Способ выявления возбудителя при гнойно-воспалительных процессах

УДИТЕЛЯПРОЦЕССАХк областльзовано в ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИПРИ ГКНТ СССР АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Оренбургский гомедицинский институт(54) СПОСОБ ВЬИВЛЕНИЯ ВОЗБПРИ 1"НОИНО-ВОСПАЛИЕЛНЫХ(57) Изобретение относитсямедицины и может быть испо при бактерпологическои диагностике гнойно-воспалительных заболеваний: Цель изобретения - повышение точнос ти дифференциации этиологически значимых микроорганизмов от микроорганизмов-ассоциантов. Для осуществления способа исследуемый материал высевают на питательные среды, выделяют чистые культуры. Отбирают грамотри" цательные микроорганизмы и определя" ют у них антйлизоцимную активность. Если уровень последней достигает 6 мкг и выше, данный микроорганизм оценивают как возбудительДалее иден тифицируют культуры, определяют вид микроорганизма и назначают соответстующее лечение заболевания; 1 табл.Изобретение относится к медицине имоя(ет быть использовано при бактер ологической диагностике гнойноВОСПаЛИтЕЛЬНЬтвк ЗабОЛЕВаннй.Цель изобретения - повышение точности диФФеренциации этиологически . значимых микроорганизмов от микрооргнизмов-ассоциантов.П р и м е р 1 Лри бактериологи ч ском исследовании мочи у больной м тодом количественных разведений о наружены колонии двух типов: колои первого типа в количестве 4микр,кл./мл мочи, колонии второ- типа в количестве 5 10 микр.кл./мл чи. Низкие показатели бактериурии позволяют подтвердить участие выденных микроорганизмоь в развитии елонеФрита. Через 18 ч на скошен м агаре получают чистые культуры колоний обоих тинов, При микроскоровании обе культуры грамотрицальные палочки. На этом .тапе уста-. вленич этиологически значимого н 1 т н кроорганизма применяют метод опред ления у культур антилизоцимной активности. Из суточных агаровых куль- Гтур исследуемых микробов первого и второго типов готовят взвеси на йи. - -О Ф 4 тном буФере рН 62 с оптической пюотностью 0,05, определяемой на Ф 4 КМ, К 1 мл каждой .:;робы исслед 9 емой микробной взвеси добавляют и 1 мл раствора лизоцима в концен,3 т т ации 20 мкг/мл, так что конечная к нцентрация лизоцима в пробе составл ет О м(г/мл. Смесь выдерживают 1,ч при 37 С и затем центриФугируют пи 6000 об/мин 5 мин и отделяют над Отладочную жидкость. К 0,6 мл надоса-" дочной жидкости из каждой пробы до бавляют по 0,4 мл ФосФатного буФера и по 2 мл взвеси индикаторной куль- ттРЫ МИКРОКОККа, ПРЕДВаРИтЕЛЬНО ПОД- в;ргнутсго холодовому шоку", Лробы помещают в термостат,. выдерживают 1 Й мин при 37 С и затем определяют Оптическую плотность. По калибровоч-: ндй кривой определяют остаточный лизоцим в пробах.50В пробе культуры первого типа концентрация остаточного лизоцима 7 мкг, т,е, ее антилизоцимная активность равна 3 мкг (10-7=3), а впро 55 бе культуры второго типа остаточный лйзоцим не определялся, т.е, ее антилизоцимная активность равна 10 мкг. ПО предлагаемому способу оценки вторая культура Оценена как истинный возбудитель пиелонеФрита, первого типа - как представитель транзиторной микроФлоры, На следующие сутки при исследовании биохимических свойств культура второго типа идентиФицирова". на как Ргоенз тп 1 гаЬ 111 з, а первоготипа - как Езспегхсйа со 11, В последующем этиологическая роль протея подтверждена повторностью его выделения иэ мочи больной и в РПГА с парными сыворотками, а контаминация мочи эшерихиями доказана Отрицательным результатом РПГА и отсутствием выделения Е,со 1 х при трехкратном бактериологическом исследованни зочи.Л р и м е р 2, Из ожоговой раны больного при первом бактериологическом исследовании выделены два ассоци" анта - вульгарный протей с антилизоцимной активностью 10 мкг и конценйтраттией в 10 кое/мл и т(-тшеттная га лочка с антилизоцимной активностью 1 мкг и концентрацией 10кое/мп, При последующем трехкратном бактериологическом исследовании с интервалом в 5 дней протей определен во всех исследованиях. Концентрация кишечной палочки в исследуемом материале быс-",:о уменьшалась к при третьем псследованьти этот вид бактерий не определялся. Следовательно, возбудителем данного гнойыо"восп-".чительногопроцесса является штамм в 1 тльгарногопротея.Л р и и е р 3. Из ожоговой раны больного при бйктериологичеком ис" следовании выделены два ассоцианта мирабипьный протей с антилизоцимной активностью 9 мкг и клебсиелла пневмонии с антнлизоцимной активностью 3 мкг При последующих бактериологи" ческих исследованиях концентрация клебсиглл уменьшается. В тс же время бактериальная обсемененность очага протеем нарастает, дости 1 нув к третьему дню 10 кое/мл по сравнению с исходной величиной 10 кое/мл. Это подтверждает этиологическую роль мирабельного протея.Сравнительная характеристика методов выявления истинного возбудителя гнойно-воспалительных заболеваний представлена в таблице,Способ может быть использован для диФФеренциации возбудителя .от существующей микроФлоры при стаФилококковом бактерионосительстве.48 50 96 Ж + 2,7 П р и м е р 4. У больного сахарным диабетом со слизистой носа при лосеве на желточно-солевой агар методом серийных разведений обнаружены колонии двух типов: первого типа - круглые, выпуклые с палевым пигментом и ареолом лецитовителлазной активности в количестве 10 кое/тампон, второго4типа - круглые беспигментные, без ареола лецитовителлазы в количестве 10 кое/тампон, Через, 18 ч инкубации на скошенном агаре получены чистые культуры первого и второго типов. Из суточных агаровых культур готовят взвеси на фосфатномбуфере (ри 6,2) с оптической плотностью 0,05. 1 мл каждой пробы микробной взвеси смешивают с 1 мл раствора лизоцима в концентрации 20 мг/мл. Смеси инкубируют в термостате 1 ч и затем отделяют надосадочную жидкость, содержащую неинактивированный лизоцим, центрифугированием в течение 5 мин при 6000 об/мин. К 0,6 мл надосадочной жидкости из каждой пробы добавляют по 0,4 мл АосАатного буАера и по 2 мл взвеси индикаторной культуры микро- кокка (оптической плотности 1,2). После инкубации в течение 10 мин прио37 С определяют оптическую плотность проб на ФЭКИ в кювете шириной 5,08 мм при зеленом светоАильтре. Остаточный лизоцим в пробах определяют по калибровочной кривой.По результатам исследования обнаружено, что концентрация остаточного лизоцима в пробе культуры первого типа 6 мкг, т.е. антилизоцимная ак" тивность культуры первого типа 4 мкг, а в пробе культуры второго типа концентрация остаточного лизоцима 7 мкг, т.е. ее антилизоцимная активность 3 мкг. При изучении свойств выделен-, ных культур (плазмокоагулаза, анаэробная Аерментация маннита и др,) культура первого типа идентиАициро- "вана как золотистый стаАилококк, авторого типа - как эпидермальный стафилококк. Таким образом, культурапервого типа (золотистый стафилококк)расценена как истинный, резидентный,носительский штамм, а эпидермальныйстафилококк - как представитель по О сторонней микроАлоры. Резидентный характер бактерионосительства золотистого стафилококка был подтвержденмногократными повторными высевами сослизистой носа идентичных стафилокок ков (Ааготип 3 С), при этом титр бактериальной обсемененности возрастал,достигая 10 -10 кое/тампон.6Таким образом, использование способа позволит повысить точность диф О ференциации возбудителя, что в своюочередь позволит выбрать эффективныелечебные препараты и ускорить выздо"ровление больных, кроме того, использование способа позволит отдифферен цировать возбудитель от сопутствующей микроАлоры при стафилококковомбактерионосительстве, что позволитпроводить .целенаправленную санациюбактерионосителей.ЗОФормула изобретения Способ выявления возбудителя пригнойно-воспалительных процессах путем 35просева исследуемого материала на питательные среды с последующим выделе" нием и идентификацией чистых культур, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности дифференци" 40 ации этиологически значимых микроорганизмов от микроорганизмов-ассоциантов, у выделенных грамотрицательных микроорганизмов определяют анти" лизоцимную активность и выявляют возбудитель при уровне антилизоцимной 45активности 6 мкг и выше.