Способ определения 3, 4, 5-тригидроксибензойной кислоты

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕРОКСИБЕНЗОЙНОЙ КИ. тической химии, а ЛЕНИЯ 3,4 5-ТРИГИД СЛОТЫтносится к аналиименно хроматогр ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПОДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ ОПИСАНИЕ К АВТОРСНОМУ СВ(71) Ленинградский технологическинститут имЛенсовета(56) Хроматография на бумаге, М,ИЛ, 1962, с.304,310,Авторское свидетельство СССРУ 1273790. фическому определению 3,4,5-тригидроксибензойной кислоты в присутствии таннина, Для этого анализируемую пробу растворяют в ацетоново-водном растворе и полученный раствор капипляром наносят на хроматографическую бумагу РЮи опускают в водно,4-диоксановый раствор (45-4511 для развития хроматограммы. Пики проявляют 0,02-0,033-ным раствором бромхлорфенолового синего. По высоте образую". щихся пиков определяют содержание 3,4,5-триг)щроксибензойной кислоты в образце. Способ более чувствителен, селективен, менее длителен и позволяет определять 3,4,5-тригидроксибен- р зойную кислоту с меньшей погрещно стью, 2 табл.Изобретение относится к аналитической химии, в частности к определенйю кислот ароматического ряда методрм бумажной хроматографии, и может использоваться для определения 3,4,5- тригидроксибензойной кислоты в химических и аналитических лабораториях.Цель изобретения - повьппение точности, чувствительности и селективно сги.Способ осуществляют следующим обрэом.Навеску образца, содержащего триг дроксибензойную кислоту 3,4,5-ТГОБК 15 астворяют в смеси (4:1), отбирают з полученного раствора аликвотную асть и наносят ее на стартовую линию роматографической бумаги, развивая атем хроматограмму элюентом, предтавляющим собой смесь вода - 1,4-диксан, при объемном соотношении комонентов (35-45):1. Подъем фронта люента превращает пятно в пик, высо- а которого пропорциональна конценрации 3,4,5-тригидроксибензойной. килоты в пробе. Высота подъема Фронта люента должна быть на 20 мм выше сах высоких ников, что обеспечивает орошее формирование пиков. После30 одъема жидкой фазы хроматограмму одсушивают на воздухе и пики проявлят 0,02-003%-ным раствором бромхлоренолового синего. Высоту окрашенного ика измеряют от линии старта до верфины пика с помощью циркуля и линейки 35точностью +0,1 мм. По полученныманным, используя метод наименьших вадратов, строят калибровочный. граик в координатах концентрация три идроксибензойной кислоты 3,4,5 (мкг/ коробе) - высота пика (мм), по которому и определяют содержание кислоты в анализируемых пробах.Для построения калибровочного графика на хроматографическую бумагу без предварительной обработки на стартовую линию (10 мм от линии погружения) наносят 10 проб стандартных растворов с содержание 3,4,5-тригидроксибензойной кислоты 0,90", 2,0; 3,60; 5,40 50 и 6,30 мкг/пробе (по 2 пробы каждой концентрации). Хроматограмму высушивают на воздухе и опускают до линии погружения в кювету с элюентом вода - 1,4-диоксан (40:1). После подъема 55 фронта элюента хроматограмму вынимают из кюветы, высушивают на воздухе иокрашивают 0,02-0,03 -ным раствором цветореагента, Измеряют высоты пикови строят калибровочный график.В табл,1 приведены результаты определения 3,4,5-тригидроксибензойнойкислоты (3,4,5-ТГОК) в стандартныхрастворах.П р и м е р 1. Для анализа промышленных образцов готовят раствор с кон- эцентрациями 3,4,5-тригидроксибензойной кислоты порядка 2,40-3,0 мг/мл,Для этого навеску в количестве 5,0 мграстворяют в 20 мл ацетона в мернойколбе и доводят до 25 мл водой, концентрация анализируемого раствора3,0 мг/мл или 4,50 мкг/пробе, Нахроматограмму рядом с пробами, предназначенными для построения калибровочного графика, капилляром емкостью0,0015 мл наносят 3-5 проб анализируемого раствора. Хроматограмму высушивают на воздухе и опускают до линиипогружения в кювету с водно,4-ди"оксановым раствором (40:1). Послеразвития хроматограммы пики проявляют 0,025%-ным раствором бромхлорфенолового синего. Измеряют высоты пиков,определяют содержание кислоты в образце, пользуясь калибровочным граФиком, рассчитанным по методу наи.-.меньших квадратов.В табл,2 представлены результатыопределения содержания кислоты в ана"лизируемых объектах,П р и м е р 2. Раствор, содержащий3,4,5-тригипроксибензойную кислотув количестве З,О мг/мл или 4,50 мкг/пробе, наносят на стартовую линиюхроматографической бумаги капилляромемкостью 0,0015 мл (3-5 проб). Послеразвития хроматограммы в смеси вода 1,4-диоксан (35:1) ее высушивают навоздухе и пики проявляют 0,025-нымраствором реактива, Измеряют высотыпиков и определяют содержание кислотыв образце (4,49 мг/пробе) по калибровочному графику.П р и м е р 3. 3-5 проб раствора,содержащего 3,0 мг/мл (4,5 мкг/пробе)кислоты, наносят на стартовую линиюхроматографической бумаги посредст-вом капилляра емкостью 0,0015 мл. Хроматографируют в смеси вода 1,4-диоксан (45; 1), Развитую хроматограммувысушивают и пикк проявляют 0,025 -нымраствором цветореагента. Измеряют высоту ников н определяют содержаниекислоты в образце (4,54 мкг/пробе) покалибровочному графику.мм исоответстандарт 4.,49 иопределеРасчетнаявысота пиков, мм ков мм 0,90 9,8 9,82 16., 03 2,70 3,60 19) 13 25,35 28,45 5,40 28,6 Таблица 2 Измеренная выогеш"ость Рассчитано 3,4,5-ТГОБК по калибровочному графику, мкг/пробе Введено3,4,5 ТГОБК,мкг 1 проб е сота пиков, мм елеияф % 22,4 4,54 4,50 4,50 22,2 4,49 2,7.4,52 22,3 4,50 П р и и е р 4, На стартовую линию хроматографической бумаги наносят 3-5 проб анализируемого раствора (4,50 мкг/пробе кислоты) рядом с пробами стандартных растворов. Хромато 5 графируют в смеси вода - 1,4-диоксан (40 ф 1), После развития хроматограммы ее высушивают и пики проявляют 0,03%- ным раствором бромхлорфенолового синего. По среднему значению высоты пиков рассчитывают содержание кислоты в образце. Содержание ее 4,49 мкг/пробе.П р и м е р 5. Наносят 3-5 проб анализируемого раствора рядом с пробами, предназначенными для построения калибровочного графика (концентрация кислоты 4,50 мкг/пробе). Хромауографируют в кювете в подвижный Фазе вода - 1,4-диоксан (40:1), После развития хроматограммы, ее высушивают и проявляют пики 0,02%-ным раствором бромхлорфенолового синего, По среднему значению высот полученных 25 пиков определяют содержание кислоты в образце по калибровочному графику, Соцержание кислоты 4,52 мкг/пробе.й р и м е р 6. Хроматограмму развивают в смеси вода - 1,4-диоксан (50:1). Пики проявляют 0,025%-ным раствором цветореагента. Вершины пиков кислоты размыты и не имеют четких границ. Количественное определение невозможно.П р и м е р 7. Пики проявляют 35 0,025%-ным раствором цветореагента. Средняя высота пиков кислоты 21,8 мм, Погрешность определения более 5%,П р и м е р 8. Раствор, содержащий 3,4,5-тригидроксибензойную кислоту и таннин в равных количествах по 75 мг каждого (1:1) готовят, раство-, ряя навеску (150 мг) в 20 мп ацетона, и доводят до 25 мл водой. На стартовую линию наносят 3-5 проб стандарт ного раствора кислоты (приготовление раствора по примеру 2) (3,0 мг/мл или 4,50 мкг/пробе) и 3-5 проб раствора смеси кислоты и таннина. После развития хроматограммы в смеси вода - 50 1,4-диоксан (40: 1) ее вынимают из кюветы, высушивают на воздухе и проявляют 0,025%-ным раствором бромхлорфенолового синего. Измеряют высоты пиков и определяют содержание кисло ты по калибровочному графику, Средние высоты пиков кислоты и таннина при вышеуказанных условиях 22,2 22,4 мм соответственно, что ствует содержанию кислоты в ном и исследуемом растворах 4,54 мкг/пробеПогрешность ния не превышает 2,7%,Ф о р м у л а изобретения Способ определения 3,4,5-тригидроксибензойной кислоты путем хроматографирования анализируемой смеси на бумаге в подвижной Фазе, представляющей собой смесь вода - органический растворитель, с последующим детекти" рованием развитой хроматограммы цветореагентом, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности, чувствительности и селективности, используют в качестве органического растворителя 1,4-диоксан при объемном соотношении 1,4-диоксан : вода, равном 1:35-45, а в качестве цветореагента 0,02-0,03%-ный раствор бромхлорфенола синего.Таблица Выведено Средняя 3,4,5-ТГОБК, измеренная мкг/пробе высота пи