Способ определения индивидуальной чувствительности к левамизолу при ревматоидном артрите

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ КРЕВМАТОИДНОМ АРТРИТ(57) Изобретение отне, точнее к ревназначено для леч НИЯЕВАМИ ИДУАЛПРИ ЗОЛУ сит ици- редякмгии,тол ения омлог больных (РА) пу ески ли евматоидным артри ем выявления иман ами золу. Изобретение не, ет носится к диц мо бол ьдля ле ни ыть испольэоваых ревматоиднымем выявления и ртритом (РА) п нологическим м с хорошим прог о дом сре зом дляЦель их л торами. ие точтимул ечения имм повыш изобретеогноэа,1ся следующим о суще ст вл Способразом. огнозирования лече одбирают больных Р ктивности процесса й неэффективностью я ле 1-11 пред ечени ми эолом тепени ествую ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИНМПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(21) 4080572 (22) 20.06,8 (46) 30.01.8 (71) Институ СО АМН СССР (72) .В,С. Ши В.С. Кожевни (53) 615.375 (56) Авторск по заявке п 9 кл. С 01 Н 3 в частности к ревматолог.801455318 хорошим прогнозом для лечения иммуностимуляторами (например, левамизолом). Цель изобретения - повьппение точности прогноза. Для этого выделяют мононуклеарные (МНК) клетки периферической крови, делят их на несколько проб. В одной из них определяют1 кол-во восстановленных Е-розеткообразующих клеток (вЕ-РОК). В других пробах определяют активность спонтанных и индуцированных ФГА Тс (фитогемагелютининов Т-супрессоров) в присутствии левамизола. При повышении кол-ва супрессоров и увеличенном содержании Ве-РОК по сравнению с показателями у здоровых лиц и при снижении их кол-ва под действием левами- зола на 47 и более делают вывод об индивидуальной чувствительности к ледругими баэисными препаратами или их непереносимостью.Мононуклеарные клетки (МНК) периферической крови человека выделяют центрифугированием гепаринизированной веноэной крови в градиенте плотности (1,077 г/мл) фиколла-верографина. Собранные с интерфаэы МНК трижды отмывают фосфат-эабуференным физиологическим раствором (рН 7,2-7,3) и готовят клеточную суспенэию в культуральной среде. Выход МНК в среднем составляет 1,2 х 10 клеток из 1 мл6крови. Их разделяют на несколько проб. В одной иэ них определяют изз145начальное количество вЕ-РОК, Для этого свежие эритроциты барана (ЭБ) трех- кратно отмывают в физиологическом растворе, далее готовят 17-ную суспензию. Смесь ЭБ (0,2 мл) и МНК (0,2 мл 2,5 х 1 О в 1 мл) центрифугируют при 1000 об/мин 5 мин, инкубируют 90 мин при 37 С, а затем 16 о18 ч при 4 С. Затем надосадок сливают, клетки ресуспендируют и подсчитывают процентное содержание вЕ-РОК, В других пробах определяют активность спонтанных и индуцированных ,ФГА Тс. Культивирование клеток осу,ществляют в герметически закрытых ;стеклянных флаконах из-под пенициллина. Взвеси МНК (1 х 10 клеток/мл ,в среде 199+20 сыворотки 1 Ч группы) соответственно преинкубируют 24 ч, ;инкубируют ФГА 10 мкг/мл 72 ч. Затем первичную культуру лимфоцитов обрабатывают 30 мин митомицином С.Затем лимфоциты отмывают средой , 199 и вносят в культуры аллогенных доноров при соотношении клеток 1:1, Вторичные культуры стимулируют ФГА10 мкг/мл. Интенсивность пролиферации учитывают через 72 ч по включении Н -тимидина (удельная активность 15-25 Ки/моль) в нуклеопроте(идные фракций клеток, Н-тимидиндобавляют за 4 ч до окончания куль тивирования в конечной концентрации ; 4 мКи/мл на флакон, После окончаниякультивирования клетки отмывают однократно холодным фосфат-забуференнЫм физиологическим раствором, инкубируют в течение ночи в 57-ном (вес/ ,/объем) растворе трихлоруксусной кислоты. Нерастворимые фракции переносят на миллипоровые фильтры с диаметром пор 0,23 или 0,4 мкм, которые затем помещают в сцинтилляционнь 1 е виалы. Радиоактивность экспериментального материала подсчитывают в сцинтилляционном счетчике Маг 1-30.Параллельно в пробах МНК определяют чувствительность к левамизолу. Для этого предварительно МНК больных РА инкубируют с 1 мкг/мл левамизола (2,57 х 10 клеток в 1 мл среды 1996в течение 1,5 ч при 37 С). Затем определяют значения тех же показателей под действием левамизола.При изначальном содержании вЕ" РОК более 37,57 и снижении их под действием левамизола не менее чем на 47, повышении активности спонтанных 5318 4 Тс не менее чем на би индуцированных ФГА Тс не менее чем на 5,57 считают целесообразным назначение левамизола.П р и м е р 1, Больная Н., 27 лет,Клинический диагноз: классический ревматоидный артрит, серопозитивный,медленно прогрессирующее течение, активность 11, рентгенологическая стадия 111. НФ,Содержание вЕ-РОК 557, изменениесодержания под влиянием левамизола1 п ч 1 гго 327, Изначальная активностьнеспецифических Тс: спонтанные 147.,индуцированные ФГА 157., изменение активности Тс под действием левамизолап ч 1 гго: спонтанные 377, индуцированные ФГА,257 Сравнение полученныхзначений с нормативными свидетельствовало о том, что содержание вЕ-РОКу данной больной повышено, а активность неспецифических Тс снижена. Подвлиянием левамизола 1 п чГго происходит достоверное изменение показателей, их суммарная информативностьравна 13,3. Отсюда вероятность положительного клинического эффекта убольной составляет 957, при вероятности отрицательного эффекта 57, назначение левамизола оправдано. Больной назначен декарис по 150 мг 1 разв неделю, что привело к уменьшениювыраженности суставного синдрома втечение года, начиная с 4 мес лечения, снижению активности воспалительного процесса и замедлению прогрессирования эрозивного артрита.П р и м е р 2. Больная С 39 лет.Клинический диагноз: определенныйревматоидный артрит, серопозитивный,медленно прогрессирующее течение, активность 1, рентгенологическая стадия 11, Нф. Содержание вЕ-РОК 577,изменение содержания под влияниемлевамизола гп чегго 307. Активностьнеспецифических Тс:спонтанные О ,индуцированные ФГА 07. Изменение активности Тс под действием левамизолап чегго: спонтанные б 77, индуцированные ФГА 287. Сравнение полученныхзначений с нормативными свидетельствовало о том, что содержание вЕ-РОКу этой больной повышено, а активностьТс равна О. Под влиянием левамизоладп чегго изменились значения показателей, их суммарная информативностьравна 13,3; назначение левамизола оправдано, Клинически наблюдался поло 5 10 15 20 25 30 35 ао 45 50 55Формула изобретения Составитель В. ЛитовченкоТехред М.Дидык Корректор М. Самборская Редактор Л. Пчолинская Заказ 7452/53 Тираж 88 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 5 145 жительный эффект в течение 1,5 лет получения больной декариса по 150 мг в неделю.П р и м е р 3. Больная Д 24 года, Клинический диагноз: ревматоидный артрит, серопозитивный, медленно прогрессирующее течение, активность 11, рентгенологическая стадия 11, НФ.Содержание вЕ-РОК 17 , которое под влиянием левамизола п у.го повысилось до 19 . Активность неспецифических Тс: спонтанные 11 , индуцированные ФГА 15 , Под влиянием левамизола гп чдГго изменения их активности не произошло. Сравнение полученных значений показателей с нормативными свидетельствовало о том, что содержание вЕ-РОК и .активность Тс в данном случае понижены и под действием левами- зола гп 1 гго не произошло достовер.ного изменения этих показателей. Следовательно, вероятность того,.что лечение левамизолом у данной больной неэффективно, составляет 95Назначение препарата не оправдано.Действительно, прием больной дека- риса по 150 мг привел не к уменьшению признаков суставного синдрома, а к активизации процесса. Больная после 4 мес приема левамизола была вынуждена увеличить дозуметиндола до 5318 66 таблеток в сутки, через 2 мес декарис был отменен как неэффективный.Таким образом, предлагаемый комплекс иммунологических показателей обладает высокой прогностической мощностью распознавания эффективности лечения левамизолом (95%-ная вероятность прогноза по сравнению с 78% по прото типу). Способ определения индивидуаль 1 б ной чувствительности к левамизолупри ревматоидном артрите, включающийзабор крови, выделение мононуклеаров,определение числа спонтанных и фитогемагглютийин индуцированных Т-суп 2 О рессоров в присутствии левамизола,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью повышения точности способа,в крови дополнительно определяют количество восстановленных Е-розеткооб 25 разующих клеток и при повышении количества супрессоров и увеличенномсодержании восстановленных Е-розеткообразующих клеток по сравнению создоровыми лицами и при снижении ихЗо количества под действием левамизолана 4% и более определяют наличие индивидуальной чувствительности клевамизолу,