способом вычислена с помощью парного критерия 1: Стьюдента.